- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
1. IntroductionProteins are essenti
1. Introduction
Proteins are essential components of the diet for human nutrition as a source of amino acids (AAs) used for functional and tissue protein synthesis. It is estimated that the world has a shortage of millions of tons of proteins every year. Unfortunately, a large number of protein resources are underutilized. A typical example of these is corn gluten meal (CGM), a by-product of the corn wet-milling process, which contains 60–71% protein [1], but has limited use in the human food industry due to its water insolubility. It was reported that the solubility of CGM can be increased by acid hydrolysis, alkaline hydrolysis or emzymolysis [2] and [3]. Among all the hydrolysis methods, enzymolysis of proteins is regarded as the most appropriate method because of its controllable mild reaction conditions, large scale commercial availability, and high product quality [4], [5] and [6]. Nevertheless, the traditional enzymolysis has many disadvantages such as low utilization rate of the enzyme, low conversion rate of the substrate, long enzymolysis time, and energy-extensive consumption [7] and [8]. This is largely due to the unsuitable conformation of protein which makes it difficult for the enzyme to attack the enzyme-susceptible bonds of a protein. Therefore, developing a more efficient enzymolysis method to overcome the drawbacks above is in great demand.
2. Materials and methods
2.1. The ultrasonic pretreatment of CGM
Raw material CGM which contains 15.4% starch and 58.6% protein was purchased from FenDa Starch Co. (Pizhou, Jiangsu, China), the part passed through a 70-mesh screen (particle size of 0.21 mm) was used as experimental material. Different volume (100, 150, 200, 300, 400 mL) of CGM suspensions with the same content (5%, w/v) of protein were sealed in high pressure resistance bags and pretreated with the SFPU equipment (internal dimensions 362 mm × 294 mm × 502 mm, Shangjia Biotechnology Co., Wuxi, Jiangsu, China) of which the maximum output acoustic power was 600 W per single plate determined by the calorimetric method [30] at the temperature of 30 °C using water as medium. The pretreatment conditions were obtained from our previous study and as follows: combination of ultrasonic sweeping frequency (28 ± 2) kHz (upper plate) and (68 ± 2) kHz (bottom plate), temperature of the solution (30 ± 2) °C, pulsed on-time 10 s and off-time 3 s, cycle time of the sweeping frequencies 500 ms, duration 40 min and power density 80 W/L. The control was carried out with a magnetic stirring instead of ultrasound at 30 °C for 40 min at a speed of 100 r/min.
2.2. Enzymolysis of CGM
The enzymolysis apparatus consisted of a digital thermostat water bath (DK-S26, Jinghong experimental apparatus Co., Shanghai, China), a pH meter (FE-20, Mettler Toledo Co., Shanghai, China) and an impeller-agitator (JJ-1, Zhongda instrument Co., Jintan, Jiangsu, China) at a speed of 100 r/min. The ultrasonic pretreated protein solutions were diluted to 500 mL to obtain different substrate protein concentrations (5.84, 7.30, 11.68, 14.60 and 23.36 g/L), after 10-min preheating at certain temperature (20, 30, 40 and 50 °C), the pH of the solution was adjusted to a certain value (7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0 and 9.5) and the Alcalase (0.59, 0.73, 1.17, 1.46 and 2.34 g/mL) with an activity of 23,400 U/mL and mass density of 1.17 g/mL was added to start the enzymolysis. The enzymatic hydrolysis time was 90 min, during which the pH was maintained by continuous addition of 0.5 M NaOH.
Alcalase, which is an industrial- and food-grade enzyme produced by a selected strain of Bacillus licheniformis, and whose main component is subtilisin Carlsberg [24], has been used as a model enzyme to hydrolyze CGM [25], [26] and [27]. In the current research, before CGM was hydrolyzed by Alcalase, the CGM was pretreated by MPU. According to the results of our previous study [28], the sweeping frequency and pulsed ultrasound (SFPU) equipment ( Fig. 1a) was used in the present research. The sweeping frequency operation (f0 ± δ kHz) refers to the sweeping frequency cycle of increasing period from f0 − δ to f0 + δ kHz and decreasing period from f0 + δ to f0 − δ kHz with the same linear speed in the form of an isosceles triangle ( Fig. 1b), and the pulsed operation indicates that ultrasound is generated in a pulsed mode with an on-time and an off-time cycle. Compared with classical ultrasound technology, the SFPU has many advantages such as uniform energy distribution and the ease of resonate of treated material. Moreover, the cavitation yield of multiple frequencies operation is higher because the implosion of the cavitation bubbles coming from lower frequency irradiation can provide new cavitation nuclei not only for itself, but also for the other ultrasound irradiation [29]. Accordingly, this paper investigated the effects of MPU pretreatment on the enzymatic hydrolysis of CGM under different substrate and enzyme concentrations, pH, and temperatures. Furthermore, the effects of MPU pretreatment on the kinetic and thermodynamic parameters of enzymolysis of CGM were studied.
Proteins are essential components of the diet for human nutrition as a source of amino acids (AAs) used for functional and tissue protein synthesis. It is estimated that the world has a shortage of millions of tons of proteins every year. Unfortunately, a large number of protein resources are underutilized. A typical example of these is corn gluten meal (CGM), a by-product of the corn wet-milling process, which contains 60–71% protein [1], but has limited use in the human food industry due to its water insolubility. It was reported that the solubility of CGM can be increased by acid hydrolysis, alkaline hydrolysis or emzymolysis [2] and [3]. Among all the hydrolysis methods, enzymolysis of proteins is regarded as the most appropriate method because of its controllable mild reaction conditions, large scale commercial availability, and high product quality [4], [5] and [6]. Nevertheless, the traditional enzymolysis has many disadvantages such as low utilization rate of the enzyme, low conversion rate of the substrate, long enzymolysis time, and energy-extensive consumption [7] and [8]. This is largely due to the unsuitable conformation of protein which makes it difficult for the enzyme to attack the enzyme-susceptible bonds of a protein. Therefore, developing a more efficient enzymolysis method to overcome the drawbacks above is in great demand.
2. Materials and methods
2.1. The ultrasonic pretreatment of CGM
Raw material CGM which contains 15.4% starch and 58.6% protein was purchased from FenDa Starch Co. (Pizhou, Jiangsu, China), the part passed through a 70-mesh screen (particle size of 0.21 mm) was used as experimental material. Different volume (100, 150, 200, 300, 400 mL) of CGM suspensions with the same content (5%, w/v) of protein were sealed in high pressure resistance bags and pretreated with the SFPU equipment (internal dimensions 362 mm × 294 mm × 502 mm, Shangjia Biotechnology Co., Wuxi, Jiangsu, China) of which the maximum output acoustic power was 600 W per single plate determined by the calorimetric method [30] at the temperature of 30 °C using water as medium. The pretreatment conditions were obtained from our previous study and as follows: combination of ultrasonic sweeping frequency (28 ± 2) kHz (upper plate) and (68 ± 2) kHz (bottom plate), temperature of the solution (30 ± 2) °C, pulsed on-time 10 s and off-time 3 s, cycle time of the sweeping frequencies 500 ms, duration 40 min and power density 80 W/L. The control was carried out with a magnetic stirring instead of ultrasound at 30 °C for 40 min at a speed of 100 r/min.
2.2. Enzymolysis of CGM
The enzymolysis apparatus consisted of a digital thermostat water bath (DK-S26, Jinghong experimental apparatus Co., Shanghai, China), a pH meter (FE-20, Mettler Toledo Co., Shanghai, China) and an impeller-agitator (JJ-1, Zhongda instrument Co., Jintan, Jiangsu, China) at a speed of 100 r/min. The ultrasonic pretreated protein solutions were diluted to 500 mL to obtain different substrate protein concentrations (5.84, 7.30, 11.68, 14.60 and 23.36 g/L), after 10-min preheating at certain temperature (20, 30, 40 and 50 °C), the pH of the solution was adjusted to a certain value (7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0 and 9.5) and the Alcalase (0.59, 0.73, 1.17, 1.46 and 2.34 g/mL) with an activity of 23,400 U/mL and mass density of 1.17 g/mL was added to start the enzymolysis. The enzymatic hydrolysis time was 90 min, during which the pH was maintained by continuous addition of 0.5 M NaOH.
Alcalase, which is an industrial- and food-grade enzyme produced by a selected strain of Bacillus licheniformis, and whose main component is subtilisin Carlsberg [24], has been used as a model enzyme to hydrolyze CGM [25], [26] and [27]. In the current research, before CGM was hydrolyzed by Alcalase, the CGM was pretreated by MPU. According to the results of our previous study [28], the sweeping frequency and pulsed ultrasound (SFPU) equipment ( Fig. 1a) was used in the present research. The sweeping frequency operation (f0 ± δ kHz) refers to the sweeping frequency cycle of increasing period from f0 − δ to f0 + δ kHz and decreasing period from f0 + δ to f0 − δ kHz with the same linear speed in the form of an isosceles triangle ( Fig. 1b), and the pulsed operation indicates that ultrasound is generated in a pulsed mode with an on-time and an off-time cycle. Compared with classical ultrasound technology, the SFPU has many advantages such as uniform energy distribution and the ease of resonate of treated material. Moreover, the cavitation yield of multiple frequencies operation is higher because the implosion of the cavitation bubbles coming from lower frequency irradiation can provide new cavitation nuclei not only for itself, but also for the other ultrasound irradiation [29]. Accordingly, this paper investigated the effects of MPU pretreatment on the enzymatic hydrolysis of CGM under different substrate and enzyme concentrations, pH, and temperatures. Furthermore, the effects of MPU pretreatment on the kinetic and thermodynamic parameters of enzymolysis of CGM were studied.
0/5000
1. บทนำโปรตีนเป็นส่วนประกอบสำคัญของอาหารโภชนาการมนุษย์เป็นแหล่งของกรดอะมิโน (AAs) ใช้สำหรับการทำงาน และการสังเคราะห์โปรตีนของเนื้อเยื่อ มีประเมินว่า โลกมีการขาดแคลนล้านตันของโปรตีนทุกปี อับ มี underutilized โปรตีนทรัพยากรเป็นจำนวนมาก ตัวอย่างทั่วไปเหล่านี้เป็นข้าวโพด gluten อาหาร (CGM), ผลพลอยได้ของข้าวโพดเปียกสีกระบวนการ ซึ่งประกอบด้วยโปรตีน 60-71% [1], แต่ถูกจำกัดการใช้ ในอุตสาหกรรมอาหารสัตว์เนื่องจาก insolubility ของน้ำ มีรายงานว่า สามารถเพิ่มการละลายของ CGM ไฮโตรไลซ์กรด ด่างไฮโตรไลซ์ หรือ emzymolysis [2] และ [3] ระหว่างวิธีทั้งหมดไฮโตรไลซ์ enzymolysis ของโปรตีนถือเป็นวิธีการที่เหมาะสมที่สุดเนื่อง จากเป็นปฏิกิริยาไม่รุนแรงสามารถควบคุมเงื่อนไข พร้อมใช้งานเชิงพาณิชย์ขนาดใหญ่ ผลิตภัณฑ์ที่มีคุณภาพ [4], [5] และ [6] อย่างไรก็ตาม enzymolysis แบบดั้งเดิมมีข้อเสียมากมายเช่นอัตราการใช้ประโยชน์ต่ำเอนไซม์ อัตราแลกเปลี่ยนต่ำกับพื้นผิว enzymolysis ยาว และปริมาณการใช้พลังงานอย่างละเอียด [7] และ [8] นี้เป็นส่วนใหญ่เนื่องจาก conformation ไม่เหมาะสมของโปรตีนซึ่งทำให้ยากสำหรับเอนไซม์เพื่อโจมตีพันธบัตรไวต่อเอนไซม์เป็นโปรตีน ดังนั้น พัฒนาวิธี enzymolysis มีประสิทธิภาพมากขึ้นเพื่อเอาชนะข้อเสียข้างต้นเป็นความดี2. วัสดุและวิธีการ2.1. pretreatment อัลตราโซนิกของ CGMCGM ซึ่งประกอบด้วยโปรตีนแป้งและ 58.6% 15.4% วัตถุดิบที่ซื้อจาก บริษัทแป้ง FenDa (Pizhou มณฑลเจียงซู จีน) ส่วนที่ผ่านหน้าจอตาข่าย 70 (อนุภาคขนาด 0.21 มม.) ถูกใช้เป็นวัสดุทดลอง ไดรฟ์ข้อมูลอื่น (100, 150, 200, 300, 400 mL) CGM พักกัน (5%, w/v) ของโปรตีนถูกปิดผนึกในถุงทนความดันสูง และอุปกรณ์ SFPU pretreated (ขนาดภายใน 362 มม. × 294 มม.× 502 mm, Shangjia เทคโนโลยีชีวภาพ Co. อู๋ซี มณฑลเจียงซู จีน) ของที่ สูงสุดที่แสดงผลระดับพลังงานได้ 600 W ต่อแผ่นเดียวตามวิธี calorimetric [30] ที่อุณหภูมิ 30 ° C โดยใช้น้ำเป็นสื่อ เงื่อนไข pretreatment ได้รับ จากการศึกษาก่อนหน้านี้ของเรา และเป็นดังนี้: ชุดความถี่กวาดอัลตราโซนิก (28 ± 2) kHz (แผ่นบน) และ (68 ± 2) kHz (แผ่นล่าง) อุณหภูมิของโซลูชัน (30 ± 2) องศา C พัลในเวลา 10 s และปิดเวลา 3 s รอบเวลาของความถี่กวาด 500 ms ระยะเวลา 40 นาทีและใช้พลังงานความหนาแน่น 80 W/L. ตัวควบคุมถูกดำเนินกับกวนแม่เหล็กแทนเครื่องอัลตราซาวด์ที่ 30 ° C ใน 40 นาทีที่ความเร็วของ 100 r/min2.2. Enzymolysis ของ CGMเครื่อง enzymolysis ประกอบด้วยน้ำน้ำควบคุมอุณหภูมิ (DK-S26 จิ่งหงทดลองเครื่องมือ Co. เซี่ยงไฮ้ จีน), เครื่องวัดค่า pH (FE-20, Mettler Toledo Co. เซี่ยงไฮ้ จีน) และการผลัก-agitator (เจเจ-1 ตรา Zhongda จำกัด Jintan มณฑลเจียงซู จีน) ที่ความเร็ว 100 r/min โซลูชั่นโปรตีน pretreated อัลตราโซนิกถูกผสมไป 500 mL เพื่อให้ได้พื้นผิวที่แตกต่างความเข้มข้นของโปรตีน (5.84, 7.30, 11.68, 14.60 และ 23.36 g/L), หลังจาก 10 นาที preheating อุณหภูมิบาง (20, 30, 40 และ 50 ° C), pH ของโซลูชันมีการปรับปรุงค่า (7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0 และ 9.5) และ Alcalase (คือ 0.59, 0.73 ความ 1.17 , 1.46 และ 2.34 g/mL) กิจกรรมของ 23,400 U/mL และความหนาแน่นมวลของ 1.17 g/mL เพิ่มเริ่มต้น enzymolysis ขณะเอนไซม์ในระบบไฮโตรไลซ์ถูก 90 นาที ที่ pH ถูกรักษา ด้วย 0.5 M NaOH เพิ่มอย่างต่อเนื่องAlcalase ซึ่งเป็นเอนไซม์อุตสาหกรรม และอาหารระดับการผลิต โดยต้องใช้ของ licheniformis คัดเลือก และมีส่วนประกอบหลักเป็น subtilisin Carlsberg [24] มีการใช้เป็นเอนไซม์รุ่น hydrolyze CGM [25], [26] [27] และ งานวิจัยปัจจุบัน ก่อน CGM ถูก hydrolyzed โดย Alcalase, CGM ถูก pretreated โดยตันตุ ตามผลการศึกษาของเราก่อนหน้านี้ [28], ความถี่กวาด และพัลซาวด์ (SFPU) อุปกรณ์ (Fig. 1a) ถูกใช้ในการวิจัยปัจจุบัน ความถี่การกวาด (f0 ±δ kHz) หมายถึงวงจรความถี่การกวาดของรอบระยะเวลาเพิ่มขึ้นจากδ− f0 ไป f0 + δ kHz และลดระยะเวลาจาก f0 + δ f0 −δไป kHz กับความเร็วเชิงเส้นเดียวกันในรูปของสามเหลี่ยมหน้าจั่ว (Fig. 1b), และการพัลบ่งชี้ว่า อัลตร้าซาวด์ที่ถูกสร้างในโหมดพัลมีเวลาและมีวงจรปิดเวลา เมื่อเทียบกับเทคโนโลยีอัลตร้าซาวด์คลาสสิก SFPU มีประโยชน์มากมายเช่นแจกจ่ายพลังงานสม่ำเสมอและ resonate บำบัดวัสดุได้อย่างง่ายดาย นอกจากนี้ จาก cavitation ผลตอบแทนการใช้ความถี่หลายเป็นสูง เพราะ implosion ฟอง cavitation มาจากวิธีการฉายรังสีความถี่ต่ำสามารถให้แอลฟา cavitation ใหม่ไม่เพียงแต่ สำหรับตัวเอง แต่ยัง สำหรับการอื่น ๆ ซาวด์วิธีการฉายรังสี [29] ตาม กระดาษนี้ตรวจสอบผลกระทบของการ pretreatment ตันตุบนไฮโตรไลซ์เอนไซม์ในระบบของ CGM ภายใต้พื้นผิวที่แตกต่างกัน และความเข้มข้นของเอนไซม์ pH และอุณหภูมิ นอกจากนี้ ได้ศึกษาผลกระทบของการ pretreatment ตันตุพารามิเตอร์เดิม ๆ และขอบของ enzymolysis CGM
การแปล กรุณารอสักครู่..
1.
บทนำโปรตีนเป็นส่วนประกอบที่สำคัญของอาหารเพื่อโภชนาการของมนุษย์เป็นแหล่งของกรดอะมิโน(AAS) ที่ใช้ในการสังเคราะห์โปรตีนทำงานและเนื้อเยื่อ มันเป็นที่คาดว่าโลกมีปัญหาการขาดแคลนล้านตันของโปรตีนทุกปี แต่น่าเสียดายที่มีจำนวนมากของทรัพยากรโปรตีน underutilized เป็นตัวอย่างของเหล่านี้เป็นอาหารตังข้าวโพด (CGM) ซึ่งเป็นผลพลอยได้จากกระบวนการข้าวโพดเปียกกัดซึ่งมีโปรตีน 60-71% [1] แต่มีการ จำกัด การใช้งานในอุตสาหกรรมอาหารของมนุษย์เกิดจากการไม่ละลายน้ำ . มีรายงานว่าการละลายของ CGM สามารถเพิ่มขึ้นโดยการย่อยสลายกรดไฮโดรไลอัลคาไลน์หรือ emzymolysis [2] และ [3] ในทุกวิธีการย่อยสลายที่ enzymolysis ของโปรตีนที่ถือได้ว่าเป็นวิธีที่เหมาะสมที่สุดเนื่องจากสภาพปฏิกิริยาอ่อนควบคุมความพร้อมในเชิงพาณิชย์ขนาดใหญ่และคุณภาพของผลิตภัณฑ์สูง [4] [5] และ [6] อย่างไรก็ตาม enzymolysis แบบดั้งเดิมมีข้อเสียมากมายเช่นอัตราการใช้ต่ำของเอนไซม์อัตราการแปลงต่ำของพื้นผิวที่เวลา enzymolysis ยาวและการบริโภคพลังงานที่กว้างขวาง [7] และ [8] นี้เป็นส่วนใหญ่เนื่องจากโครงสร้างของโปรตีนที่ไม่เหมาะสมซึ่งจะทำให้มันเป็นเรื่องยากสำหรับเอนไซม์ที่จะโจมตีพันธบัตรเอนไซม์ที่ไวต่อโปรตีน ดังนั้นการพัฒนาวิธีการที่มีประสิทธิภาพมากขึ้น enzymolysis ที่จะเอาชนะข้อบกพร่องดังกล่าวข้างต้นเป็นที่ต้องการสูง. 2 วัสดุและวิธีการ2.1 ปรับสภาพล้ำของ CGM ดิบวัสดุ CGM ที่มีแป้ง 15.4% และโปรตีน 58.6% ซื้อมาจากสตาร์ช จำกัด Fenda (Pizhou มณฑลเจียงซูประเทศจีน) ส่วนหนึ่งผ่านหน้าจอตาข่าย 70 (ขนาดอนุภาค 0.21 มิลลิเมตร) ถูกนำมาใช้ เป็นวัสดุทดลอง ปริมาณที่แตกต่างกัน (100, 150, 200, 300, 400 มิลลิลิตร) สารแขวนลอย CGM ที่มีเนื้อหาเดียวกัน (5% w / v) ของโปรตีนที่ถูกปิดผนึกในถุงต้านทานแรงดันสูงและปรับสภาพด้วยอุปกรณ์ SFPU นี้ (ขนาดภายใน 362 มิลลิเมตร× 294 × 502 มมมม Shangjia เทคโนโลยีชีวภาพ จำกัด อู๋ซีมณฑลเจียงซูประเทศจีน) ซึ่งกำลังขับสูงสุดอะคูสติกเป็น 600 W ต่อจานเดียวคำนวณโดยวิธีแคลอรี [30] ที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสโดยใช้น้ำเป็นสื่อกลาง เงื่อนไขการปรับสภาพที่ได้รับจากการศึกษาก่อนหน้าของเราและต่อไปนี้: การรวมกันของอัลตราโซนิกความถี่กว้าง (28 ± 2) เฮิร์ทซ์ (แผ่นบน) และ (68 ± 2) เฮิร์ทซ์ (แผ่นล่าง) อุณหภูมิของการแก้ปัญหา (30 ± 2) องศา ซีชีพจรในเวลา 10 วินาทีและนอกเวลา 3 วินาที, เวลาวงจรของความถี่กวาด 500 มิลลิวินาทีระยะเวลา 40 นาทีและความหนาแน่นของพลังงาน 80 W / L การควบคุมที่ได้รับการดำเนินการกับกวนแม่เหล็กแทนการอัลตราซาวนด์ที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 40 นาทีที่ความเร็ว 100 รอบ / นาที. 2.2 Enzymolysis ของ CGM อุปกรณ์ที่ enzymolysis ประกอบด้วยอ่างน้ำควบคุมอุณหภูมิแบบดิจิตอล (DK-S26, จิ่งหงอุปกรณ์การทดลอง จำกัด , เซี่ยงไฮ้, จีน), เครื่องวัดค่า pH (FE-20 Mettler Toledo จำกัด , เซี่ยงไฮ้, จีน) และ impeller- กวน (JJ-1, เครื่องดนตรี Zhongda จำกัด Jintan มณฑลเจียงซูประเทศจีน) ที่ความเร็ว 100 รอบ / นาที อัลตราโซนิคโซลูชั่นโปรตีนปรับสภาพถูกลดลงเหลือ 500 มิลลิลิตรเพื่อให้ได้ความเข้มข้นของโปรตีนพื้นผิวที่แตกต่างกัน (5.84, 7.30, 11.68, 14.60 และ 23.36 กรัม / ลิตร) หลังจาก 10 นาทีอุ่นที่อุณหภูมิบางอย่าง (20, 30, 40 และ 50 ° C) ค่า pH ของการแก้ปัญหาที่ถูกปรับให้ค่าบางอย่าง (7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0 และ 9.5) และเอนไซม์อัลคา (0.59, 0.73, 1.17, 1.46 และ 2.34 กรัม / มิลลิลิตร) กับกิจกรรมของ 23400 U / มิลลิลิตร และความหนาแน่นของมวล 1.17 กรัม / มิลลิลิตรถูกเพิ่มเข้ามาในการเริ่มต้น enzymolysis เวลาการย่อยของเอนไซม์เป็น 90 นาทีในระหว่างที่พีเอชได้รับการบำรุงรักษาอย่างต่อเนื่องโดยการเติม 0.5 M NaOH. เอนไซม์อัลคาซึ่งเป็นกลุ่มอุตสาหกรรมในและเอนไซม์อาหารเกรดผลิตโดยสายพันธุ์ที่เลือกของ Bacillus licheniformis และมีส่วนประกอบหลักคือ subtilisin Carlsberg [24] ได้รับการใช้เป็นรูปแบบการทำงานของเอนไซม์ที่จะย่อยสลาย CGM [25] [26] และ [27] ในการวิจัยในปัจจุบันก่อนที่จะถูกไฮโดรไลซ์ CGM โดยเอนไซม์อัลคาที่ CGM ถูกปรับสภาพโดย MPU ตามผลการศึกษาก่อนหน้านี้ของเรา [28] ความถี่กว้างและอัลตราซาวนด์พัล (SFPU) อุปกรณ์ (รูป. 1a) ถูกนำมาใช้ในการวิจัยในปัจจุบัน การดำเนินการความถี่กว้าง (F0 ±δเฮิร์ทซ์) หมายถึงวงจรความถี่กว้างของระยะเวลาที่เพิ่มขึ้นจาก F0 - δจะ F0 + δเฮิร์ทซ์และระยะเวลาการลดลงจาก F0 + δจะ F0 - δเฮิร์ทซ์ด้วยความเร็วเชิงเส้นเดียวกันในรูปแบบของ สามเหลี่ยมหน้าจั่ว (รูป. 1 ข) และการดำเนินงานที่แสดงให้เห็นว่าชีพจรอัลตราซาวนด์จะถูกสร้างขึ้นในโหมดชีพจรกับเวลาและรอบนอกเวลา เมื่อเทียบกับเทคโนโลยีอัลตราซาวนด์คลาสสิก SFPU มีข้อได้เปรียบหลายอย่างเช่นการกระจายพลังงานที่สม่ำเสมอและความสะดวกในการสะท้อนของวัสดุที่ได้รับการรักษา นอกจากนี้อัตราผลตอบแทนของการดำเนินการเกิดโพรงอากาศหลายความถี่สูงเนื่องจากการระเบิดของโพรงอากาศที่ฟองมาจากการฉายรังสีความถี่ต่ำสามารถให้เกิดโพรงอากาศนิวเคลียสใหม่ไม่เพียง แต่สำหรับตัวเอง แต่ยังอื่น ๆ สำหรับการฉายรังสีอัลตราซาวนด์ [29] ดังนั้นบทความนี้การตรวจสอบผลกระทบของการปรับสภาพ MPU ในการย่อยของเอนไซม์ CGM ภายใต้พื้นผิวที่แตกต่างกันและความเข้มข้นของเอนไซม์ pH และอุณหภูมิ นอกจากนี้ผลกระทบของการปรับสภาพ MPU พารามิเตอร์ในการเคลื่อนไหวและความร้อนของ enzymolysis ของ CGM ศึกษา
บทนำโปรตีนเป็นส่วนประกอบที่สำคัญของอาหารเพื่อโภชนาการของมนุษย์เป็นแหล่งของกรดอะมิโน(AAS) ที่ใช้ในการสังเคราะห์โปรตีนทำงานและเนื้อเยื่อ มันเป็นที่คาดว่าโลกมีปัญหาการขาดแคลนล้านตันของโปรตีนทุกปี แต่น่าเสียดายที่มีจำนวนมากของทรัพยากรโปรตีน underutilized เป็นตัวอย่างของเหล่านี้เป็นอาหารตังข้าวโพด (CGM) ซึ่งเป็นผลพลอยได้จากกระบวนการข้าวโพดเปียกกัดซึ่งมีโปรตีน 60-71% [1] แต่มีการ จำกัด การใช้งานในอุตสาหกรรมอาหารของมนุษย์เกิดจากการไม่ละลายน้ำ . มีรายงานว่าการละลายของ CGM สามารถเพิ่มขึ้นโดยการย่อยสลายกรดไฮโดรไลอัลคาไลน์หรือ emzymolysis [2] และ [3] ในทุกวิธีการย่อยสลายที่ enzymolysis ของโปรตีนที่ถือได้ว่าเป็นวิธีที่เหมาะสมที่สุดเนื่องจากสภาพปฏิกิริยาอ่อนควบคุมความพร้อมในเชิงพาณิชย์ขนาดใหญ่และคุณภาพของผลิตภัณฑ์สูง [4] [5] และ [6] อย่างไรก็ตาม enzymolysis แบบดั้งเดิมมีข้อเสียมากมายเช่นอัตราการใช้ต่ำของเอนไซม์อัตราการแปลงต่ำของพื้นผิวที่เวลา enzymolysis ยาวและการบริโภคพลังงานที่กว้างขวาง [7] และ [8] นี้เป็นส่วนใหญ่เนื่องจากโครงสร้างของโปรตีนที่ไม่เหมาะสมซึ่งจะทำให้มันเป็นเรื่องยากสำหรับเอนไซม์ที่จะโจมตีพันธบัตรเอนไซม์ที่ไวต่อโปรตีน ดังนั้นการพัฒนาวิธีการที่มีประสิทธิภาพมากขึ้น enzymolysis ที่จะเอาชนะข้อบกพร่องดังกล่าวข้างต้นเป็นที่ต้องการสูง. 2 วัสดุและวิธีการ2.1 ปรับสภาพล้ำของ CGM ดิบวัสดุ CGM ที่มีแป้ง 15.4% และโปรตีน 58.6% ซื้อมาจากสตาร์ช จำกัด Fenda (Pizhou มณฑลเจียงซูประเทศจีน) ส่วนหนึ่งผ่านหน้าจอตาข่าย 70 (ขนาดอนุภาค 0.21 มิลลิเมตร) ถูกนำมาใช้ เป็นวัสดุทดลอง ปริมาณที่แตกต่างกัน (100, 150, 200, 300, 400 มิลลิลิตร) สารแขวนลอย CGM ที่มีเนื้อหาเดียวกัน (5% w / v) ของโปรตีนที่ถูกปิดผนึกในถุงต้านทานแรงดันสูงและปรับสภาพด้วยอุปกรณ์ SFPU นี้ (ขนาดภายใน 362 มิลลิเมตร× 294 × 502 มมมม Shangjia เทคโนโลยีชีวภาพ จำกัด อู๋ซีมณฑลเจียงซูประเทศจีน) ซึ่งกำลังขับสูงสุดอะคูสติกเป็น 600 W ต่อจานเดียวคำนวณโดยวิธีแคลอรี [30] ที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสโดยใช้น้ำเป็นสื่อกลาง เงื่อนไขการปรับสภาพที่ได้รับจากการศึกษาก่อนหน้าของเราและต่อไปนี้: การรวมกันของอัลตราโซนิกความถี่กว้าง (28 ± 2) เฮิร์ทซ์ (แผ่นบน) และ (68 ± 2) เฮิร์ทซ์ (แผ่นล่าง) อุณหภูมิของการแก้ปัญหา (30 ± 2) องศา ซีชีพจรในเวลา 10 วินาทีและนอกเวลา 3 วินาที, เวลาวงจรของความถี่กวาด 500 มิลลิวินาทีระยะเวลา 40 นาทีและความหนาแน่นของพลังงาน 80 W / L การควบคุมที่ได้รับการดำเนินการกับกวนแม่เหล็กแทนการอัลตราซาวนด์ที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 40 นาทีที่ความเร็ว 100 รอบ / นาที. 2.2 Enzymolysis ของ CGM อุปกรณ์ที่ enzymolysis ประกอบด้วยอ่างน้ำควบคุมอุณหภูมิแบบดิจิตอล (DK-S26, จิ่งหงอุปกรณ์การทดลอง จำกัด , เซี่ยงไฮ้, จีน), เครื่องวัดค่า pH (FE-20 Mettler Toledo จำกัด , เซี่ยงไฮ้, จีน) และ impeller- กวน (JJ-1, เครื่องดนตรี Zhongda จำกัด Jintan มณฑลเจียงซูประเทศจีน) ที่ความเร็ว 100 รอบ / นาที อัลตราโซนิคโซลูชั่นโปรตีนปรับสภาพถูกลดลงเหลือ 500 มิลลิลิตรเพื่อให้ได้ความเข้มข้นของโปรตีนพื้นผิวที่แตกต่างกัน (5.84, 7.30, 11.68, 14.60 และ 23.36 กรัม / ลิตร) หลังจาก 10 นาทีอุ่นที่อุณหภูมิบางอย่าง (20, 30, 40 และ 50 ° C) ค่า pH ของการแก้ปัญหาที่ถูกปรับให้ค่าบางอย่าง (7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0 และ 9.5) และเอนไซม์อัลคา (0.59, 0.73, 1.17, 1.46 และ 2.34 กรัม / มิลลิลิตร) กับกิจกรรมของ 23400 U / มิลลิลิตร และความหนาแน่นของมวล 1.17 กรัม / มิลลิลิตรถูกเพิ่มเข้ามาในการเริ่มต้น enzymolysis เวลาการย่อยของเอนไซม์เป็น 90 นาทีในระหว่างที่พีเอชได้รับการบำรุงรักษาอย่างต่อเนื่องโดยการเติม 0.5 M NaOH. เอนไซม์อัลคาซึ่งเป็นกลุ่มอุตสาหกรรมในและเอนไซม์อาหารเกรดผลิตโดยสายพันธุ์ที่เลือกของ Bacillus licheniformis และมีส่วนประกอบหลักคือ subtilisin Carlsberg [24] ได้รับการใช้เป็นรูปแบบการทำงานของเอนไซม์ที่จะย่อยสลาย CGM [25] [26] และ [27] ในการวิจัยในปัจจุบันก่อนที่จะถูกไฮโดรไลซ์ CGM โดยเอนไซม์อัลคาที่ CGM ถูกปรับสภาพโดย MPU ตามผลการศึกษาก่อนหน้านี้ของเรา [28] ความถี่กว้างและอัลตราซาวนด์พัล (SFPU) อุปกรณ์ (รูป. 1a) ถูกนำมาใช้ในการวิจัยในปัจจุบัน การดำเนินการความถี่กว้าง (F0 ±δเฮิร์ทซ์) หมายถึงวงจรความถี่กว้างของระยะเวลาที่เพิ่มขึ้นจาก F0 - δจะ F0 + δเฮิร์ทซ์และระยะเวลาการลดลงจาก F0 + δจะ F0 - δเฮิร์ทซ์ด้วยความเร็วเชิงเส้นเดียวกันในรูปแบบของ สามเหลี่ยมหน้าจั่ว (รูป. 1 ข) และการดำเนินงานที่แสดงให้เห็นว่าชีพจรอัลตราซาวนด์จะถูกสร้างขึ้นในโหมดชีพจรกับเวลาและรอบนอกเวลา เมื่อเทียบกับเทคโนโลยีอัลตราซาวนด์คลาสสิก SFPU มีข้อได้เปรียบหลายอย่างเช่นการกระจายพลังงานที่สม่ำเสมอและความสะดวกในการสะท้อนของวัสดุที่ได้รับการรักษา นอกจากนี้อัตราผลตอบแทนของการดำเนินการเกิดโพรงอากาศหลายความถี่สูงเนื่องจากการระเบิดของโพรงอากาศที่ฟองมาจากการฉายรังสีความถี่ต่ำสามารถให้เกิดโพรงอากาศนิวเคลียสใหม่ไม่เพียง แต่สำหรับตัวเอง แต่ยังอื่น ๆ สำหรับการฉายรังสีอัลตราซาวนด์ [29] ดังนั้นบทความนี้การตรวจสอบผลกระทบของการปรับสภาพ MPU ในการย่อยของเอนไซม์ CGM ภายใต้พื้นผิวที่แตกต่างกันและความเข้มข้นของเอนไซม์ pH และอุณหภูมิ นอกจากนี้ผลกระทบของการปรับสภาพ MPU พารามิเตอร์ในการเคลื่อนไหวและความร้อนของ enzymolysis ของ CGM ศึกษา
การแปล กรุณารอสักครู่..
1 . โปรตีนบทนำ
สรุปส่วนประกอบของอาหารเพื่อโภชนาการของมนุษย์เป็นแหล่งของกรดอะมิโน ( AAS ) ใช้สำหรับการทำงานและสังเคราะห์โปรตีนเนื้อเยื่อ มันคือประมาณว่าโลกมีปัญหาการขาดแคลนล้านตันของโปรตีนทุกปี แต่เป็นจำนวนมากของทรัพยากรโปรตีนต่ำกว่า มาตรฐาน ตัวอย่างทั่วไปของเหล่านี้เป็นอาหารตังข้าวโพด ( CGM )ผลพลอยได้จากข้าวโพดกระบวนการโม่เปียก ซึ่งประกอบด้วยโปรตีนร้อยละ 60 - 71 [ 1 ] , แต่ มี จำกัด ใช้ในอุตสาหกรรมอาหารของมนุษย์ เนื่องจากกรดเมตาน้ำของมัน มีรายงานว่า การละลายของ BAY สามารถเพิ่มขึ้นโดยการไฮโดรไลซ์ด้วยกรด ด่าง น้ำมันปาล์ม หรือ emzymolysis [ 2 ] และ [ 3 ] ระหว่างวิธีการทั้งไฮโดรไลซ์enzymolysis โปรตีนถือเป็นวิธีที่เหมาะสมที่สุด เพราะมีการรุนแรงปฏิกิริยาสภาพความพร้อมเชิงพาณิชย์ขนาดใหญ่ และสูงผลิตภัณฑ์คุณภาพ [ 4 ] , [ 5 ] [ 6 ] อย่างไรก็ตาม enzymolysis ดั้งเดิมมีข้อเสียหลายอย่าง เช่น อัตราการใช้ต่ำของเอนไซม์ , อัตราการแปลงต่ำของพื้นผิว , เวลา enzymolysis ยาวพลังงานอย่างละเอียด และการบริโภค [ 7 ] และ [ 8 ] นี้เป็นส่วนใหญ่เนื่องจากโครงสร้างที่ไม่เหมาะสมของโปรตีนซึ่งทำให้มันยากสำหรับเอนไซม์ เอนไซม์เพื่อโจมตีต่อพันธบัตรของโปรตีน ดังนั้นการพัฒนาวิธีการ enzymolysis มีประสิทธิภาพมากขึ้นที่จะเอาชนะข้อเสียข้างต้นอยู่ในความต้องการที่ดี
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 . การอัลตราโซนิกของ CGM
วัตถุดิบ CGM ซึ่งประกอบด้วยแป้งและโปรตีน 15.4 % 58.6 % ซื้อจากแป้ง Fenda บริษัท ( Pizhou มณฑลเจียงซู , จีน ) , ส่วนที่ผ่าน 70 หน้าจอตาข่าย ( ขนาดอนุภาค 0.21 มม. ) การทดลองใช้วัสดุ ปริมาณที่แตกต่างกัน ( 100 , 150 , 200 , 300 , 400 มล. ) ของ BAY สารแขวนลอยที่มีเนื้อหาเดียวกัน ( 5%น้ำหนัก / ปริมาตร ) ของโปรตีนที่ถูกปิดผนึกไว้ในถุงทนแรงดันสูงและได้รับกับอุปกรณ์ sfpu ( มิติภายใน 362 มิลลิเมตร× 294 มิลลิเมตร× 502 มม. shangjia เทคโนโลยีชีวภาพ Co . , อู๋ซี , Jiangsu , จีน ) ซึ่งไม่มีอำนาจออกสูงสุด 600 W ต่อจานเดียวกำหนดโดยแคโละริเมทวิธี [ 30 ] ที่ อุณหภูมิ 30 องศา C โดยใช้น้ำเป็นตัวกลางเงื่อนไขการได้รับจากการศึกษาของเราและเป็นดังนี้ : การรวมกันของความถี่กวาด ( 28 ± 2 kHz ( แผ่นบน ) และ ( 68 ± 2 kHz ( จานรอง ) , อุณหภูมิของสารละลาย ( 30 ± 2 ) องศา C , พัลในเวลา 10 s และเวลาปิด 3 S , รอบเวลา ของความถี่กวาด 500 มิลลิวินาที ระยะเวลา 40 นาที และความหนาแน่นพลังงาน 80 W / Lควบคุมดำเนินการกับแม่เหล็กกวนแทนอัลตราซาวนด์ที่ 30 องศา C นาน 40 นาที ที่ความเร็ว 100 R / นาที
2.2 . enzymolysis ของ CGM
enzymolysis เครื่องมือประกอบด้วยดิจิตอลอุณหภูมิน้ำร้อน ( dk-s26 จิ่งหง , อุปกรณ์ทดลอง จำกัด , เซี่ยงไฮ้ , จีน ) , เครื่องวัด ( fe-20 เมทเลอร์ โทเลโด จำกัด , เซี่ยงไฮ้ , จีน ) และแบบใบพัดกวน ( jj-1 เครื่องมือ Zhongda Co . ,ยินตัน , Jiangsu , จีน ) ที่ความเร็ว 100 r / min ultrasonic กรัมโปรตีนโซลูชั่นเพื่อลด 500 ml เพื่อให้ได้พื้นผิวที่แตกต่างกันโปรตีนเข้มข้น ( สตูดิโอ 7.30 11.68 , และ , 23.36 14.60 กรัม / ลิตร หลังจาก 10 นาทีอุ่นที่อุณหภูมิหนึ่ง ( 20 , 30 , 40 และ 50 องศา C ) pH ของสารละลายที่ปรับค่า ( 7.0 , 7.5 , 8.0 , 8.5 , 9.0 และ 9.5 ) และประสบการณ์ ( 0.59 , 0
สรุปส่วนประกอบของอาหารเพื่อโภชนาการของมนุษย์เป็นแหล่งของกรดอะมิโน ( AAS ) ใช้สำหรับการทำงานและสังเคราะห์โปรตีนเนื้อเยื่อ มันคือประมาณว่าโลกมีปัญหาการขาดแคลนล้านตันของโปรตีนทุกปี แต่เป็นจำนวนมากของทรัพยากรโปรตีนต่ำกว่า มาตรฐาน ตัวอย่างทั่วไปของเหล่านี้เป็นอาหารตังข้าวโพด ( CGM )ผลพลอยได้จากข้าวโพดกระบวนการโม่เปียก ซึ่งประกอบด้วยโปรตีนร้อยละ 60 - 71 [ 1 ] , แต่ มี จำกัด ใช้ในอุตสาหกรรมอาหารของมนุษย์ เนื่องจากกรดเมตาน้ำของมัน มีรายงานว่า การละลายของ BAY สามารถเพิ่มขึ้นโดยการไฮโดรไลซ์ด้วยกรด ด่าง น้ำมันปาล์ม หรือ emzymolysis [ 2 ] และ [ 3 ] ระหว่างวิธีการทั้งไฮโดรไลซ์enzymolysis โปรตีนถือเป็นวิธีที่เหมาะสมที่สุด เพราะมีการรุนแรงปฏิกิริยาสภาพความพร้อมเชิงพาณิชย์ขนาดใหญ่ และสูงผลิตภัณฑ์คุณภาพ [ 4 ] , [ 5 ] [ 6 ] อย่างไรก็ตาม enzymolysis ดั้งเดิมมีข้อเสียหลายอย่าง เช่น อัตราการใช้ต่ำของเอนไซม์ , อัตราการแปลงต่ำของพื้นผิว , เวลา enzymolysis ยาวพลังงานอย่างละเอียด และการบริโภค [ 7 ] และ [ 8 ] นี้เป็นส่วนใหญ่เนื่องจากโครงสร้างที่ไม่เหมาะสมของโปรตีนซึ่งทำให้มันยากสำหรับเอนไซม์ เอนไซม์เพื่อโจมตีต่อพันธบัตรของโปรตีน ดังนั้นการพัฒนาวิธีการ enzymolysis มีประสิทธิภาพมากขึ้นที่จะเอาชนะข้อเสียข้างต้นอยู่ในความต้องการที่ดี
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 . การอัลตราโซนิกของ CGM
วัตถุดิบ CGM ซึ่งประกอบด้วยแป้งและโปรตีน 15.4 % 58.6 % ซื้อจากแป้ง Fenda บริษัท ( Pizhou มณฑลเจียงซู , จีน ) , ส่วนที่ผ่าน 70 หน้าจอตาข่าย ( ขนาดอนุภาค 0.21 มม. ) การทดลองใช้วัสดุ ปริมาณที่แตกต่างกัน ( 100 , 150 , 200 , 300 , 400 มล. ) ของ BAY สารแขวนลอยที่มีเนื้อหาเดียวกัน ( 5%น้ำหนัก / ปริมาตร ) ของโปรตีนที่ถูกปิดผนึกไว้ในถุงทนแรงดันสูงและได้รับกับอุปกรณ์ sfpu ( มิติภายใน 362 มิลลิเมตร× 294 มิลลิเมตร× 502 มม. shangjia เทคโนโลยีชีวภาพ Co . , อู๋ซี , Jiangsu , จีน ) ซึ่งไม่มีอำนาจออกสูงสุด 600 W ต่อจานเดียวกำหนดโดยแคโละริเมทวิธี [ 30 ] ที่ อุณหภูมิ 30 องศา C โดยใช้น้ำเป็นตัวกลางเงื่อนไขการได้รับจากการศึกษาของเราและเป็นดังนี้ : การรวมกันของความถี่กวาด ( 28 ± 2 kHz ( แผ่นบน ) และ ( 68 ± 2 kHz ( จานรอง ) , อุณหภูมิของสารละลาย ( 30 ± 2 ) องศา C , พัลในเวลา 10 s และเวลาปิด 3 S , รอบเวลา ของความถี่กวาด 500 มิลลิวินาที ระยะเวลา 40 นาที และความหนาแน่นพลังงาน 80 W / Lควบคุมดำเนินการกับแม่เหล็กกวนแทนอัลตราซาวนด์ที่ 30 องศา C นาน 40 นาที ที่ความเร็ว 100 R / นาที
2.2 . enzymolysis ของ CGM
enzymolysis เครื่องมือประกอบด้วยดิจิตอลอุณหภูมิน้ำร้อน ( dk-s26 จิ่งหง , อุปกรณ์ทดลอง จำกัด , เซี่ยงไฮ้ , จีน ) , เครื่องวัด ( fe-20 เมทเลอร์ โทเลโด จำกัด , เซี่ยงไฮ้ , จีน ) และแบบใบพัดกวน ( jj-1 เครื่องมือ Zhongda Co . ,ยินตัน , Jiangsu , จีน ) ที่ความเร็ว 100 r / min ultrasonic กรัมโปรตีนโซลูชั่นเพื่อลด 500 ml เพื่อให้ได้พื้นผิวที่แตกต่างกันโปรตีนเข้มข้น ( สตูดิโอ 7.30 11.68 , และ , 23.36 14.60 กรัม / ลิตร หลังจาก 10 นาทีอุ่นที่อุณหภูมิหนึ่ง ( 20 , 30 , 40 และ 50 องศา C ) pH ของสารละลายที่ปรับค่า ( 7.0 , 7.5 , 8.0 , 8.5 , 9.0 และ 9.5 ) และประสบการณ์ ( 0.59 , 0
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- These test methods2 cover the determinat
- These test methods2 cover the determinat
- Go on!
- เพิ่มเป็นเพื่อนด้วยนะ
- . 地震发生当天 , 他就去现场 ( ) 了
- The sliced rice straw was first introduc
- What is continent of india
- JOB Ad
- I give 500 baht for each of you to buy c
- JOB Ad
- I’m going to see Movies Would you like t
- sewn
- อยากตาย
- gasoline
- what about it
- It's the elevator ride
- I have to go to work
- Next to variables 1.The independent var
- The authorsconcluded that continuous phy
- Data and methods
- ยาดมตราโป๊ยเซียน
- Tou're feel uncomfortable ,right?
- to come up with intereasting ways
- มังกร
