2.3.1. Culture media
The potential of yeast and bacterial composites for OTA reduction
was evaluated in yeast medium (YM; initial pH 6.5; aw 0.99) and MRS
broth (initial pH 6.1; aw 0.99), respectively. Yeast medium was prepared
by dissolving 0.3 g Malt Extract (Merck, Darmstadt, Germany),
0.3 g Yeast Extract (Lab M Limited, United Kingdom), 0.5 g Peptone
Universal (Merck, Darmstadt, Germany), 1 g Glucose (Riedel de
Haan AG, Germany) in 100 mL distilled water. The pH of both media
was adjusted to 3.0, 4.0, and 5.0 by adding 6 N HCl. The pH was measured
after autoclaving (121 °C; 15 min). Due to the fact that different
fungi species are known to produce OTA in different foodstuffs, i.e. A.
carbonarius on wine and grape juice and Penicillium verrucosum or Aspergillus
ochraceus on grains and subsequently on beer, OTA was
added to the media instead of inoculating an ochratoxigenic fungus.
Specifically, after sterilization, the appropriate volume of culture
media was supplemented with aliquots of OTA (10.20 μg/mL, Biopure
Corporation, USA), to obtain two different concentrations of 50 and
100 μg/L. Five (5) mL from both laboratory media was aseptically
poured in 15 mL plastic screw-cap sterile tubes.
Each species of 29 bacteria and 16 yeasts was activated individually,
centrifuged, washed twice and resuspended in MRD (Section 2.1).
Following resuspension, composites were produced accordingly to
Tables 1 and 2 by using equal volumes of each species or strain. Decimal
dilutions were carried out to reach a low (103 cfu/mL) and a high
(107 cfu/mL) inoculum, studying whether their ability for OTA reduction
is affected by the initial cell density. The inoculation of culture
media supplemented with OTA was not carried out by adding liquid
inocula, so as not to dilute the final OTA concentration. Following dilutions,
yeast or bacterial composite suspensions were centrifuged
again. The cell pellets were finally resuspended in culture media of different pH values supplemented with OTA (50 and 100 ppb). The
incubation was performed at 30 °C, which is a temperature close to
the optimum for both microorganism categories. The duration of incubation
was decided by preliminary experiments (data not
shown), which indicated that the maximum OTA reduction occurred
on day 2 for yeasts and day 5 for bacterial composites. Positive controls,
i.e., medium with 50 or 100 μg/L OTA, but without microorganism
(yeasts or bacteria) were used to calculate the percentage of OTA
reduction, while a negative control containing microorganism without
OTA was also used to determine the initial cell density (cfu/mL).
2.3.1 การสื่อวัฒนธรรมศักยภาพของวัสดุผสมยีสต์และแบคทีเรียสำหรับลดโอตะถูกประเมินในยีสต์ (YM ค่า pH เริ่มต้น 6.5 กม. 0.99) และนางซุป (ค่า pH เริ่มต้น 6.1 กม. 0.99), ตามลำดับ กลางยีสต์เตรียมไว้โดยยุบ 0.3 g มอลต์สกัด (เมอร์ค ดาร์มส เยอรมนี),สารสกัดจากยีสต์ 0.3 g (ห้องปฏิบัติการ M จำกัด สหราชอาณาจักร), Peptone 0.5 gสากล (เมอร์ค ดาร์มส เยอรมนี), g 1 กลูโคส (Riedel deHaan AG เยอรมนี) ใน 100 มลกลั่นน้ำ PH ของสื่อทั้งสองถูกปรับปรุง กับ 3.0, 4.0, 5.0 ได้เพิ่ม 6 N HCl มีวัด pHหลังจาก autoclaving (121 ° C, 15 นาที) เนื่องจากข้อเท็จจริงที่แตกต่างกันทราบว่าเชื้อราสายพันธุ์ผลิต OTA ในอาหารแตกต่างกัน เช่นอ.carbonarius ไวน์ น้ำองุ่น และ Penicillium verrucosum หรือ Aspergillusochraceus กับธัญพืช และต่อมา กับเบียร์ โอตะได้เพิ่มสื่อแทน inoculating เป็นเชื้อรา ochratoxigenicหลังจากฆ่าเชื้อ ปริมาณที่เหมาะสมของวัฒนธรรมโดยเฉพาะสื่อถูกเสริม ด้วย aliquots OTA (10.20 μg/mL, BiopureCorporation, USA), เพื่อให้ได้ความเข้มข้นแตกต่างกันสองของ 50 และΜg 100 L. ห้า (5) mL จากทั้งสื่อห้องปฏิบัติ asepticallypoured ในหลอดใส่สกรูฝาพลาสติก 15 mLแต่ละพันธุ์แบคทีเรีย 29 และ 16 yeasts เรียกใช้รายบุคคลcentrifuged, resuspended ใน MRD (หัวข้อ 2.1) และหินสองครั้งต่อ resuspension ตะกอน คอมโพสิตที่ผลิตตามการตารางที่ 1 และ 2 โดยใช้ปริมาณเท่ากันของแต่ละสายพันธุ์หรือต้องใช้ ทศนิยมdilutions ได้ดำเนินการไปถึงสูงและต่ำ (103 cfu/mL)(107 cfu/mL) inoculum ศึกษาว่าความสามารถในการลดโอตะจะได้รับผลกระทบจากความหนาแน่นของเซลล์เริ่มต้น Inoculation ของวัฒนธรรมสื่อเสริม ด้วยโอตะไม่ดำเนินการ โดยการเพิ่มของเหลวinocula เพื่อไม่ให้ dilute OTA ความเข้มข้นสุดท้าย ต่อ dilutionsมี centrifuged ฟโรผสมยีสต์หรือแบคทีเรียอีกครั้ง ขี้เซลล์ถูกสุด resuspended วัฒนธรรมสื่อต่าง ๆ ค่า pH ของน้ำเสริม ด้วย OTA (50 และ 100 ppb) ที่ทำการบ่มที่ 30 ° C ซึ่งเป็นอุณหภูมิใกล้เคียงกับเหมาะสมสำหรับจุลินทรีย์ทั้งสองประเภท ระยะเวลาการบ่มเป็นการตัดสินใจ โดยการทดลองเบื้องต้น (ข้อมูลไม่แสดง), ซึ่งบ่งชี้ว่า เกิดการ OTA ลดสูงสุดวัน 2 yeasts และคอมโพสิตแบคทีเรียละ 5 วัน ควบคุมบวกเช่น กลาง 50 หรือ 100 μg/L โอตะ แต่ไม่ มีจุลินทรีย์ใช้ในการคำนวณเปอร์เซ็นต์ของโอตะ (yeasts หรือแบคทีเรีย)ลด ในขณะที่ควบคุมค่าลบที่ประกอบด้วยจุลินทรีย์ที่ไม่มีโอตะถูกใช้เพื่อกำหนดความหนาแน่นเซลล์เริ่มต้น (cfu/mL)
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.3.1 สื่อวัฒนธรรม
ที่มีศักยภาพของยีสต์และคอมโพสิตแบคทีเรียเพื่อลด OTA
ได้รับการประเมินในระดับปานกลางยีสต์ (YM; pH เริ่มต้น 6.5; AW 0.99) และนาง
น้ำซุป (pH เริ่มต้น 6.1; AW 0.99) ตามลำดับ กลางยีสต์ถูกจัดทำขึ้น
โดยการละลาย 0.3 กรัมสารสกัดจากมอลต์ (เมอร์ค, Darmstadt, เยอรมนี),
0.3 กรัมสารสกัดจากยีสต์ (Lab M จำกัด สหราชอาณาจักร) 0.5 กรัมเปปโตน
สากล (เมอร์ค, Darmstadt, เยอรมนี) 1 กรัมกลูโคส (Riedel de
Haan เอจี, เยอรมนี) ในน้ำกลั่น 100 ml ค่าพีเอชของสื่อทั้งสอง
ได้รับการปรับให้ 3.0, 4.0 และ 5.0 โดยการเพิ่ม 6 N HCl ค่า pH วัด
หลังจากนึ่งฆ่าเชื้อ (121 ° C; 15 นาที) เนื่องจากข้อเท็จจริงที่ว่าแตกต่าง
สายพันธุ์เชื้อราเป็นที่รู้จักกันในการผลิต OTA ในอาหารที่แตกต่างกันเช่น A.
carbonarius ไวน์และน้ำองุ่นและ Penicillium verrucosum หรือ Aspergillus
ochraceus ธัญพืชและต่อมาเมื่อวันที่เบียร์ OTA ถูก
เพิ่มเข้ามาในสื่อแทนการฉีดวัคซีน ochratoxigenic เชื้อรา.
โดยเฉพาะหลังจากที่ฆ่าเชื้อปริมาณที่เหมาะสมของวัฒนธรรม
สื่อได้รับการเสริมด้วยส่วนลงตัวของ OTA (10.20 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร Biopure
คอร์ปอเรชั่น USA) เพื่อให้ได้ความเข้มข้นที่แตกต่างกันสอง 50 และ
100 ไมโครกรัม / ลิตร ห้า (5) มิลลิลิตรจากสื่อทั้งในห้องปฏิบัติการได้รับการปลอดเชื้อ
เทใน 15 มิลลิลิตรพลาสติกหลอดฆ่าเชื้อสกรู Cap.
แต่ละสายพันธุ์ของเชื้อแบคทีเรีย 29 และ 16 ยีสต์ถูกเปิดใช้งานเป็นรายบุคคล
ปั่นล้างสองครั้งและ resuspended ใน MRD (มาตรา 2.1).
ต่อไปแขวนลอย, คอมโพสิตที่มีการผลิตตาม
ตารางที่ 1 และ 2 โดยใช้ปริมาณที่เท่ากันของแต่ละสายพันธุ์หรือความเครียด ทศนิยม
เจือจางได้ดำเนินการไปถึงต่ำ (103 โคโลนี / มิลลิลิตร) และสูง
(107 โคโลนี / มิลลิลิตร) เชื้อ, การศึกษาไม่ว่าจะเป็นความสามารถในการลด OTA
ได้รับผลกระทบจากความหนาแน่นของเซลล์เริ่มต้น การฉีดวัคซีนของวัฒนธรรม
สื่อเสริมด้วย OTA ไม่ได้ดำเนินการโดยการเพิ่มสภาพคล่อง
inocula เพื่อที่จะไม่ให้เจือจางความเข้มข้น OTA สุดท้าย เจือจางต่อไปนี้
ยีสต์หรือสารแขวนลอยคอมโพสิตแบคทีเรียถูกปั่น
อีกครั้ง เม็ดเซลล์ถูก resuspended ที่สุดในสื่อวัฒนธรรมของค่าความเป็นกรดด่างที่แตกต่างกันเสริมด้วย OTA (50 และ 100 ppb)
ได้ดำเนินการบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสซึ่งเป็นอุณหภูมิที่ใกล้
เหมาะสมสำหรับทั้งสองประเภทจุลินทรีย์ ระยะเวลาของการบ่ม
ถูกตัดสินโดยการทดลองเบื้องต้น (ข้อมูลไม่
แสดง) ซึ่งชี้ให้เห็นว่าการลด OTA สูงสุดที่เกิดขึ้น
ในวันที่ 2 สำหรับยีสต์และวันที่ 5 สำหรับคอมโพสิตแบคทีเรีย การควบคุมเชิงบวก
เช่นขนาดกลางที่มี 50 หรือ 100 ไมโครกรัม / ลิตร OTA แต่ไม่มีจุลินทรีย์
(ยีสต์หรือแบคทีเรีย) ถูกนำมาใช้ในการคำนวณอัตราร้อยละของ OTA
ลดลงในขณะที่การควบคุมเชิงลบที่มีจุลินทรีย์โดยไม่ต้อง
OTA ยังถูกใช้ในการตรวจสอบความหนาแน่นของเซลล์เริ่มต้น (โคโลนี / มิลลิลิตร)
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.3.1 . สื่อวัฒนธรรม
ศักยภาพของยีสต์และแบคทีเรียคอมโพสิตสำหรับ
ลดโอตะ ทดลองในยีสต์ ( กลาง ) ; เริ่มต้นที่ pH 6.5 ; อ้าว 0.99 ) และนาง
broth ( pH เริ่มต้น 6.1 ; อ้าว 0.99 ) ตามลำดับ กลางเตรียมโดยละลายยีสต์
0.3 กรัม malt extract ( เมอร์คดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี ) ,
0.3 กรัมยีสต์สกัด ( lab ม. ( สหราชอาณาจักร ) , 0.5 กรัม ตามลำดับ
สากล ( เมอร์คดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี ) ,1 กรัม กลูโคส ( เดล de
ฮาน AG , Germany ) ใน 100 มล. น้ำกลั่น pH ของทั้งสองสื่อ
คือปรับเป็น 2.0 , 3.0 , 4.0 และ 5.0 โดยการเพิ่ม 6 N HCl . pH วัด
หลังจากอัตราส่วนโฟกัส ( 121 ° C ; 15 นาที ) เนื่องจากเชื้อราชนิด
แตกต่างกันเป็นที่รู้จักกันเพื่อผลิตพลังงานในอาหารที่แตกต่างกันเช่น A .
carbonarius ในไวน์และน้ำผลไม้องุ่นและ Penicillium verrucosum หรือ Aspergillus
ochraceus ในธัญพืชและต่อมาในเบียร์ , OTA คือ
เพิ่มสื่อแทนการฉีดวัคซีนเป็นเชื้อรา ochratoxigenic .
โดยเฉพาะหลังจากที่การฆ่าเชื้อ , ปริมาณที่เหมาะสมของสื่อวัฒนธรรม
เสริมด้วยเฉยๆของ OTA ( 10.20 μ g / ml biopure
Corporation , USA ) , ที่จะได้รับสองระดับความเข้มข้น 50 และ
μ 100 กรัม / ลิตร 5 ml จากห้องปฏิบัติการทั้งสองสื่อ aseptically
เทพลาสติกสกรูฝาหมันหลอด 15 ml .
แต่ละชนิดของแบคทีเรียและยีสต์ทำงาน 29 16 บุคคล
ไฟฟ้า , ล้างสองครั้งและ resuspended ใน MRD ( 2.1 ส่วนต่อไปนี้ resuspension )
,
คอมผลิตตามตารางที่ 1 และ 2 โดยการใช้ปริมาณเท่ากันของแต่ละชนิดหรือสายพันธุ์ วิธีการทศนิยม
ทดลองถึงต่ำ ( 103 CFU / ml ) และสูง
( 107 CFU / ml ปริมาณเรียนไม่ว่าความสามารถเพื่อลดผลกระทบ โอตะ
ความหนาแน่นเซลล์เริ่มต้นโดย วัคซีนของวัฒนธรรม
สื่อเสริมด้วย OTA ไม่ได้ถูกดำเนินการ โดยการเพิ่ม inocula เหลว
เพื่อไม่ให้เจือจางความเข้มข้นของพลังงานขั้นสุดท้าย วิธีการต่อไปนี้ , ยีสต์หรือแบคทีเรียที่แขวนลอยอยู่
คอมโพสิตไฟฟ้าอีกครั้งเซลล์เม็ด ได้ resuspended ในวัฒนธรรมสื่อของค่า pH ที่แตกต่างกันเสริมด้วย OTA ( 50 และ 100 ppb )
บ่มจะทำใน 30 ° C ซึ่งเป็นอุณหภูมิที่เหมาะสมปิด
ทั้งจุลินทรีย์ประเภท ระยะเวลาของการบ่ม
ถูกตัดสินโดยการทดลองเบื้องต้น ( ข้อมูลไม่
แสดง ) ซึ่งพบว่า การลดสูงสุดเกิดขึ้น
โอตะในวัน 2 วัน 5 สำหรับแบคทีเรียยีสต์และคอมโพสิต การควบคุม ,
( บวกระดับปานกลางกับ 50 หรือ 100 μกรัม / ลิตร โอตะ แต่ปราศจากจุลินทรีย์
( ยีสต์หรือแบคทีเรีย ) ถูกใช้เพื่อคำนวณค่าร้อยละของการ OTA
ในขณะที่ลบควบคุมที่มีจุลินทรีย์โดย
OTA ยังใช้เพื่อตรวจสอบความหนาแน่นเซลล์เริ่มต้น ( CFU / ml )
การแปล กรุณารอสักครู่..