The reverse-phase ion-exchange HPLC

The reverse-phase ion-exchange HPLC was conducted to determine PHB content of the Nostoc cell biomass.

The dry cells were hydrolyzed by sulfuric acid to completion to obtain the PHB-hydrolyzed product.

The product samples were analyzed using HPLC at the 210-nm detection which specifically detects only acidic compounds. The hydrolyzed samples containing: (i) the sulfuric acid solvent; (ii) the PHB-hydrolyzed product (crotonic acid); and (iii) the internal standard (adipic acid) were separated into three distinct fractions at specific retention times according to their unique mass and polarity (Fig. 2A). The sulfuric solvent is the first eluted fraction since it is the most polar and the smallest. The adipic acid was the second fraction as it is a moderate polar. The PHB-hydrolyzed product, the crotonic acid is the third fraction since it is the most non-polar. The acid hydrolysis was proceeded followed by HPLC analysis of the cell samples along with the standard commercial PHB at different concentrations in order to set the standard PHB quantification curve as shown in Fig. 2C. The standard curve shown the correlation between the PHB concentrations and the ratios between peak areas of crotonic acid to adipic acid at R2 = 0.996.

The result showed that the analysis can determine the PHB content of the tested-strain, Nostoc sp. strain F which is 8.0% PHB weight to cell dry weight (w/cdw hereafter) (Fig. 2B). Thus, this HPLC analysis was used to determine the PHB content of all 28 strains of Nostoc in the next section.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

HPLC สารกรองย้อนกลับขั้นตอนได้ดำเนินการเพื่อกำหนดเนื้อหา PHB ของชีวมวลเซลล์ Nostoc เซลล์แห้งถูก hydrolyzed ด้วยกรดซัลฟิวริกจนเสร็จสมบูรณ์เพื่อขอรับผลิตภัณฑ์ PHB hydrolyzed ตัวอย่างผลิตภัณฑ์ได้วิเคราะห์โดยใช้ HPLC ที่ตรวจ 210 nm ซึ่งตรวจพบโดยเฉพาะกรดสาร ตัวอย่าง hydrolyzed ประกอบด้วย: (i) ตัวทำละลายกรดซัลฟิวริก (ii) การ PHB hydrolyzed ผลิตภัณฑ์ (กรด crotonic); และ (iii) ภายในมาตรฐาน (adipic กรด) ถูกแบ่งออกเป็นเศษส่วนทั้งหมด 3 ครั้งเก็บรักษาเฉพาะตามของพวกเขาโดยรวมเฉพาะและขั้ว (Fig. 2A) ตัวทำละลายกำมะถันเป็นเศษส่วน eluted แรกเนื่องจากเป็นขั้วโลกมากที่สุดและน้อยที่สุด กรด adipic ถูกเศษสองก็ปานกลางขั้วโลก ผลิตภัณฑ์ PHB hydrolyzed กรด crotonic ได้เศษส่วนที่สามเป็นสุดไม่ใช่โพลาร์ ไฮโตรไลซ์กรดถูกครอบครัวไปมาแล้ว โดยวิเคราะห์ HPLC ตัวอย่างเซลล์กับ PHB เชิงพาณิชย์มาตรฐานที่ความเข้มข้นแตกต่างกันเพื่อกำหนดมาตรฐาน PHB นับโค้งมาก Fig. 2C. เส้นโค้งมาตรฐานที่แสดงความสัมพันธ์ระหว่างความเข้มข้น PHB และอัตราส่วนระหว่างพื้นที่สูงสุดของกรด crotonic กับกรด adipic ที่ R2 = 0.996ผลพบว่า การวิเคราะห์สามารถกำหนดเนื้อหา PHB ของทดสอบพันธุ์ Nostoc sp.ต้องใช้ F ที่ 8.0% PHB น้ำหนักเซลล์แห้งน้ำหนัก (w/cdw โดย) (Fig. 2B) ดังนั้น วิเคราะห์ HPLC นี้ถูกใช้เพื่อกำหนดเนื้อหา PHB ของสายพันธุ์ที่ 28 ทั้งหมดของ Nostoc ในส่วนถัดไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เฟสกลับแลกเปลี่ยนไอออน HPLC ได้ดำเนินการเพื่อตรวจสอบเนื้อหา PHB ของชีวมวลเซลล์ Nostoc. เซลล์แห้งไฮโดรไลซ์ด้วยกรดซัลฟูริกที่จะเสร็จสิ้นเพื่อให้ได้สินค้าที่ PHB-ไฮโดรไลซ์ได้. ตัวอย่างผลิตภัณฑ์ได้รับการวิเคราะห์โดยใช้วิธี HPLC ที่ 210 นาโนเมตร การตรวจสอบโดยเฉพาะที่ตรวจพบสารที่เป็นกรดเท่านั้น กลุ่มตัวอย่างที่มีไฮโดรไลซ์ (i) ตัวทำละลายกรดกำมะถัน; (ii) ผลิตภัณฑ์ PHB-ไฮโดรไลซ์ (กรด crotonic); และ (iii) มาตรฐานภายใน (กรด adipic) ถูกแยกออกเป็นสามเศษส่วนที่แตกต่างกันในช่วงเวลาที่การเก็บรักษาที่เฉพาะเจาะจงตามมวลที่ไม่ซ้ำกันและขั้วของพวกเขา (รูป. 2A) ตัวทำละลายซัลฟูริกเป็นส่วนชะแรกนับตั้งแต่เป็นขั้วมากที่สุดและมีขนาดเล็กที่สุด กรด adipic เป็นส่วนที่สองมันเป็นปานกลางขั้วโลก ผลิตภัณฑ์ PHB-ไฮโดรไลซ์กรด crotonic เป็นส่วนที่สามเพราะมันเป็นส่วนใหญ่ที่ไม่มีขั้ว การย่อยกรดได้รับการดำเนินการตามด้วยการวิเคราะห์ HPLC ของตัวอย่างเซลล์พร้อมกับ PHB มาตรฐานทางการค้าที่มีความเข้มข้นแตกต่างกันเพื่อกำหนดเส้นโค้งปริมาณ PHB มาตรฐานดังแสดงในรูป 2C โค้งมาตรฐานแสดงให้เห็นความสัมพันธ์ระหว่างความเข้มข้น PHB และอัตราส่วนระหว่างพื้นที่จุดสูงสุดของกรด crotonic กรด adipic ที่ R2 = 0.996. ผลที่ได้แสดงให้เห็นว่าการวิเคราะห์สามารถตรวจสอบเนื้อหา PHB ของสายพันธุ์ที่ผ่านการทดสอบที่ Nostoc SP F สายพันธุ์ซึ่งเป็นน้ำหนัก PHB 8.0% ไปยังเซลล์น้ำหนักแห้ง (w / CDW ปรโลก) (รูป. 2B) ดังนั้นการวิเคราะห์ HPLC นี้ถูกใช้ในการกำหนดเนื้อหา PHB ทั้งหมด 28 สายพันธุ์ของ Nostoc ในส่วนถัดไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กลับเฟส 2 โดยมีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาเนื้อหาของเซลล์ PHB Nostoc ชีวมวล

เซลล์แห้งเท่ากับไฮโดรไลซ์ด้วยกรดซัลฟูริคให้จบให้ได้ PHB จากผลิตภัณฑ์

ผลิตภัณฑ์ตัวอย่าง วิเคราะห์โดย HPLC ที่ 210 nm ตรวจจับโดยเฉพาะจะตรวจจับเฉพาะสารประกอบที่เป็นกรด ไฮโดรไลซ์ตัวอย่างประกอบด้วย : ( ฉัน ) กรดตัวทำละลาย ;( 2 ) ผลิตภัณฑ์จากพอลิ ( crotonic acid ) ; และ ( 3 ) มาตรฐานภายใน ( กรด adipic ) แบ่งออกเป็นสามส่วนที่แตกต่างกันในเวลาการเก็บรักษาที่เฉพาะเจาะจงตามมวลเฉพาะและขั้ว ( รูปที่ 2A ) ละลายกรดซัลฟูริกเป็นครั้งแรกตัวอย่างเศษเนื่องจากเป็นขั้วโลกมากที่สุดและน้อยที่สุด กรด adipic คือส่วนที่สองเป็นส่วนที่ขั้วโลกPHB จากผลิตภัณฑ์กรด crotonic เป็นส่วนที่สาม เนื่องจากมันไม่มีขั้วมากที่สุด กรดไฮโดรการดำเนินการตามด้วยการวิเคราะห์ HPLC ของเซลล์ตัวอย่างพร้อมกับเชิงพาณิชย์มาตรฐาน PHB ที่ความเข้มข้นต่าง ๆ เพื่อกำหนดมาตรฐานปริมาณ PHB โค้งดังแสดงในรูปที่ 2 .เส้นโค้งแสดงความสัมพันธ์ระหว่างมาตรฐาน PHB ความเข้มข้นและอัตราส่วนระหว่างพื้นที่ของพีค crotonic กรดกรด adipic ที่ R2 = โดย

ผลการศึกษาพบว่า การวิเคราะห์หาปริมาณ PHB ทดสอบความเครียด , Nostoc sp . สายพันธุ์ F ซึ่งเป็น 8.0 % PHB น้ำหนักมือถือน้ำหนัก ( w / CDW นั้น ) ( รูปที่ 2B ) ดังนั้นโดยการวิเคราะห์นี้ใช้เพื่อตรวจสอบเนื้อหาของ PHB 28 สายพันธุ์ ในส่วนถัดไป
Nostoc .