2.6. Conformation of the open readi

2.6. Conformation of the open reading frame (ORF) sequences of
anthocyanin biosynthetic genes
In a previous study, an Illumina/Solexa library of petals in
P. suffruticosa ‘Luoyang Hong’ was constructed and sequenced
(Zhang et al., 2014). Based on the related unigene sequences from
this transcriptome-wide overview in petal, five regulatory genes
(PsbHLH1, PsbHLH3, PsWD40-1, PsWD40-2 and PsMYB2) and six
structural genes (PsCHS1, PsCHI1, PsF3H1, PsF3

H1, PsDFR1 and
PsANS1) in the anthocyanin biosynthesis pathway were obtained
with reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) or
rapid amplification of cDNA end (RACE) technology, and the open
reading frame (ORF) sequences of these eleven genes were further confirmed with the designed primers (Table 1). According to
a previous study (Zhou et al., 2010a), PCR product purifying and
sequencing were performed as follows: the amplified PCR products were analyzed on a 1.0% agarose gel, and specific bands of
expected size were purified by Gel/PCR Extraction Kit (Biomiga,
China). Isolated DNA fragments were TA-cloned into the pGEM-T
Easy Vector (Promega, USA) and then transformed into competent
Top10 Escherichia coli cells. Putative positive clones were identified
by PCR with T7 and SP6 sequencing primers before sequenced by
AuGCT (Beijing, China) on a 377 automated DNA sequencer (PerkinElmer, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6. conformation ของเปิดอ่าน (ORF) ลำดับของเฟรมมีโฟเลทสูง biosynthetic ยีนในการศึกษาก่อนหน้านี้ การไลบรารี Illumina/Solexa ของกลีบในP. suffruticosa 'Hong ลั่วหยาง' ถูกสร้างขึ้น และเรียงลำดับ(Zhang et al., 2014) ตามลำดับ unigene ที่เกี่ยวข้องจากภาพรวมในกลีบดอกไม้ ยีน regulatory ห้า transcriptome ทั้งนี้(PsbHLH1, PsbHLH3, PsWD40 1, PsWD40-2 และ PsMYB2) และ 6ยีนโครงสร้าง (PsCHS1, PsCHI1, PsF3H1, PsF3H1, PsDFR1 และPsANS1) ในทางเดินการสังเคราะห์มีโฟเลทสูงได้รับด้วยปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส transcriptase กลับ (RT-PCR) หรือขยายอย่างรวดเร็วของ cDNA สิ้นสุด (แข่งขัน) และเทคโนโลยีเปิดอ่านเฟรม (ORF) ลำดับของยีนเหล่านี้สิบเอ็ดได้เพิ่มเติมยืนยัน ด้วยไพรเมอร์ที่ออกแบบ (ตารางที่ 1) ตามที่การศึกษาก่อนหน้า (โจว et al., 2010a), PCR ผลิตภัณฑ์บริสุทธิ์ และดำเนินลำดับเป็นดังนี้: มีวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์ PCR เอาต์วุ้น agarose 1.0% และวงเฉพาะของขนาดที่คาดไว้ที่บริสุทธิ์ โดยชุดสกัด เจล/PCR (Biomigaประเทศจีน) ชิ้นส่วนดีเอ็นเอที่แยกได้ TA โคลนเป็น pGEM Tเวกเตอร์กลาย (Promega สหรัฐอเมริกา) และจากนั้น เปลี่ยนเป็นอำนาจTop10 Escherichia coli เซลล์ ระบุโคลน putative บวกโดย PCR กับ T7 SP6 ลำดับเบสไพรเมอร์ก่อนที่จะเรียงลำดับตามAuGCT (ปักกิ่ง จีน) บนที่ 377 อัตโนมัติ DNA sequencer (PerkinElmer สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 โครงสร้างของกรอบการอ่านเปิด (ORF) ลำดับของ
ยีนสังเคราะห์ anthocyanin
ในการศึกษาก่อนหน้านี้ Illumina / ห้องสมุด Solexa ของกลีบใน
P. suffruticosa 'ลั่วหยาง Hong' ถูกสร้างขึ้นและติดใจ
(Zhang et al., 2014) ขึ้นอยู่กับลำดับ UNIGENE ที่เกี่ยวข้องจาก
นี้ภาพรวมของยีนทั้งในกลีบห้ายีนกฎระเบียบ
(PsbHLH1, PsbHLH3, PsWD40-1, PsWD40-2 และ PsMYB2) และหก
ยีนโครงสร้าง (PsCHS1, PsCHI1, PsF3H1, PsF3
?
H1, PsDFR1 และ
PsANS1) ในทางเดินสังเคราะห์ anthocyanin ที่ได้รับ
ด้วยปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์ย้อนกลับ (RT-PCR) หรือ
การขยายตัวอย่างรวดเร็วของปลาย cDNA (RACE) เทคโนโลยีและเปิด
กรอบการอ่าน (ORF) ลำดับของยีนเหล่านี้สิบเอ็ดได้รับการยืนยันต่อไปด้วยการออกแบบ ไพรเมอร์ (ตารางที่ 1) ตาม
การศึกษาก่อนหน้า (. โจวและคณะ, 2010a), PCR ผลิตภัณฑ์บริสุทธิ์และ
การเรียงลำดับได้ดำเนินการดังต่อไปนี้: ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ขยายการวิเคราะห์ที่ 1.0% agarose เจล, และวงดนตรีที่เฉพาะเจาะจงของ
ขนาดที่คาดว่าจะได้รับการทำให้บริสุทธิ์ด้วยเจล / PCR สกัด Kit (Biomiga,
จีน) ดีเอ็นเอที่แยกได้ TA-โคลนเข้า pGEM-T
ง่ายเวกเตอร์ (Promega, ประเทศสหรัฐอเมริกา) และจากนั้นกลายเป็นอำนาจ
Top10 Escherichia coli เซลล์ โคลนบวกสมมุติถูกระบุ
โดยวิธี PCR กับ T7 และไพรลำดับ SP6 ก่อนที่จะติดใจโดย
AuGCT (ปักกิ่ง, จีน) ในซีเควนดีเอ็นเอ 377 อัตโนมัติ (PerkinElmer, ประเทศสหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 โครงสร้างของเฟรมเปิดอ่าน ( ORF ) ลำดับของยีน

แอนโธไซยานินการในการศึกษาก่อนหน้านี้ที่ Illumina / solexa ห้องสมุดของกลีบดอกไม้
P ' หงส์ ' suffruticosa ลั่วหยางได้สร้างและลำดับ
( Zhang et al . , 2010 ) ยึดที่เกี่ยวข้อง unigene ลำดับจาก
ทราน ริปโตมนี้กว้างภาพรวมในกลีบดอกไม้ 5 กฎระเบียบยีน
( psbhlh1 psbhlh3 pswd40-1 , , ,และ pswd40-2 psmyb2 ) และหก
ยีนโครงสร้าง ( pschs1 pschi1 psf3h1 , , ,

psf3  H1 , psdfr1 และ
psans1 ) ในวิถีการสังเคราะห์แอนโธไซยานินได้
กับ reverse transcriptase polymerase chain reaction ( RT-PCR ) หรือ การเพิ่มปริมาณอย่างรวดเร็วของ cDNA
สุดท้าย ( แข่ง ) เทคโนโลยีและการเปิดกรอบ ( ORF
อ่าน ) ลำดับของยีนสิบเอ็ดเหล่านี้ยืนยันเพิ่มเติมด้วยการออกแบบไพรเมอร์ ( ตารางที่ 1 )ตาม
การศึกษาก่อนหน้านี้ ( โจว et al . , 2010a ) ซึ่งเป็นผลิตภัณฑ์ที่บริสุทธิ์และ
ลำดับได้ดังนี้ การขยาย PCR วิเคราะห์บนผลิตภัณฑ์เจล , 1.0% และเฉพาะกลุ่ม
คาดว่าขนาดได้ทำให้บริสุทธิ์ด้วยชุดสกัดเจล PCR ( biomiga
, จีน ) แยกดีเอ็นเอถูกทาโคลนเข้าไปใน pgem-t
ง่ายเวกเตอร์ ( promega , USA ) และจากนั้นแปลงเป็นเชี่ยวชาญ