2. Materials and methods2.1. Chemic

2. Materials and methods
2.1. Chemicals
Acetonitrile (HPLC-grade, Fisher Scientific), ascorbigen (APIN
chemicals), t-cinnamic acid (Merck), caffeic acid (Carl Roth GmbH),
p-coumaric acid (Sigma), formic acid (Carl Roth GmbH), ferulic acid
(Carl Roth GmbH), glucobrassicin (Phytolab), methanol (HPLCgrade,
Fisher Scientific), oxalic acid dehydrate (Carl Roth GmbH),
m-phosphoric acid (Fluka), sinapic acid (Carl Roth GmbH), and tri-
fluoroacetic acid (Carl Roth GmbH) were utilized.
2.2. Plant material
Round white cabbage was selected as a model plant, due to low
concentration of cinnamic acids and the absence of flavonoids. The
variety ‘Lennox’ was obtained from a local market in October 2010
for the storage experiment under UV-B, and in January 2011 for the
fermentation experiment.
2.3. UV-B treatment (experiment 1)
The leaf layers of three cabbage heads were separated into outer,
middle and inner leaves. Between each layer, three leaves were discarded
to enable a distinct separation of the different layers.
Cabbage leaves were randomized and one part was stored
under UV-B light (0.3–0.4 W/m2
, 290–315 nm, 12 h per day) at
4 C and the other part stored completely in the dark at 4 C.
Sampling was done in triplicate after 2, 4, and 7 days (7 days only
for stored leaves in the dark). After sampling the plant material
was freeze-dried, ball-milled and stored until further analysis.
48 B. Harbaum-Piayda et al. / Food Chemistry 197 (2016) 47–56
2.4. UV-B and fermentation experiment (experiment 2)
Due to the limited shelf life and appearance of the leaves (see
Sections 2.3 and 3.1) the time for post-harvest treatments before
fermentation was limited to 2 days with UV-B (12 h per day,
0.3–0.4 W/m2
, 290–315 nm) and without UV-B treatment (dark)
at 4 C (first sampling). After that, 2% salt was added to the shredded
white cabbage and approximately 200 g was placed in a vessel
under pressure. Fermentation was carried out at 20 C for the first
5 days and at 12 C for further 4 weeks (second sampling). After
sampling the plant material was freeze-dried, ball-milled and
stored until further analysis.
2.5. Determination of pH and weight loss
The plant material of the storage experiment was weighed
prior, as well as during, UV-B and dark treatment to determine
the weight loss. Furthermore, a determination of pH of the nonfermented
shredded or fermented plant material was carried out
directly after opening in the fermentation pots by a pH meter
(WTW Inolab IDS Multi 9420).
2.6. Extraction or isolation of secondary plant compounds
2.6.1. Extraction procedure 1 (polyphenol extraction)
The plant material (experiment 1, see Section 2.3) was
extracted as presented by Harbaum et al. (2007). Lyophilized plant
material (approx. 0.3 g) was mixed with 4 ml of aqueous methanol
(50%, v/v) containing 1% m-phosphoric acid and 0.5% oxalic acid
dihydrate, treated with ultrasonication for 1 min, and centrifuged.
The supernatant was collected, and the extraction procedure was
repeated three times with 2 ml of solvent. The collected supernatants
were made up to 10 ml, filtered, and stored at
20 C until
further analysis.
2.6.2. Extraction procedure 2 (polyphenol and glucosinolate
extraction)
The extraction of plant material (experiment 2, see Section 2.4)
was carried out according to Francisco et al. (2009) with modifications.
Approx. 0.1 g powdered plant material was mixed with
1.5 ml cold methanol (4 C), placed in a water bath at 70 C for
5 min and centrifuged. The supernatant was collected and the
extraction procedure was repeated two times with 1 ml cold
methanol and further heating at 70 C. The combined organic layers
were reduced to dryness under high vacuum. The residue was
redissolved in exactly 500 ll of 50% aqueous methanol and stored
at
20 C until further analysis.
2.6.3. Isolation of unknown compounds for direct infusion mass
spectrometry
Approximately 10 g of freeze dried plant material (UV-treated
and further fermented) was suspended in 100 ml dest. water and
sonicated for 10 min. The suspension was centrifuged and the procedure
was repeated with 50 ml dest. water. The aqueous layers
were combined and filtered through a column (Chromabond
C18ec, 70 ml/10000 mg). The column was rinsed with approx.
50 ml water, 50 ml 20% aqueous methanol, and 50 ml 100% methanol.
The different phases were analyzed by HPLC as described
below (see 2.7). The 20% methanol layer were reduced to dryness
and redissolved in 1 ml dest. water. The concentrated extract was
fractionated by prep. HPLC (injection volume 1 ml; column:
250 21 mm (inside diameter), 5 lm, RP-18Nucleodur column at
a flow rate of 20 ml/min by gradient elution. Eluent A consisted
of 100% water and eluent B of 100% methanol. The gradient was
as follows: 0% B at 0 min, 0% B at 2 min, and 100% B at 20 min.
Detection was carried out by UV absorption at 280 nm. The eluted
mobile phase was collected at 9.4 to 9.6 min and the solvent volume
was reduced to approx. 1 ml prior to direct infusion into the
MS-ion trap system (see Section 2.7).
2.7. HPLC-DAD, HPLC-MS2 analysis and direct infusion MS
The HPLC analyses were carried out on an HP1100 HPLC system
(Agilent Technology, Waldbronn, Germany) equipped with a diode
array detector. Separation was carried out on a 250 mm 4 mm
(inside diameter), 5 lm, RP-18 Nucleodur column with an
8 mm 4 mm Nucleodur guard column at 20 C.
The nebulizer pressure was 60 psi and the nitrogen flow rate
10 l/min at a drying temperature of 350 C. Mass scans were performed
from m/z 50 to 2000 in negative and positive ionization
mode (alternating). Helium was used as the collision gas for the
fragmentation of the isolated compounds in the ion trap. The
detection conditions for HPLC-MS analyses were as follows: capillary
voltage, 3500 V; skimmer voltage, ±40 V; cap exit voltage,
±158.5 V; Oct1DC, ±12 V; Oct2DC, ±2.45 V; trap drive level, 45.0;
OctRF, 150 Vpp; Lens1, 5.0 V; Lens2, 60 V. MS2 experiments were
carried out via an isolation and fragmentation procedure of
detected ions (auto MS2
) (Harbaum et al., 2007).
The conditions for direct infusion of the unknown compound, as
presented under 2.6.3, were as follows: mass scans were performed
in the negative mode; capillary voltage, 3500 V; skimmer
voltage,
40 V; cap exit voltage,
98.5 V; Oct1DC,
12 V; Oct2DC,

1.70 V; trap drive level, 35.7; OctRF, 103.0 Vpp; Lens1, 5.0 V; Lens2,
60 V. MS2 experiments were carried out via isolation and fragmentation
procedures of the detected ion.
2.7.1. Grad

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. เคมีภัณฑ์Acetonitrile (HPLC-เกรด วิทยาศาสตร์ Fisher), ascorbigen (APINสารเคมี), t cinnamic กรด (เมอร์ค), กรด caffeic (Carl GmbH รอด),p-coumaric กรด (ซิกมา), (Carl GmbH รอด), กรด ferulic(Carl GmbH รอด), glucobrassicin (Phytolab), เมทานอล (HPLCgradeฟิชเชอร์วิทยาศาสตร์), กรดออกซาลิก dehydrate (Carl รอด GmbH),กรด m phosphoric (Fluka), กรด sinapic (Carl รอด GmbH), และตรี-มีใช้กรด fluoroacetic (Carl รอด GmbH)2.2. พืชวัสดุกะหล่ำปลีขาวกลมถูกเลือกเป็นแบบจำลองพืช ผลต่ำความเข้มข้นของกรดทรานส์-ซินนามิกและการขาดงานของ flavonoids ที่หลากหลาย 'เลน' ได้รับจากท้องตลาดในเดือนตุลาคม 2553 พ.ศ.สำหรับเก็บข้อมูลการทดลองภาย ใต้ UV-B และ ในเดือน 2554 มกราคมสำหรับการการทดลองหมัก2.3. ยูวี-บีรักษา (ทดลอง 1)ชั้นใบของหัวกะหล่ำปลี 3 ถูกแบ่งออกเป็นด้านนอกใบกลาง และภายใน แต่ละชั้น สามใบได้ถูกยกเลิกการแยกความแตกต่างของชั้นที่แตกต่างกันกะหล่ำปลีใบมี randomized และส่วนหนึ่งถูกเก็บไว้ภายใต้แสง UV-B (0.3-0.4 W/m2, 290-315 nm, h 12 ต่อวัน) ที่4 C และส่วนอื่น ๆ ที่เก็บไว้ทั้งในมืดที่ค. 4สุ่มตัวอย่างทำใน triplicate หลังจากวันที่ 2, 4 และ 7 (7 วันเท่านั้นสำหรับเก็บใบไม้ในมืด) หลังจากสุ่มตัวอย่างวัสดุโรงงานมีกรอบ ปลายลูก และเก็บไว้จนกว่าจะวิเคราะห์ต่อไปAl. et Harbaum Piayda B. 48 / เคมีอาหาร 197 (2016) 47-562.4. UV-B และหมักทดลอง (ทดลอง 2)จำกัดอายุและลักษณะของใบ (ดูส่วน 2.3 และ 3.1) เวลาสำหรับการรักษาหลังการเก็บเกี่ยวก่อนหมักได้ 2 วันมี UV-B (12 h ต่อวัน จำกัด0.3 – 0.4 W/m2, 290-315 nm) และไม่ มี UV-B รักษา (มืด)ที่ C 4 (ก่อนสุ่มตัวอย่าง) หลังจากนั้น เกลือ 2% เพิ่มการที่หั่นประมาณ 200 g และกะหล่ำปลีสีขาวถูกวางไว้ในเรือภายใต้ความกดดัน หมักทำออกที่ 20 C สำหรับครั้งแรกวันที่ 5 และ 12 C ต่อ 4 สัปดาห์ (สุ่มตัวอย่างที่สอง) หลังจากสุ่มตัวอย่างวัสดุที่โรงงานมีกรอบ ปลายลูก และเก็บไว้จนกว่าจะวิเคราะห์ต่อไป2.5 การกำหนดของ pH และน้ำหนักการสูญเสียมีการชั่งน้ำหนักวัสดุพืชทดลองเก็บรักษา ก่อน เป็น UV B และเข้มเพื่อกำหนดการสูญเสียน้ำหนัก นอกจากนี้ การกำหนดค่า pH ของการ nonfermentedหยอง หรือหมักพืชวัสดุถูกดำเนินการหลังจากเปิดหม้อหมักด้วยเครื่องวัดค่า pH ได้โดยตรง(WTW Inolab รหัสหลาย 9420)2.6 การสกัดหรือแยกสารพืชรอง2.6.1 การสกัดขั้นตอน 1 (polyphenol สกัด)วัสดุโรงงาน (ทดลอง 1 ดูหัวข้อ 2.3) ได้แยกเป็นการนำเสนอโดย Harbaum et al. (2007) พืช lyophilizedวัสดุ (ประมาณ 0.3 g) ถูกผสมกับ ml 4 ของเมทานอลอควี(50%, v/v) ที่ประกอบด้วยกรดออกซาลิก 0.5% และ 1% กรด m phosphoricdihydrate รักษา ด้วย ultrasonication ใน 1 นาที และ centrifugedSupernatant ถูกรวบรวม และขั้นตอนการสกัดได้ทำซ้ำ 3 ครั้งกับ 2 ml ของตัวทำละลาย Supernatants รวบรวมทำถึง 10 ml กรอง และจัดเก็บที่ 20 C จนถึงวิเคราะห์เพิ่มเติม2.6.2 การสกัดขั้นตอนที่ 2 (polyphenol และ glucosinolateแยก)แยกวัสดุโรงงาน (ทดลอง 2 ดูส่วน 2.4)ได้ดำเนินการตาม Francisco et al. (2009) มีการปรับเปลี่ยนประมาณ 0.1 g ผงพืชวัสดุที่ผสมกับ1.5 ml เย็นเมทานอล (4 C), วางในอ่างน้ำที่ C 70 สำหรับ5 นาที และ centrifuged Supernatant ถูกรวบรวมและกระบวนการสกัดที่ซ้ำสองครั้งกับมลเย็น 1เมทานอลและเพิ่มเติม ความร้อนที่ 70 c ชั้นอินทรีย์รวมได้ลดความแห้งกร้านภายใต้สุญญากาศสูง สารตกค้างถูกredissolved ใน 500 ว่าจะเมอควี 50% และเก็บไว้ที่ 20 C จนถึงการวิเคราะห์ต่อไป2.6.3 การแยกสารที่ไม่รู้จักสำหรับคอนกรีตโดยตรงโดยรวมspectrometryวัสดุโรงงานอบแห้งแช่แข็งประมาณ 10 g (UV-รักษาและหมักต่อไป) ถูกหยุดชั่วคราวในทดสอบ 100 ml น้ำ และsonicated สำหรับ 10 นาที การระงับได้ centrifuged และกระบวนการไม่ซ้ำกับทดสอบ 50 ml น้ำ ชั้นอควีรวม และกรองผ่านคอลัมน์ (ChromabondC18ec, 70 ml/10000 mg) คอลัมน์ถูก rinsed ด้วยประมาณน้ำ 50 ml, 50 ml 20% อควีเมทานอล และเมทานอล 100% 50 mlระยะต่าง ๆ ถูกวิเคราะห์ ด้วย HPLC ดังที่ด้านล่าง (ดู 2.7) ชั้นเมทานอล 20% ได้ลดความแห้งกร้านและ redissolved ในการทดสอบ 1 ml น้ำ มีสารสกัดเข้มข้นแบ่ง โดยเตรียม HPLC (ฉีดปริมาณ 1 ml คอลัมน์:250 mm 21 (ภายในเส้นผ่าศูนย์กลาง), การ 5 lm, RP 18Nucleodur คอลัมน์ที่อัตราการไหลของปริมาณ 20 ml/min โดย elution ไล่ระดับ Eluent A ประกอบด้วยน้ำ 100% และ eluent B ของเมทานอล 100% มีการไล่ระดับสีต่อไปนี้: % 0 B ที่นาทีที่ 0, 0% B 2 นาที และ 100% B 20 นาทีตรวจสอบได้ดำเนินการ โดยดูดซึมรังสียูวีที่ 280 nm ที่ elutedระยะเคลื่อนรวบรวมที่ 9.4-9.6 นาทีและปริมาณตัวทำละลายถูกลดลงไปประมาณ 1 ml ก่อนคอนกรีตโดยตรงเป็นการระบบตรวจจับของ MS-ไอออน (ดู 2.7 ส่วน)2.7 การ HPLC-พ่อ วิเคราะห์ HPLC MS2 และคอนกรีตตรง MSวิเคราะห์ HPLC ได้ดำเนินการระบบ HP1100 HPLC(Agilent เทคโนโลยี Waldbronn เยอรมนี) พร้อมกับไดโอดเรย์จับ แยกถูกดำเนินการบน 250 มม. 4 มม.(ภายในเส้นผ่าศูนย์กลาง), lm คอลัมน์ Nucleodur RP-18 มี 5 ตัวมม. 8 มม. 4 คอลัมน์ Nucleodur ยามที่ 20 เซลเซียสมีฝอยละอองความดัน 60 psi และอัตราการไหลของไนโตรเจนดำเนิน 10 l/min อุณหภูมิอบแห้งของสแกนโดยรวมราว 350จาก m/z 50-2000 ใน ionization ลบ และบวกโหมด (สลับ) ใช้ฮีเลียมเป็นก๊าซชนสำหรับการการกระจายตัวของสารที่แยกกับไอออน ที่ตรวจสอบเงื่อนไขสำหรับวิเคราะห์ HPLC MS มีดังนี้: เส้นเลือดฝอยแรงดัน 3500 V แรงดันแหล่ง ±40 V แรงดันออกจากหมวก±158.5 V Oct1DC, ±12 V Oct2DC, ±2.45 V ตรวจจับไดรฟ์ระดับ 45.0OctRF, 150 Vpp Lens1, 5.0 V Lens2, 60 V. MS2 ทดลองได้ดำเนินการผ่านขั้นตอนการแยกและการกระจายตัวของพบกัน (อัตโนมัติ MS2) (Harbaum et al., 2007)เงื่อนไขสำหรับคอนกรีตผสมไม่ทราบ โดยตรงเป็นนำเสนอภายใต้ 2.6.3 มีดังนี้: ดำเนินการสแกนใหญ่ในโหมดค่าลบ แรงดันรูพรุน 3500 V แหล่งแรงดัน 40 V แรงดันออกจากหมวก 98.5 V Oct1DC, 12 V Oct2DC1.70 V ตรวจจับไดรฟ์ระดับ 35.7 OctRF, 103.0 Vpp Lens1, 5.0 V Lens260 V. MS2 ทดลองได้ดำเนินการแยกและการกระจายตัวของขั้นตอนของไอออนตรวจพบ2.7.1 การจบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 สารเคมี
Acetonitrile (HPLC เกรดฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์) ascorbigen (APIN
สารเคมี), กรดเสื้อซินนามิก (เมอร์ค), กรด caffeic (คาร์ลโรท GmbH)
กรดพี coumaric (ซิกม่า), กรดฟอร์มิ (คาร์ลโรท GmbH) ferulic กรด
(คาร์ลโรท GmbH) glucobrassicin (Phytolab), เมทานอล (HPLCgrade,
ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์) ขจัดน้ำกรดออกซาลิ (คาร์ลโรท GmbH)
กรดฟอสฟม (Fluka) กรด sinapic (คาร์ลโรท GmbH)
และไตรกรดfluoroacetic (คาร์ลโรท GmbH) ถูกนำมาใช้.
2.2 วัสดุปลูกรอบผักกาดขาวได้รับเลือกเป็นพืชแบบเนื่องจากต่ำความเข้มข้นของกรดซินนามิกและการขาดของflavonoids หลากหลาย 'เลนน็อกซ์' ที่ได้รับจากตลาดในประเทศในเดือนตุลาคม 2010 สำหรับการจัดเก็บข้อมูลการทดลองภายใต้ UV-B และในเดือนมกราคม 2011 สำหรับการทดลองหมัก. 2.3 การรักษา UV-B (การทดลองที่ 1) ชั้นใบสามหัวกะหล่ำปลีที่ถูกแยกออกเป็นชั้นนอกใบตรงกลางและด้านใน ระหว่างแต่ละชั้นสามใบถูกโยนทิ้งเพื่อให้แยกความแตกต่างของชั้นที่แตกต่างกัน. ใบกะหล่ำปลีถูกสุ่มและส่วนหนึ่งถูกเก็บไว้ภายใต้แสงยูวี-B (0.3-0.4 W / m2, 290-315 นาโนเมตร 12 ชั่วโมงต่อวัน) ที่4 ซีและส่วนอื่น ๆ ที่เก็บไว้อย่างสมบูรณ์ในที่มืดที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสการสุ่มตัวอย่างได้ทำในเพิ่มขึ้นสามเท่าหลังจาก2, 4 และ 7 วัน (7 วันเท่านั้นสำหรับใบที่เก็บไว้ในที่มืด) หลังจากการสุ่มตัวอย่างวัสดุจากพืชเป็นแห้ง, ลูกบดและเก็บไว้จนการวิเคราะห์ต่อไป. 48 บี Harbaum-Piayda et al, / อาหารเคมี 197 (2016) 47-56 2.4 UV-B และการทดสอบการหมัก (ทดลอง 2) เนื่องจากอายุการเก็บรักษาที่ จำกัด และลักษณะของใบ (ดูมาตรา2.3 และ 3.1) เวลาสำหรับการรักษาหลังการเก็บเกี่ยวก่อนที่จะหมักถูกจำกัด ให้ 2 วันกับ UV-B (12 ชั่วโมงต่อ วัน0.3-0.4 W / m2, 290-315 นาโนเมตร) และไม่มีการรักษา UV-B (เข้ม) ที่ 4 C (การสุ่มตัวอย่างครั้งแรก) หลังจากนั้นเกลือ 2% เพิ่มที่หั่นผักกาดขาวและประมาณ200 กรัมวางอยู่ในเรือภายใต้ความกดดัน หมักได้ดำเนินการที่ 20 องศาเซลเซียสเป็นครั้งแรกวันที่5 และ 12 องศาเซลเซียสเป็นเวลาอีก 4 สัปดาห์ที่ผ่านมา (สุ่มตัวอย่างวินาที) หลังจากการเก็บตัวอย่างพืชที่ถูกแช่แข็งแห้งลูกบดและเก็บไว้จนการวิเคราะห์ต่อไป. 2.5 การกำหนดค่า pH และการสูญเสียน้ำหนักวัสดุที่โรงงานของการทดลองการจัดเก็บที่ถูกชั่งน้ำหนักก่อนเช่นเดียวกับในช่วงUV-B และการรักษาที่มืดเพื่อตรวจสอบการสูญเสียน้ำหนัก นอกจากนี้การกำหนดค่า pH ของ nonfermented หั่นหรือวัสดุจากพืชหมักได้ดำเนินการโดยตรงหลังจากที่เปิดในกระถางหมักโดยค่า pH เมตร (WTW Inolab หลาย IDS 9420). 2.6 การสกัดหรือแยกของพืชรองสารประกอบ2.6.1 ขั้นตอนการสกัดที่ 1 (โพลีฟีนสกัด) วัสดุพืช (การทดลองที่ 1 โปรดดูมาตรา 2.3) ถูกสกัดตามที่นำเสนอโดยHarbaum et al, (2007) พืชแห้งวัสดุ (ประมาณ. 0.3 กรัม) ผสมกับ 4 มิลลิลิตรเมทานอลในน้ำ (50% v / v) ที่มีกรดมฟอสฟ 1% และ 0.5% กรดออกซาลิdihydrate, การรักษาด้วย ultrasonication เวลา 1 นาทีและหมุนเหวี่ยง. ใสถูกเก็บรวบรวมและขั้นตอนการสกัดซ้ำสามครั้งด้วย 2 มิลลิลิตรของตัวทำละลาย supernatants ที่เก็บรวบรวมได้ทำถึง10 มล. กรองและเก็บไว้ที่ 20 องศาเซลเซียสจนการวิเคราะห์ต่อไป. 2.6.2 ขั้นตอนการสกัด 2 (โพลีฟีนและ glucosinolate สกัด) สกัดจากพืช (การทดลองที่ 2 ดูหัวข้อ 2.4) ได้ดำเนินการตามที่ฟรานซิสและอัล (2009) มีการปรับเปลี่ยน. โดยประมาณ 0.1 กรัมผงวัสดุปลูกผสมกับ1.5 มล. เมทานอลเย็น (4 C) วางไว้ในอ่างน้ำที่ 70 องศาเซลเซียสเป็นเวลา5 นาทีและหมุนเหวี่ยง สารละลายที่ถูกเก็บรวบรวมและขั้นตอนการสกัดซ้ำสองครั้งด้วย 1 มล. เย็นเมทานอลต่อไปและความร้อนที่70 องศาเซลเซียสรวมชั้นอินทรีย์ถูกลดความแห้งกร้านภายใต้สุญญากาศสูง ที่เหลือถูกredissolved ในตรง 500 LL ของเมทานอล 50% น้ำและเก็บไว้ที่20 องศาเซลเซียสจนการวิเคราะห์ต่อไป. 2.6.3 การแยกสารที่ไม่รู้จักมวลแช่โดยตรงspectrometry ประมาณ 10 กรัมวัสดุจากพืชแช่แข็งแห้ง (UV ได้รับการรักษาและการหมักต่อไป) ถูกระงับใน 100 มล. ปลายทาง น้ำและsonicated เป็นเวลา 10 นาที ระงับถูกปั่นและขั้นตอนซ้ำกับ 50 มลปลายทาง น้ำ. ชั้นน้ำมารวมกันและกรองผ่านคอลัมน์ (Chromabond C18ec 70 มล. / 10,000 มก.) คอลัมน์ที่ได้รับการล้างด้วยประมาณ. 50 มล. น้ำ 50 มลเมทานอล 20% น้ำและเมทานอล 50 มล. 100%. ขั้นตอนที่แตกต่างกันนำมาวิเคราะห์โดยวิธี HPLC ตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง(ดู 2.7) ชั้นเมทานอล 20% ถูกลดความแห้งกร้านและredissolved ใน 1 มิลลิลิตรปลายทาง น้ำ. สารสกัดเข้มข้นได้รับการfractionated โดยเตรียม HPLC (ปริมาณการฉีด 1 มิลลิลิตรคอลัมน์: 250 21 มิลลิเมตร (เส้นผ่าศูนย์กลางภายใน) 5 LM คอลัมน์ RP-18Nucleodur ที่อัตราการไหล20 มล. / นาทีโดยชะลาดตัวชะประกอบด้วย. น้ำ 100% และตัวชะ B 100% . เมทานอลการไล่ระดับสีที่ได้รับการดังนี้. 0% B ที่ 0 นาที 0% B ที่ 2 นาทีและ B 100% ใน 20 นาทีการตรวจสอบได้ดำเนินการโดยการดูดซึมรังสียูวีที่280 นาโนเมตรชะ. เฟสเคลื่อนที่ถูกเก็บที่ 9.4 การ 9.6 นาทีและปริมาณตัวทำละลายลดลงเป็นประมาณ. 1 มล. ก่อนที่จะนำยาเข้าสู่ระบบดักMS-ไอออน (ดูมาตรา 2.7). 2.7. HPLC-DAD วิเคราะห์ HPLC-MS2 และแช่โดยตรง MS HPLC วิเคราะห์ได้ดำเนินการ บนระบบ HPLC HP1100 (Agilent เทคโนโลยี Waldbronn, เยอรมนี) พร้อมกับไดโอดเครื่องตรวจจับอาร์เรย์. แยกได้ดำเนินการใน 250 มม 4 มม(ภายในเส้นผ่าศูนย์กลาง) 5 LM, RP-18 คอลัมน์ Nucleodur กับ8 มม 4 มม Nucleodur คอลัมน์ยามที่ 20 องศาเซลเซียสความดันnebulizer 60 ปอนด์ต่อตารางนิ้วและอัตราการไหลของไนโตรเจน10 ลิตร / นาทีที่อุณหภูมิอบแห้ง 350 สแกนซีมวลได้ดำเนินการจากม. / z 50-2000 ไอออนไนซ์ในเชิงลบและบวกโหมด(สลับ) ฮีเลียมถูกใช้เป็นก๊าซชนสำหรับการกระจายตัวของสารที่แยกอยู่ในกับดักไอออน เงื่อนไขการตรวจสอบสำหรับการวิเคราะห์ HPLC-MS มีดังนี้ฝอยแรงดันไฟฟ้า3500 V; แรงดันไฟฟ้าพาย, ± 40 V; แรงดันไฟฟ้าออกจากหมวก± 158.5 V; Oct1DC, ± 12 V; Oct2DC, ± 2.45 V; กับดักระดับไดรฟ์ 45.0; OctRF 150 Vpp; Lens1, 5.0 V; Lens2 60 โวลต์การทดลอง MS2 ถูกดำเนินการผ่านขั้นตอนการแยกและการกระจายตัวของไอออนที่ตรวจพบ(อัตโนมัติ MS2) (Harbaum et al., 2007). เงื่อนไขสำหรับการฉีดโดยตรงของสารประกอบที่ไม่รู้จักในขณะที่นำเสนอภายใต้ 2.6.3 ได้ ดังต่อไปนี้: สแกนมวลได้ดำเนินการในโหมดลบ; แรงดันของเส้นเลือดฝอย, 3500 V; พายแรงดันไฟฟ้า 40 V; แรงดันไฟฟ้าออกจากหมวก 98.5 V; Oct1DC 12 V; Oct2DC, 1.70 V; กับดักไดรฟ์ระดับ 35.7; OctRF, 103.0 Vpp; Lens1, 5.0 V; Lens2, 60 โวลต์การทดลอง MS2 ได้ดำเนินการผ่านทางแยกและการกระจายตัวของขั้นตอนของไอออนตรวจพบ. 2.7.1 จบการศึกษา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . ไนสารเคมี
( HPLC Grade , ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ ) , ascorbigen ( apin
เคมี ) , t-cinnamic acid ( Merck ) , กรด Caffeic ( คาร์ล Roth GmbH )
p-coumaric acid ( Sigma ) กรด ( คาร์ล Roth GmbH ) , กรด ferulic
( คาร์ล Roth GmbH ) glucobrassicin ( phytolab ) , เมทานอล ( hplcgrade
ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ , ) , กรดออกซาลิ dehydrate ( คาร์ล Roth GmbH )
m-phosphoric acid ( fluka )sinapic acid ( คาร์ล Roth GmbH ) และ Tri -
fluoroacetic acid ( คาร์ล Roth GmbH ) ที่ใช้ .
2.2 . วัสดุปลูกผักกาดขาว
รอบได้รับเลือกเป็นแบบพืช เนื่องจากความเข้มข้นต่ำของกรดซินนามิก
และการขาดงานของฟลาโวนอยด์ .
ความหลากหลาย ' วันนี้ ' ได้รับจากตลาดในประเทศในเดือนตุลาคม 2010
สำหรับกระเป๋าทดลองภายใต้รังสียูวี บี และในเดือนมกราคม 2011 สำหรับ
และการทดลอง
2.3 การรักษารังสียูวี บี ( การทดลองที่ 1 )
3 ชั้นของใบกะหล่ำปลีหัวออกเป็นชั้นนอก ชั้นกลาง และชั้นใน
ใบ . ระหว่างแต่ละชั้น สามใบถูกทิ้ง
เพื่อให้แยกแตกต่างกันของชั้นแตกต่างกัน .
ใบกะหล่ำปลีสุ่มและส่วนหนึ่งถูกเก็บไว้
ภายใต้แสงรังสียูวี บี ( 0.3 - 0.4 W / m2
, 290 - 315 nm , 12 ชั่วโมงต่อวัน )
4 C และอีกส่วนหนึ่งเก็บไว้อย่างสมบูรณ์ในที่มืดที่ 4 C .
สุ่มตัวอย่างทั้งสามใบหลัง 2 , 4 , และ 7 วัน ( 7 วันเท่านั้น
สำหรับเก็บใบในที่มืด ) หลังจากวัสดุพืช
3 ) แห้ง , ลูกบดและเก็บไว้จนกว่าการวิเคราะห์เพิ่มเติม .
48 . harbaum piayda et al . อาหาร / เคมี 197 ( 2016 ) 47 – 56
2.4 . ยูวี - ขหมักและทดลอง ( การทดลองที่ 2 )
เนื่องจากการ จำกัด อายุและลักษณะของใบ ( เห็น
ส่วน 2.3 และ 3.1 ) เวลาหลังการเก็บเกี่ยวการรักษาก่อน
หมัก ( 2 วันกับรังสียูวี บี ( 12 ชม. ต่อวัน
w / m2
0.3 และ 0.4 , 290 - 315 nm ) และไม่มีการรักษารังสียูวี บี ( มืด )
ที่ 4 C ( 1 คน ) หลังจากนั้น 2 % เกลือเพิ่มกะหล่ำปลีหั่นฝอย
ประมาณ 200 กรัมและสีขาวถูกวางไว้ในภาชนะ
ภายใต้ความกดดัน การหมักถูกดำเนินการที่ 20 C ครั้งแรก
5 วันที่ 12 องศาเซลเซียส เป็นเวลาอีก 4 สัปดาห์ ( 2 คน ) หลังจาก
วัสดุพืชแห้ง อย่าง บอลบดและ

เก็บไว้จนกว่าการวิเคราะห์เพิ่มเติม . 2.5 ความมุ่งมั่นของ pH และ
การสูญเสียน้ำหนักพืชวัสดุของกระเป๋าทดลองชั่งน้ำหนัก
ก่อน รวมทั้งในการรักษารังสียูวี บีและมืดหา
น้ำหนักขาดทุน นอกจากนี้ การกำหนด ของ nonfermented
ฝอยหรือหมักวัสดุพืชทำการ
โดยตรงหลังจากที่เปิดในการหมักหม้อโดยเครื่องวัด
( wtw inolab รหัสหลาย 9420 ) .
2.6 การสกัดหรือแยกสารรองพืช
ดูแล . ขั้นตอนการสกัด 1 ( สกัด polyphenol )
วัสดุพืช ( การทดลองที่ 1 ดูมาตรา 2.3 ) คือ
สกัดที่นำเสนอโดย harbaum et al . ( 2007 ) วัสดุจากพืช
แห้ง ( ประมาณ 0.3 กรัม ) ผสมกับ 4 มิลลิลิตร สารละลายเมทานอล
( 50 % v / v ) ที่ประกอบด้วยกรด 0.5% และ 1% m-phosphoric dihydrate กรดออกซาลิก
, การรักษาด้วย ultrasonication นาน 1 นาที และที่ระดับ .
น่าน รวบรวมข้อมูล และขั้นตอนการสกัด
ซ้ำ 3 ครั้ง กับ 2 ml ของตัวทำละลาย รวบรวม supernatants
ถูกสร้างขึ้นเพื่อ 10 มิลลิลิตร กรอง และเก็บไว้ที่
20 C ถึง

ดาวน์โหลดการวิเคราะห์ต่อไป . . ขั้นตอนการสกัด 2 ( polyphenol และการสกัดกลูโคซิโนเลต
)
การสกัดวัสดุพืช ( การทดลองที่ 2 ดูส่วน 2.4 )
ได้ดําเนินการตามฟราน et al . ( 2009 ) มีการปรับเปลี่ยน .
ประมาณ 0.1 กรัมผงวัสดุปลูกผสมกับเมทานอล 1.5 ml เย็น (
4 C )อยู่ในอ่างน้ำที่ 70 C
5 นาที ไฟฟ้า . การรวบรวมและนำกระบวนการสกัดซ้ำ 2 ครั้ง

1 ml เย็นและความร้อนที่ 70 องศาเซลเซียส ส่วนเพิ่มเติมอินทรีย์รวมชั้น
ลดแห้งภายใต้สูญญากาศสูง ตกค้าง
redissolved ตรง 500 จะ 50 % สารละลายเมทานอลและเก็บไว้
ที่
20 C จนถึงการวิเคราะห์เพิ่มเติม .
2.6.3 .การแยกสารประกอบที่ไม่รู้จักโดยตรงฉีดมวล spectrometry

ประมาณ 10 กรัม ตรึงแห้งวัสดุพืช ( UV รักษา
และต่อไปหมัก ) ถูกระงับใน 100 มิลลิลิตร เตเดสท์ . น้ำและ
sonicated 10 นาทีถูกระงับไฟฟ้าและกระบวนการ
ทำซ้ำกับ 50 มิลลิลิตร เตเดสท์ . น้ำ ที่มีชั้น
ถูกรวมและกรองผ่านคอลัมน์ ( chromabond c18ec
,70 มิลลิลิตร / 10000 มิลลิกรัม คอลัมน์ที่ถูกล้างด้วยน้ำประมาณ 50 ml
50 ml สารละลายเมทานอล 20% และ 50 ml 100 % เมทานอล
ขั้นตอนต่าง ๆมาวิเคราะห์โดย HPLC ตามที่อธิบาย
ด้านล่าง ( เห็น 2.7 ) 20 % เมทานอลชั้นถูกลดความแห้งกร้าน และ redissolved
ใน 1 มิลลิลิตรเตเดสท์ . น้ำ สารสกัดเข้มข้นเป็นลำดับ โดยเตรียมหา
( ฉีดปริมาณ 1 มิลลิลิตร ; คอลัมน์ :
250 21 มม. ( เส้นผ่านศูนย์กลางภายใน 5 กล. ) ,คอลัมน์ : rp-18nucleodur ที่อัตรา 20 มิลลิลิตรต่อนาทีโดยการใช้ . ตัวแบบประกอบด้วย
น้ำ 100% และตัว B 100 % เมทานอล การไล่ระดับสีได้ดังนี้ 0
% B ที่ 0 นาที 0 % B อยู่ 2 นาที และ 100 % B ที่ 20 นาที
ตรวจจับการกระทำโดยการดูดกลืน UV ที่ 280 nm . ที่รวบรวมตัวอย่าง
เฟสเคลื่อนที่ที่ 9.4 ถึง 9.6 มินและปริมาณก็ลดลงประมาณ
.1 มิลลิลิตร ก่อนฉีดโดยตรงลงใน
นางสาวสมส่วนระบบ ( ดูที่ส่วน 2.7 ) .
2.7 . hplc-dad hplc-ms2 , การวิเคราะห์และ MS Infusion ตรง
HPLC วิเคราะห์ พบว่าในระบบ HPLC hp1100
( Agilent เทคโนโลยี waldbronn , เยอรมนี ) พร้อมกับไดโอด
เรย์ตรวจจับ การกระทำใน 250 มม. 4 มม.
( เส้นผ่าศูนย์กลางภายใน ) , 5 โดย rp-18 ด้วย
nucleodur , คอลัมน์8 มิลลิเมตร 4 ยาม nucleodur มม. คอลัมน์ที่ 20 C .
nebulizer ความดัน 60 psi และไนโตรเจนอัตราการไหล
10 ลิตร / นาที ที่อุณหภูมิ 350 องศาเซลเซียสแห้งมวลสแกนจำนวน
จาก M / Z 50 ปีในด้านบวกและลบโหมดอิออน
( สลับกัน ) ฮีเลียมถูกใช้เป็นแก๊สชนสำหรับ
การแตกแยกของแยกสารประกอบไอออนกับดัก
เงื่อนไขการตรวจสอบ hplc-ms วิเคราะห์ดังนี้ C
3 V ; แรงดันไฟฟ้า Skimmer แรงดัน± 40 V ;
±แรงดันออกจากหมวก 158.5 oct1dc ± 12 V , V ; ; oct2dc ± 2.45 , V ; ไดรฟ์กับดักระดับ 45.0 ;
octrf 150 VPP ; lens1 , 5.0 V ; lens2 60 โวลต์ MS2 การทดลอง
ดำเนินการผ่านการแยกและกระบวนการของการตรวจสอบไอออน ( MS2 อัตโนมัติ

) ( harbaum et al . , 2007 ) .
เงื่อนไขการฉีดโดยตรงของสารประกอบที่เป็น
นำเสนอภายใต้ 2.6.3 มีดังนี้ : สแกนมวลจำนวน
ในโหมดลบ ซึ่งแรงดัน 3 V ; Skimmer
แรงดัน
40 V ; แรงดันออกจากหมวก
98.5 oct1dc
12 V , V ;
; oct2dc
1.70 V , กับดัก ; ไดรฟ์ระดับ 97.1 ; octrf 103.0 VPP , ; lens1 , 5.0 V ;
lens2 60 โวลต์ , MS2 การทดลองผ่านการคัดเลือกและ fragmentation
ขั้นตอนของการตรวจพบไอออน
การพัก . จบ