2.2. Production and purification of

2.2. Production and purification of levansucrase
Levansucrase (ATCC 23350) from B. amyloliquefaciens was
produced and purified through PEG 200 precipitation and
size exclusion chromatography as previously described (Tian &
Karboune, 2012). The resulting purified levansucrase was dialyzed
against 5mM potassium phosphate buffer (pH 6.0) using a membrane
(5 kDa cut-off) for 48 h at 4 ◦C and then freeze-dried. The
total levansucrase activity was assayed using sucrose as substrate
as previously described (Tian & Karboune, 2012). The amount of
released reducing sugars was determined from a standard curve
using glucose (0.5–10 mM). All experiments were assayed in triplicates.
The protein content was measured using the Standard
BioRad (USA) Protein Assay. The concentration of protein was
then estimated from a standard curve using bovine serum albumin
(0.0625–1 mg/mL). The specific activity was expressed as the
mol of released glucose or fructose per minute of reaction and
per mg of protein. The specific activity of LS was estimated at
413.3mol/min/mg proteins.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 การผลิตและการทำให้บริสุทธิ์ของ levansucrase
Levansucrase (ATCC 23350) จาก B. amyloliquefaciens ได้รับการ
ผลิตและบริสุทธิ์ผ่าน PEG 200 ตกตะกอนและ
ขนาดยกเว้นโครมาโตตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Tian &
Karboune 2012) ส่งผลให้ levansucrase บริสุทธิ์ dialyzed
กับ 5mm บัฟเฟอร์โพแทสเซียมฟอสเฟต (pH 6.0) โดยใช้เมมเบรน
(5 กิโลดาลตันตัด) เป็นเวลา 48 ชั่วโมงที่ 4 ◦Cแล้วแห้ง
กิจกรรม levansucrase ทั้งหมดได้รับการวิเคราะห์โดยใช้น้ำตาลซูโครสเป็นสารตั้งต้น
ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Tian & Karboune 2012) จำนวนเงิน
ที่ปล่อยออกน้ำตาลลดถูกกำหนดจากเส้นโค้งมาตรฐาน
โดยใช้น้ำตาลกลูโคส (0.5-10 มิลลิเมตร) การทดสอบทั้งหมดและนำไปวิเคราะห์ใน triplicates.
ปริมาณโปรตีนวัดโดยใช้มาตรฐาน
BioRad (USA) โปรตีน Assay ความเข้มข้นของโปรตีน
ประมาณแล้วก็มาจากโค้งมาตรฐานโดยใช้อัลบูมิวัวซีรั่ม
(.0625-1 mg / ml) กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงได้แสดงออกเป็น
? โมเลกุลของน้ำตาลกลูโคสฟรุกโตสเปิดตัวหรือต่อนาทีของการเกิดปฏิกิริยาและ
ต่อมิลลิกรัมโปรตีน กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงของ LS ที่ประมาณ
413.3? โมล / นาที / โปรตีนมิลลิกรัม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . การผลิตและการทำให้บริสุทธิ์ของ levansucraselevansucrase ( ATCC 23350 ) จาก amyloliquefaciens คือ Bผลิตและบริสุทธิ์ที่ผ่านการตกตะกอนและ PEG 200ขนาดยกเว้นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( เทียน & โครมาโตกราฟีkarboune , 2012 ) ผลคือผ่าน levansucrase บริสุทธิ์กับ 5 โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( pH 6.0 ) การใช้เมมเบรน( 5 ) ตัด ) 48 H ที่ 4 ◦ C แล้วทำให้แห้งด้วยความเย็น ที่กิจกรรม levansucrase ซีรั่มใช้น้ำตาลทรายเป็นวัตถุดิบทั้งหมดตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( เทียน & karboune , 2012 ) ปริมาณของออกลดน้ำตาล พิจารณาจากเส้นโค้งมาตรฐานการใช้น้ำตาลกลูโคส ( 0.5 - 10 มม. ) ทั้งหมดจากการทดลองพบว่า ปริมาณ 3 ซ้ำ .การวัดปริมาณโปรตีนมาตรฐานbiorad ( USA ) วิเคราะห์โปรตีน ความเข้มข้นของโปรตีนคือแล้วประเมินจากมาตรฐานเส้นโค้งโดยใช้อัลบูมิน( ผล ) 1 mg / ml ) กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงถูก แสดง เป็นของการปล่อยกลูโคสหรือฟรุคโตสโมลต่อนาทีของการเกิดปฏิกิริยา และต่อมิลลิกรัมโปรตีน กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงของ LS ประมาณโปรตีน 413.3mol/min/mg .