A major problem of long-chain fatty

A major problem of long-chain fatty acid (LCFA) hydroxylation using Escherichia coli is that FadD (long-chain fatty acyl-CoA synthetase), which is necessary for exogenous LCFA transport, also initiates cellular consumption of LCFA. In this study, an effective method to prevent the cellular consumption of LCFA without impairing its transport is proposed. The main idea is that a heterologous enzyme which consumes LCFA can replace FadD in LCFA transport. For the model heterologous enzyme, CYP153A from Marinobacter aquaeolei, which converts palmitic acid into ω-hydroxy palmitic acid, was expressed in E. coli. When fadD was deleted from an E. coli strain, CYP153A indeed maintained the ability to transport LCFA. A disadvantage of fadD deletion mutant is the fact that FadD deficiency downregulates the transcription of fadL (outer membrane LCFA transporter) via FadR (fatty acid metabolism regulator protein), was solved by fadL overexpression from a plasmid. In addition, the overexpression of fadL was able to offset catabolite repression on fadL, allowing glucose to be used as the primary carbon source. In conclusion, the strain with fadD deletion and fadL overexpression showed 5.5-fold increase in productivity compared to the wild-type strain, converting 2.6 g/L (10.0 mM) of palmitic acid into 2.4 g/L (8.8 mM) of ω-hydroxy palmitic acid in a shake flask. This simple genetic manipulation can be applied to any LCFA hydroxylation using E. coli.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ปัญหาสำคัญของกรดไขมันโซ่ยาว (LCFA) hydroxylation Escherichia coli โดยใช้เป็นที่ FadD (ยาวห่วงโซ่ไขมัน acyl CoA synthetase), ซึ่งเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการขนส่งบ่อย LCFA ยังเริ่มใช้โทรศัพท์มือถือของ LCFA ในการศึกษานี้ มีเสนอวิธีมีประสิทธิภาพเพื่อป้องกันการใช้โทรศัพท์มือถือของ LCFA โดย impairing การขนส่ง แนวคิดหลักคือ ว่า เอนไซม์ heterologous ซึ่งใช้ LCFA สามารถแทน FadD ในขนส่ง LCFA สำหรับเอนไซม์ heterologous รุ่น CYP153A จาก Marinobacter aquaeolei ซึ่งสามารถแปลงกรด palmitic กรด palmitic ω hydroxy ถูกแสดงใน E. coli เมื่อ fadD ถูกลบออกจากการต้องใช้ E. coli, CYP153A รักษาความสามารถในการขนส่ง LCFA แน่นอน ข้อเสียของ mutant fadD ลบคือ ความจริงที่ว่า downregulates ขาด FadD transcription ของ fadL (ขนส่งเยื่อนอก LCFA) ผ่าน FadR (กรดไขมันเผาผลาญโปรตีนควบคุม), ถูกแก้ไข โดย fadL overexpression จาก plasmid เป็น นอกจากนี้ overexpression ของ fadL ก็สามารถปราบปราม catabolite บน fadL ช่วยให้น้ำตาลกลูโคสเพื่อใช้เป็นแหล่งคาร์บอนหลักตรงข้าม เบียดเบียน พันธุ์กับ fadD overexpression ลบและ fadL พบ 5.5-fold เพิ่มในผลผลิตเปรียบเทียบกับป่าชนิดพันธุ์ แปลง 2.6 g/L (10.0 mM) ของกรด palmitic เป็น 2.4 g/L (8.8 มิลลิเมตร) ของกรด palmitic ω hydroxy หนาวสั่น จัดการทางพันธุกรรมอย่างนี้สามารถใช้กับ hydroxylation LCFA ใด ๆ ใช้ E. coli

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ปัญหาสำคัญของห่วงโซ่ยาวของกรดไขมัน (LCFA) hydroxylation ใช้เชื้อ Escherichia coli คือ FadD (ยาวโซ่ synthetase ไขมัน acyl-CoA) ซึ่งเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการขนส่ง LCFA ภายนอกยังเริ่มต้นการบริโภคของเซลล์ LCFA ในการศึกษานี้เป็นวิธีการที่มีประสิทธิภาพในการป้องกันการใช้โทรศัพท์มือถือของ LCFA โดยไม่ต้อง impairing ขนส่งมีการเสนอ แนวคิดหลักคือการที่เอนไซม์ heterologous ที่สิ้นเปลือง LCFA สามารถแทนที่ FadD ในการขนส่ง LCFA สำหรับรูปแบบการทำงานของเอนไซม์ heterologous ที่ CYP153A จาก Marinobacter aquaeolei ซึ่งจะแปลงกรดปาล์มิติเป็นกรดปาล์มิติωไฮดรอกซีได้รับการแสดงในเชื้อ E. coli เมื่อ fadD ถูกลบออกจากสายพันธุ์เชื้อ E. coli, CYP153A แน่นอนการดูแลรักษาความสามารถในการขนส่ง LCFA ข้อเสียของการกลายพันธุ์ลบ fadD เป็นความจริงที่ว่าขาด FadD downregulates ถอดความของ Fadl (เยื่อหุ้มชั้นนอกขนส่ง LCFA) ผ่าน FadR (การเผาผลาญกรดไขมันโปรตีนควบคุม) ได้รับการแก้ไขโดยการแสดงออก Fadl จากพลาสมิด นอกจากนี้การแสดงออกของ Fadl ก็สามารถที่จะชดเชยการปราบปรามใน Fadl catabolite ช่วยให้ระดับน้ำตาลที่จะใช้เป็นแหล่งที่มาหลักของคาร์บอน สรุปได้ว่าสายพันธุ์ที่มีการลบ fadD และแสดงออก Fadl พบว่าเพิ่มขึ้น 5.5 เท่าในการผลิตเมื่อเทียบกับสายพันธุ์ป่าชนิดแปลง 2.6 กรัม / ลิตร (10.0 มิลลิเมตร) กรดปาล์มิติลงไป 2.4 กรัม / ลิตร (8.8 มิลลิเมตร) ω- กรดปาล์มิติไฮดรอกซีในขวดสั่น นี้การจัดการทางพันธุกรรมที่เรียบง่ายสามารถนำไปใช้ใด ๆ LCFA hydroxylation ใช้เชื้อ E. coli

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ปัญหาหลักของกรดไขมันโซ่ยาว เป็น ( สาย ) การเตรียมแบบใช้เชื้อ Escherichia coli ที่ fadd ( เปลี่ยนตัวยาอ้วน , เทส ) ซึ่งเป็นสิ่งที่จำเป็นสำหรับการขนส่งสายภายนอก ยังเริ่มใช้โทรศัพท์มือถือของสาย . ในการศึกษานี้วิธีที่มีประสิทธิภาพเพื่อป้องกันการใช้โทรศัพท์มือถือของสายโดยไม่ impairing การขนส่งของมันคือการเสนอแนวคิดหลักคือว่า ชนิด เอนไซม์ ซึ่งจะสามารถทดแทน fadd สายสายในการขนส่ง สำหรับแบบจำลองชนิดเอนไซม์ cyp153a จาก marinobacter aquaeolei ซึ่งแปลงกรดปาล์มิติคในω - hydroxy acid กรด ถูกแสดงออกใน E . coli เมื่อ fadd ถูกลบออกจาก E . coli สายพันธุ์ cyp153a แน่นอนรักษาความสามารถในการขนส่งสาย .ข้อเสียของการ fadd กลายพันธุ์เป็นข้อเท็จจริงว่า การขาด fadd downregulates บัณฑิตยสถานของ fadl ( Transporter สายเนื้อเยื่อชั้นนอก ) ผ่าน fadr ( โปรตีนที่ควบคุมการเผาผลาญกรดไขมัน ) ถูกแก้ไขโดย fadl overexpression จากพลาสมิด นอกจากนี้ overexpression ของ fadl สามารถชดเชย catabolite ปราบปรามใน fadl ให้กลูโคสเป็นแหล่งคาร์บอน หลักสรุป ความเครียดด้วยการลบ fadd fadl overexpression พบ 5.5-fold และเพิ่มผลผลิตของสายพันธุ์ เปรียบเทียบกับแปลง 2.6 กรัม / ลิตร ( 3.9 มม. ) กรดปาล์มิติคเป็น 2.4 g / L ( 8.8 มิลลิเมตร ) ω - hydroxy acid กรดในขวดเขย่า การจัดการทางพันธุกรรมนี้ง่ายสามารถใช้งานกับสายการเตรียมแบบใช้ E . coli .