2. Experimental2.1. Microalgae prep

2. Experimental
2.1. Microalgae preparation and materials
The algae used in all experiments were Scenedesmus acutus
(UTEX B72). Algae were cultured autotrophically in a 5500 L
closed-loop vertical tube photobioreactor located in a greenhouse,
using a urea-based medium containing 0.14 g/L of urea [14]. The
temperature of the culture medium was not controlled and ranged
between 18 and 43 C. After harvesting and dewatering, the algae
(10–15% solids) were dried in an oven at 60 C for 24 h. Algal biomass
from a single harvest (1.1 kg dry weight) was used for all
experiments. The dried algae (3% moisture content) were subsequently
ground in a coffee grinder until the algae particles were
less than 150 lm. After grinding and before all extraction procedures,
algae were heated to 100 C for 24 h to remove residual
water (moisture content

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. ทดลอง2.1. Microalgae เตรียมการและวัสดุสาหร่ายที่ใช้ในการทดลองทั้งหมดถูก Scenedesmus acutus(UTEX B72) สาหร่ายมีอ่าง autotrophically ใน 5500 Lphotobioreactor ปิดท่อแนวตั้งอยู่ในเรือนกระจกโดยใช้สื่อจากยูเรียที่ประกอบด้วย 0.14 g/L ของ urea [14] ที่อุณหภูมิของกลางวัฒนธรรมถูกควบคุม และอยู่ในช่วงระหว่าง 18 และ 43 c หลังจากเก็บเกี่ยว และการแยกน้ำ สาหร่าย(ของแข็ง 10-15%) ถูกอบแห้งในเตาอบที่ 60 C สำหรับ 24 h. Algal ชีวมวลจากเดียวที่ใช้สำหรับเก็บเกี่ยว (1.1 กิโลกรัมน้ำหนักแห้ง)การทดลอง สาหร่ายอบแห้ง (3% ชื้น) ได้ในเวลาต่อมาดินในการบดกาแฟจนได้อนุภาคสาหร่ายน้อยกว่า 150 lm หลัง จากบด และ ก่อนขั้น ตอนการสกัดทั้งหมดสาหร่ายที่อุณหภูมิ 100 C ใน 24 ชมเพื่อเอาส่วนที่เหลือจากน้ำ (ความชื้นเนื้อหา < 1%) หรือสารทำละลายอินทรีย์ทั้งหมดถูกรีเอเจนต์ชั้นปี และถูกใช้โดยไม่ต้องฟอกต่อไป BF3 ในเมทานอล(10 wt.% BF3 ซิก-Aldrich) ใช้สำหรับเพิ่มของระดับไขมันในเลือดสารสกัด ใช้ชื่อเสียงผสม (99.9% บริสุทธิ์ ซิก-Aldrich)เป็นมาตรฐาน และ methyl heptadecanoate (17:0) ถูกใช้เป็นการมาตรฐานภายในสำหรับการวิเคราะห์ชื่อเสียงเนื้อหา2.2. Bligh และเครื่องเป่าแยกโครงการถูกสกัด ด้วยคลอโรฟอร์มเมทานอล-deionized ผสมน้ำ (1:1:0.9, v/v/v) อัตราส่วนนี้จะขึ้นอยู่กับ Bligh และของเครื่องเป่าวิธี [6] หลังจากวางของสาหร่าย 5 กรัมในการ Erlenmeyer หนาว25 ml chloroform, 50 ml methanol, and 20 ml of deionized waterwere poured into the flask. The mixture was then shaken for10 min, after which an additional 25 ml chloroform and 25 mldeionized water were poured into the flask. The mixture was thenshaken for a specified period of time. When the extraction was finished,the mixture was immediately filtered to remove algae andavoid further lipid extraction. The mixture was transferred to aseparatory funnel to allow separation of the organic and aqueouslayers, after which the chloroform layer was evaporated using arotary evaporator to leave behind the extracted lipids. The weightof extracted lipids was then recorded.2.3. Hexane extraction at ambient conditionsAlgae (5 g) and hexane (100 ml) were placed in an Erlenmeyerflask and shaken for a prescribed time. When the extraction wascomplete, the mixture was filtered to remove any remaining algae.Hexane was removed with a rotary evaporator and the weight ofextracted lipids was recorded.2.4. Hot compressed hexane extractionFive grams of algae were loaded into an autoclave (300 ml) with100 ml of hexane. The autoclave was purged using argon gas,heated to the desired temperature (220, 235, or 250 C), and heldfor either 5 or 10 min. The pressure inside the vessel was monitoredusing a pressure gauge, and the agitation speed was adjustedto 300 rpm. After extraction was completed, the autoclave wascooled to room temperature and depressurized. The extracted mixturewas filtered to separate algae debris, and hexane was removedwith a rotary evaporator. The lipid extracts were weighed gravimetricallyto obtain the crude lipid yield.2.5. Soxhlet extraction with hexaneFive grams of dry algae were placed in a cellulose thimble(25 mm I.D., 28 mm O.D., 100 mm length) inside the soxhletextractor. The extraction was continued at 80 C for 12 h using250 ml of hexane. After the solvent was removed, the extractedlipid was gravimetrically quantified.2.6. Microalgal lipid analysisCrude lipid yield was calculated by dividing the weight of crudelipid by the weight of dry algae. The obtained lipid (400 mg) wastransesterified at 80 C for 2 h using 4 ml of BF3 in methanol todetermine FAME content. After the reaction was complete, chloroformand deionized water (4 ml each) were added and centrifugationwas performed. The bottom layer was then collected and thesolvent was evaporated. Transesterified products were analyzedby an Agilent 6890 gas chromatograph–mass spectrometerequipped with a HP-88 column (100 m length, 0.25 mm I.D.,0.2 lmfilm thickness). A solution of methyl heptadecanoate in heptane(5 mg/ml) was used as the internal standard for FAME analysis.Three milliliters of internal standard solution was added to 75 mg oftransesterified products for preparation of the samples. Samples(1 ll) were injected at an initial oven temperature of 50 C. Afterinjection, the oven was heated at 10 C/min to 170 C, at 5 C/minto 210 C and held for 10 min, then at 5 C/min to 230 C and heldfor 6 min. The flow rate of carrier gas (He) was 1 ml/min. The injectorand detector temperatures were set at 260 C. The ion sourcetemperature was 280 C, while the interface temperature was260 C. Electron impact (EI) mass spectra were measured at an ionizingenergy of 70 eV by scanning from 50 to 500 m/z. FAMEs insamples were identified by comparing the retention times of FAMEpeaks with those of authentic standards, and also confirmed bymeasuring their EI mass spectra.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. การทดลอง
2.1 การเตรียมความพร้อมและวัสดุสาหร่ายสาหร่ายใช้ในการทดลองทุกคน Scenedesmus acutus (UTEX B72) สาหร่ายเป็น autotrophically เพาะเลี้ยงใน 5500 L วงปิดท่อแนวตั้ง photobioreactor อยู่ในเรือนกระจกที่ใช้เป็นสื่อกลางที่ใช้ปุ๋ยยูเรียที่มี0.14 กรัม / ลิตรยูเรีย [14] อุณหภูมิของกลางวัฒนธรรมที่ไม่ได้มีการควบคุมและอยู่ในช่วงระหว่าง 18 และ 43 องศาเซลเซียส หลังจากการเก็บเกี่ยวและการ dewatering, สาหร่าย(10-15 ของแข็ง%) ได้รับการอบแห้งในเตาอบที่ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ชีวมวลสาหร่ายจากการเก็บเกี่ยวที่เดียว (1.1 กิโลกรัมน้ำหนักแห้ง) ถูกนำมาใช้สำหรับทุกการทดลอง สาหร่ายแห้ง (3% ความชื้น) ได้รับต่อมาบดในเครื่องบดกาแฟจนอนุภาคสาหร่ายได้น้อยกว่า150 ไมครอน หลังจากบดและก่อนขั้นตอนการสกัดทุกสาหร่ายถูกความร้อนถึง 100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงในการลบเหลือน้ำ(ความชื้น <1%) ทั้งหมดเป็นตัวทำละลายอินทรีย์สารเกรดและถูกนำมาใช้โดยไม่บริสุทธิ์ต่อไป BF3 ในเมทานอล(10 น้ำหนัก.% BF3, Sigma-Aldrich) ที่ใช้สำหรับ transesterification ของสารสกัดจากไขมัน ส่วนผสม FAME (99.9% บริสุทธิ์ Sigma-Aldrich) ถูกนำมาใช้เป็นมาตรฐานและเมธิลheptadecanoate (17: 0) ถูกนำมาใช้เป็น. มาตรฐานภายในสำหรับการวิเคราะห์เนื้อหา FAME 2.2 ไบลห์ย้อมและการสกัดไขมันถูกสกัดโดยการผสมคลอโรฟอร์มเมทานอล-ปราศจากไอออนน้ำ(1: 1: 0.9, v / v / v) อัตราส่วนนี้จะขึ้นอยู่กับไบลห์และผ้าวิธี [6] หลังจากที่วาง 5 กรัมของสาหร่ายในขวด Erlenmeyer, 25 มล. คลอโรฟอร์ม 50 มลเมทานอลและ 20 ml ของน้ำปราศจากไอออนถูกเทลงในขวด ส่วนผสมที่ถูกเขย่าแล้วสำหรับ10 นาทีหลังจากที่เพิ่มอีก 25 มล. คลอโรฟอร์มและ 25 มล. น้ำ deionized ถูกเทลงในขวด ส่วนผสมที่ถูกแล้วเขย่าสำหรับระยะเวลาที่กำหนดของเวลา เมื่อสกัดเสร็จส่วนผสมที่ถูกกรองทันทีที่จะเอาสาหร่ายและหลีกเลี่ยงการสกัดไขมันต่อไป ส่วนผสมที่ถูกโอนไปยังช่องทางที่จะอนุญาตให้ separatory แยกอินทรีย์และน้ำชั้นหลังจากที่ชั้นคลอโรฟอร์มถูกระเหยโดยใช้เครื่องระเหยแบบหมุนที่จะออกจากที่อยู่เบื้องหลังการสกัดไขมัน น้ำหนักของไขมันที่สกัดได้ถูกบันทึกไว้แล้ว. 2.3 สกัดเฮกเซนที่สภาวะแวดล้อมสาหร่าย (5 กรัม) และเฮกเซน (100 มล.) ถูกวางไว้ใน Erlenmeyer ขวดและเขย่าเป็นเวลาที่กำหนด เมื่อมีการแยกเป็นสมบูรณ์ผสมถูกกรองเพื่อเอาสาหร่ายที่เหลือ. Hexane ถูกลบออกด้วยเครื่องระเหยแบบหมุนและน้ำหนักของไขมันที่สกัดได้รับการบันทึก. 2.4 สกัดเฮกเซนอัดร้อนห้ากรัมสาหร่ายถูกโหลดลงในหม้อนึ่งความดัน (300 มล.) ที่มี 100 มล. ของเฮกเซน หม้อนึ่งความดันที่ถูกไล่ออกใช้ก๊าซอาร์กอนร้อนถึงอุณหภูมิที่ต้องการ (220, 235 หรือ 250 องศาเซลเซียส) และจัดขึ้นสำหรับทั้ง5 หรือ 10 นาที ความดันภายในเรือที่ถูกตรวจสอบโดยใช้เครื่องวัดความดันและความเร็วในการกวนมีการปรับถึง300 รอบต่อนาที หลังจากสกัดเสร็จหม้อนึ่งความดันที่ถูกระบายความร้อนที่อุณหภูมิห้องและ depressurized ส่วนผสมที่สกัดถูกกรองเพื่อแยกเศษสาหร่ายและเฮกเซนจะถูกลบออกด้วยเครื่องระเหยแบบหมุน สารสกัดจากไขมันถูกชั่งน้ำหนัก gravimetrically ที่จะได้รับอัตราผลตอบแทนของไขมันดิบ. 2.5 การสกัดด้วยวิธีการสกัดแบบเฮกเซนห้ากรัมของสาหร่ายแห้งถูกวางไว้ในปลอกเซลลูโลส(25 มิลลิเมตร ID, 28 มม OD, 100 มิลลิเมตรยาว) ภายในวิธีการสกัดแบบแยก สกัดได้อย่างต่อเนื่องที่ 80 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 12 ชั่วโมงโดยใช้250 มล. ของเฮกเซน หลังจากที่ตัวทำละลายจะถูกลบออกที่สกัดไขมันถูกวัด gravimetrically. 2.6 วิเคราะห์ไขมันสาหร่ายผลผลิตไขมันดิบที่คำนวณโดยการหารน้ำหนักของน้ำมันดิบไขมันโดยน้ำหนักของสาหร่ายแห้ง ไขมันที่ได้รับ (400 มก.) ได้รับการtransesterified ที่ 80 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมงโดยใช้ 4 มิลลิลิตร BF3 ในเมทานอลที่จะตรวจสอบเนื้อหาFAME หลังจากปฏิกิริยาเสร็จสมบูรณ์คลอโรฟอร์มและน้ำปราศจากไอออน (4 มล. แต่ละคน) และมีการเพิ่มการหมุนเหวี่ยงที่ได้ดำเนินการ ชั้นล่างถูกเก็บรวบรวมแล้วและตัวทำละลายระเหย ผลิตภัณฑ์ transesterified วิเคราะห์โดยAgilent 6890 ก๊าซ chromatograph สเปกโตรมิเตอร์มวลพร้อมกับคอลัมน์HP-88 (100 เมตรความยาว 0.25 มมประจำตัวประชาชน0.2 ความหนา lmfilm) วิธีการแก้ปัญหาของ heptadecanoate เมธิลใน heptane (5 mg / ml) ถูกใช้เป็นมาตรฐานสำหรับการวิเคราะห์ภายใน FAME. สามมิลลิลิตรของสารละลายมาตรฐานภายในถูกบันทึกอยู่ใน 75 mg ของผลิตภัณฑ์transesterified สำหรับการเตรียมการของกลุ่มตัวอย่าง ตัวอย่าง(1 LL) ถูกฉีดที่อุณหภูมิเริ่มต้นของเตาอบ 50 องศาเซลเซียส หลังจากฉีดเตาอบที่ถูกความร้อน 10 องศาเซลเซียส / นาทีถึง 170 องศาเซลเซียสที่ 5 องศาเซลเซียส / นาทีถึง210 องศาเซลเซียสและจัดขึ้นเป็นเวลา 10 นาทีแล้วที่ 5 องศาเซลเซียส / นาทีถึง 230 องศาเซลเซียสและจัดขึ้นเป็นเวลา6 นาที . อัตราการไหลของก๊าซให้บริการ (เขา) เป็น 1 มล. / นาที หัวฉีดและอุณหภูมิเครื่องตรวจจับถูกตั้งไว้ที่ 260 องศาเซลเซียส แหล่งที่มาของไอออนอุณหภูมิ 280 องศาเซลเซียสในขณะที่อุณหภูมิของอินเตอร์เฟซเป็น 260 องศาเซลเซียส ผลกระทบอิเล็กตรอน (EI) สเปกตรัมมวลวัดโอโซนในการใช้พลังงานของ70 eV โดยการสแกน 50-500 เมตร / z FAMEs ในตัวอย่างที่ถูกระบุโดยการเปรียบเทียบเวลาการเก็บรักษาเกียรติยศยอดกับของแท้มาตรฐานและยังยืนยันโดยการวัดสเปกตรัมEI มวลของพวกเขา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . ทดลอง
2.1 . การเตรียมวัสดุเลี้ยงสาหร่ายและสาหร่ายที่ใช้ในการทดลองทั้งหมด

( มีซีนเดสมัส acutus utex มูลค่า ) สาหร่ายที่เพาะเลี้ยงใน autotrophically 5500 L
ปิดท่อ photobioreactor แนวตั้งอยู่ในเรือนกระจก
ใช้ยูเรียอาหารที่ 0.14 กรัม / ลิตรยูเรีย [ 14 ] ตาม
อุณหภูมิของวัฒนธรรมสื่อไม่ได้ควบคุม และมีค่า
ระหว่าง 18 และ 43  Cหลังการเก็บเกี่ยวและ dewatering , สาหร่าย
( 10 – 15% ของแข็งแห้งในเตาอบที่อุณหภูมิ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง  ชีวมวลจากสาหร่าย
เก็บเกี่ยวเดี่ยว ( 1.1 กิโลกรัมน้ำหนักแห้ง ) ใช้ทั้งหมด
การทดลอง สาหร่ายอบแห้ง ( ความชื้น 3% ) ต่อมา
บดในเครื่องบดกาแฟจนสาหร่ายพบอนุภาค
น้อยกว่า 150 ไมโครเมตร หลังจากบดและก่อนที่ขั้นตอนการสกัดทั้งหมด
สาหร่ายมีความร้อนถึง 100  C 24 h เพื่อเอาน้ำที่เหลือ
( < ความชื้น 1% ) ตัวทำละลายอินทรีย์ทั้งหมดเป็นเกรด 3
และถูกใช้โดยไม่บริสุทธิ์เพิ่มเติม BF3 ในเมทานอล
( 10 % โดยน้ำหนัก BF3 , Sigma –ดิช ) คือใช้สำหรับกระบวนการทรานส์เอสเทอริฟิเคชั่นของ
ไขมัน สารสกัด ส่วนผสม ชื่อเสียง ( 99.9% บริสุทธิ์ ซิกม่า Aldrich
– ) ถูกใช้เป็นมาตรฐานและเมทิล heptadecanoate ( 17:0 ) ถูกใช้เป็น
มาตรฐานการวิเคราะห์ชื่อเสียงภายในเนื้อหา
2.2 . ไบลท์และ Dyer การสกัด
ไขมันสกัดโดยการผสมเมทานอลคลอโรฟอร์ม ( คล้ายเนื้อเยื่อประสาน
น้ำ ( 1:1:0.9 , V / V / V ) อัตราส่วนนี้จะขึ้นอยู่กับการประเมินของ Dyer
) [ 6 ] หลังจากวาง 5 กรัมของสาหร่ายในเออร์เลนเมเยอร์ขวด
25 มิลลิลิตร ( 50 มล เมทานอล และ 20 มิลลิลิตร คล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำ
ถูกเทลงไปในขวด ผสม แล้วเขย่าเพื่อ
10 นาทีหลังจากที่เพิ่มอีก 25 มิลลิลิตร คลอโรฟอร์ม และ 25 ml
คล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำที่ถูกเทลงไปในขวด ผสมส่วนผสมแล้ว
เขย่าสำหรับรอบระยะเวลาที่ระบุ เมื่อแยกเสร็จ
ผสมทันทีกรองเอาสาหร่าย
หลีกเลี่ยงการสกัดไขมันเพิ่มเติม ส่วนผสมจะถูกโอนไปยัง
ช่องทางตัวให้แยกของอินทรีย์และสารละลาย
ชั้นหลังจากที่ชั้นคลอโรฟอร์มระเหยใช้
ระเหยหมุนเพื่อทิ้งสกัดลิปิด น้ำหนักของไขมันถูกบันทึกไว้ได้
.
2.3 เฮกเซนการสกัดที่สภาวะแวดล้อม
สาหร่าย ( 5 กรัม ) และเฮกเซน ( 100 มล. ) ถูกวางไว้ในขวดเขย่าสำหรับเออร์เลนเมเยอร์
และกำหนดเวลา เมื่อสกัด
สมบูรณ์ ส่วนผสมจะถูกกรองเอาสาหร่าย
เหลือใด ๆ