Results and discussionDetermination

Results and discussion
Determination of maximum non-toxic doses

In order to assess any possible toxic effects of Ns, Ah and Cs extracts on HeLa CEACAM1a cells, serial dilutions (1/10, 1/50, 1/100, 1/1000, 1/10.000) of Ns, Ah and Cs extracts were incubated with HeLa CEACAM1a cells for 24 and 48 h. The cell viability was assessed by the tetrazolium salt 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay. These three plant extracts showed toxic effect at 1/10 dilution, however toxicity of the extracts clearly decreased at 1/50 dilution for 24 and 48 h time points (Figs. 1, ​,2).2). These results suggest that the cytotoxic effect of these plants extracts were concentration dependent but not time-dependent in that less cells were viable at 1/10 dilution compared to 1/50 dilution. Based on these results, the plant extract dilution of 1/50 was accepted as an active dose.

Fig. 1
Fig. 1
Effects of Ns, Ah and Cs extracts on the survival of HeLa CEACAM1a cells. HeLa CEACAM1a cells were incubated with the diluted extracts for 24 h and cell toxicity was measured by MTT assay. The bars show the averages from 2 independent experiments ...
Fig. 2
Fig. 2
Effects of Ns, Ah and Cs extracts on the survival of HeLa CEACAM1a cells. HeLa CEACAM1a cells were incubated with the extracts for 48 h and cell toxicity was measured by MTT assay. The bars show the averages from two independent experiments with ...
IL-8 levels following extract treatments of CoV infected cells

The levels of the inflammatory cytokine IL-8 in the supernatants of cells that were treated with the plant extracts were determined by ELISA (Fig. 3). IL-8 was chosen for its possible role in preventing DC cells from priming T-cells during CoV infection and inducing calcium signaling that might be related to TRP genes [45]. IL-8 levels increased following treatment by Ns, Ah and Cs extracts for both 1/50 and 1/100 dilutions at 24 h. However IL-8 levels had decreased at 48 h for Ah and Cs treated cells. This suggests that Ns extract was better at stimulating IL-8 secretion from infected cells to lead to a bigger inflammatory response. When IL-8 levels were measured following plant extract treatment of infected cells 6 and 8 h post-infection it was found that IL-8 levels were below the lowest standard and very low (Supplementary figure). Therefore we cannot comment on the effect of plant extracts on IL-8 secretion from CoV infected cells.

Fig. 3
Fig. 3
Effects of Ns, Ah and Cs extracts on the secretion of IL-8 from HeLa CEACAM1a cells after 24 and 48 h. The bars show the averages from two independent experiments with four repeats for each treatment. Error bars show standard error. C negative ...
Expressions of TRP genes following extract treatment of CoV infected cells

To show effects of the Ns, Ah and Cs extracts on expression of TRP genes during CoV infection, active doses of the Ns, Ah and Cs extracts were added to HeLa CEACAM1a cells one hour before CoV infection. Subsequently, the cells were infected with CoV for 6 h post-infection and 8 h. mRNA expression levels for TRP channel families were investigated by using fluidigm RT PCR. GAPDH expression was used for normalization of gene expression. Uninfected cells were used as a negative control. The infected but not plant extract exposed cells were used as positive control.

The expressions of TRP genes were evaluated 6 and 8 h post-infection. These time points were chosen because CoV shows its cytopathic effects by 8 h post-infection [43]. The changes in the expression levels were determined by calculating fold-changes (2−ΔΔCt) for the TRP genes and normalizing them by dividing with the fold-change for the control gene GAPDH.

Fold-change values greater than 1 indicate an up-regulation and fold-change values less than 1 indicate down-regulation. However fold-change values more than 2 and less than 0.5 are considered significant.

Based on the TRP genes expression analysis results, the expression levels were mainly down (Fig. 4). The TRP channels affected by extracts were TRPA1, TRPC4, TRPM6, TRPM7, TRPM8 and TRPV4. Treatment with Ns, Ah and Cs extracts during CoV infection resulted in the down-regulation of TRPM6 and TRPA1 for both 6 and 8 h time points. TRPC4 was down regulated following Ns and Ah treatments for both 6 and 8 h time points. TRPM7 was down regulated only after Ns treatment for the two time points. Ah treatment resulted in down-regulation of TRPV4 for the two time points. Cs treatment resulted in down-regulation of TRPM8 for the two time points.

Fig. 4
Fig. 4
TRP gene expression levels following Ns, Ah and Cs extract treatment of infected HeLa CEACAM1a cells after 6 (a) and 8 h post infections (b) compared to uninfected cells. The bars show the averages from two independent experiments. Error bars ...
Monitoring the extracellular release of the virus

In order to determine the number of viruses following extracts treatment and viral infection, TCID50/ml was determined for the conditions and it was found that compared to the control group, extract treatments lowered the virus loads (Fig. 5). In the case of Ah treatments there was no detectable virus. Following Ns treatment the number of viruses was very low at 6 h post infections and it was 1/10th of the control amount by 8 h post infections. Cs treatment resulted in the same number of viruses at 6 and 8 h post infections, which were 1/10th of the positive control numbers by 8 h.

Fig. 5
Fig. 5
Virus loads following Ns, Ah and Cs extract treatment of infected HeLa CEACAM1a cells after 6 and 8 h post infections. The amount of virus present in the culture supernatants were evaluated by using LR7 cells and TCID50 values were calculated. ...
Intracellular calcium levels

Following the determination of the expression of TRP genes, we sought to find the intracellular calcium levels (Fig. 6). Intracellular calcium levels did not change after addition of plant extracts to uninfected cells. However addition of plant extracts to CoV infected cells increased intracellular calcium levels.

Fig. 6
Fig. 6
Intracellular calcium levels in uninfected (a) or infected cells 6hpi (b) and 8 h post infections (c) with and without plant extract treatment
Go to:
Conclusion
The results presented here suggest that treatment of cells with Ns, Ah or Cs extracts prior to infection with CoV decreases the replication of the virus. IL-8 secretion was increased at 24 h for Ns and Ah extract treatments but Cs treatment did not show a significant increase in IL-8 secretion at 24 h. However, IL-8 secretion was very low at early time points after infection (Fig. 3). Therefore it is not known if IL-8 levels are related to a decreased virus load.

Following gene expression analysis the TRP genes with changed expression levels were identified as follows: TRPM6 and TRPA1 were the two genes that were down regulated for both 6 and 8 h time points in CoV infected and extract treated cells, TRPC4 gene was down regulated following Ns and Ah treatments for both 6 and 8 h time points, TRPM7 was down regulated only after Ns treatment for the two time points, TRPV4 gene was down regulated following Ah treatment for the two time points and TRPM8 was down regulated following Cs treatment for the two time points.

A general down regulation trend for TRP genes was observed in the CoV infected and extract treated cells. Together with the data showing that virus loads were decreased upon extract treatments we predicted that TRP genes might be involved in CoV survival inside cells. Considering that replication of other viruses were related to intracellular calcium concentration and TRPs modulate ion concentrations, including calcium we measured intracellular calcium concentrations and found that they increased following plant extract treatments of infected cells. The controversial TRP gene expression and calcium concentration results suggest that they may not be related to decreased viral loads in plant extract treated infected cells or decreased TRP gene expression and/or increased calcium concentration decrease viral loads through unknown mechanisms. Undetectable levels of the virus after Ah treatment can mean a specific factor being involved following that treatment and this factor can be the TRPV4 gene, whose expression went down only in the case of Ah treatment for both 6 and 8 h time points. Currently there is no literature tying TRP genes to viral survival.

The reason for decreased virus loads following extract treatments is not known at this point. Further research is required in order to identify the specific ingredient(s) in the extracts that led to this phenotype and also to identify the mechanism by which it prevents virus replication or leads to more efficient virus killing. Undetectable virus loads after Ah extract treatment can mean future research can identify certain molecule(s) in Ah extract that can be used as highly effective drugs against not only CoV but also other viruses as well.

Go to:
Electronic supplementary material

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผลและการสนทนากำหนดปริมาณพิษสูงสุดเพื่อที่จะประเมินผลพิษใด ๆ เป็นไปได้ของ Ns, Ah และ Cs แยกบนเซลล์ HeLa CEACAM1a, dilutions ตอ (1/10, 1/50, 1/100, 1/1000, 1/10.000) Ns, Ah และ Cs สารสกัดได้ incubated เซลล์ HeLa CEACAM1a 24 และ 48 h ชีวิตเซลล์ถูกประเมิน โดยการทดสอบเกลือโบรไมด์ 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium (MTT) tetrazolium แสดงผลพิษที่เจือจาง 1/10 สารสกัดจากพืชสามเหล่านี้แต่ ความเป็นพิษของสารสกัดชัดเจนลดลงที่เจือจาง 1/50 สำหรับจุด h เวลา 24 และ 48 (Figs. 1,, 2) 2) ผลลัพธ์เหล่านี้แนะนำว่า cytotoxic ผลของสารสกัดจากพืชเหล่านี้มีความเข้มข้นขึ้น แต่ไม่เวลาขึ้นอยู่กับการที่เซลล์น้อยได้ที่ 1/10 เจือจางเมื่อเทียบกับเจือจาง 1/50 ขึ้นอยู่กับผลลัพธ์เหล่านี้ เจือจางสารสกัดจากพืช 1/50 เป็นการยอมรับปริมาณการใช้งานFig. 1Fig. 1ลักษณะพิเศษของ Ns, Ah และ Cs แยกบนความอยู่รอดของเซลล์ HeLa CEACAM1a เซลล์ HeLa CEACAM1a ได้ incubated กับแยกแตกออกใน 24 ชม และความเป็นพิษของเซลล์ถูกวัด โดย MTT assay บาร์แสดงค่าเฉลี่ยจากการทดลองอิสระ 2 ...Fig. 2Fig. 2ลักษณะพิเศษของ Ns, Ah และ Cs แยกบนความอยู่รอดของเซลล์ HeLa CEACAM1a เซลล์ HeLa CEACAM1a ได้ incubated กับสารสกัดสำหรับ 48 h และเซลล์ความเป็นพิษถูกวัด โดย MTT assay บาร์แสดงค่าเฉลี่ยจากการทดลองด้วยตนเองด้วย...ระดับ IL-8 ต่อแยกรักษา CoV ติดเชื้อเซลล์ระดับของการอักเสบอย่างไร cytokine IL-8 ใน supernatants ของเซลล์ที่ได้รับการรักษา ด้วยสารสกัดจากพืชถูกกำหนด โดย ELISA (Fig. 3) IL-8 ถูกเลือกสำหรับบทบาทความสามารถในการป้องกันเซลล์ DC จากปั๊มเซลล์ T ระหว่างเชื้อ CoV inducing ตามปกติแคลเซียมที่อาจเกี่ยวข้องกับยีน TRP [45] ระดับ IL-8 เพิ่มขึ้นต่อโดย Ns, Ah และ Cs แยก 1/50 และ 1/100 dilutions ที่ 24 ชม อย่างไรก็ตาม การลดลงระดับ IL-8 ที่ 48 h Ah และ Cs ถือว่าเซลล์ แนะนำว่า Ns สารสกัดดีที่กระตุ้น IL-8 หลั่งจากเซลล์ที่ติดเชื้อจะนำไปสู่การตอบสนองการอักเสบใหญ่ เมื่อมีวัดระดับ IL-8 ต่อ โรงแยกรักษาเซลล์ติดเชื้อ 6 และ 8 h หลังติดเชื้อพบว่า ระดับ IL-8 ถูกล่างต่ำมาก และมาตรฐานต่ำสุด (รูปเสริม) ดังนั้น เราไม่สามารถเห็นในผลของสารสกัดจากพืช IL-8 หลั่งจากเซลล์ที่ติดเชื้อ CoVFig. 3Fig. 3แยกผลของ Ns, Ah และ Cs ในการหลั่งของ IL-8 จากเซลล์ HeLa CEACAM1a 24 และ 48 h บาร์แสดงค่าเฉลี่ยจากการทดลองอิสระกับ 4 ทำซ้ำสำหรับแต่ละ แถบข้อผิดพลาดแสดงข้อผิดพลาดมาตรฐาน C เป็นค่าลบนิพจน์ของ TRP ต่อแยกของ CoV ติดเชื้อเซลล์การแสดงผลของ Ns, Ah และ Cs แยกนิพจน์ของยีนใน TRP ระหว่างเชื้อ CoV ปริมาณงานของ Ns สารสกัดจาก Ah และ Cs เพิ่มเซลล์ HeLa CEACAM1a หนึ่งชั่วโมงก่อนที่จะติดเชื้อ CoV ต่อมา เซลล์ติดเชื้อ CoV สำหรับ 6 h หลังติดเชื้อ และ 8 h. ระดับนิพจน์ mRNA สำหรับครอบครัวช่อง TRP ถูกตรวจสอบโดย fluidigm RT PCR นิพจน์ GAPDH ถูกใช้สำหรับการฟื้นฟูของยีน เซลล์เชื้อถูกใช้เป็นตัวควบคุมค่าลบ เซลล์สัมผัสกับสารสกัดจากพืชไม่ติดเชื้อแต่ถูกใช้เป็นตัวควบคุมบวกนิพจน์ของยีนใน TRP มีค่า 6 และ 8 h หลังติดเชื้อ จุดเหล่านี้เวลาถูกเลือก เพราะ CoV แสดง cytopathic ผลจากการติดเชื้อหลัง 8 h [43] การเปลี่ยนแปลงในระดับนิพจน์ถูกกำหนด โดยคำนวณพับเปลี่ยนแปลง (2−ΔΔCt) สำหรับยีน TRP และ normalizing เหล่านั้น โดยแบ่งพับเปลี่ยนแปลงการควบคุมยีน GAPDHค่าพับเปลี่ยนแปลงมากกว่า 1 ระบุเป็นระเบียบขึ้น และพับเปลี่ยนค่าน้อยกว่า 1 แสดงระเบียบลง อย่างไรก็ตาม ค่าการเปลี่ยนแปลงพับมากกว่า 2 และน้อยกว่า 0.5 กำลังสำคัญขึ้นอยู่กับผลวิเคราะห์ยีนนิพจน์ TRP ระดับนิพจน์ถูกลง (Fig. 4) ส่วนใหญ่ ช่อง TRP ที่รับผลกระทบจากสารสกัดได้ TRPA1, TRPC4, TRPM6, TRPM7, TRPM8 และ TRPV4 รักษา Ns, Ah และ Cs แยกระหว่าง CoV ติดเชื้อส่งผลให้ลงกฎของ TRPM6 และ TRPA1 สำหรับจุด h เวลา 6 และ 8 TRPC4 ถูกควบคุมต่อไปนี้ Ns และ Ah รักษาจุด h เวลา 6 และ 8 TRPM7 ได้ลงควบคุมหลังจากรักษา Ns สองเวลาจุด อา รักษาให้ลงระเบียบของ TRPV4 สำหรับสองเวลาจุด รักษา Cs ให้ลงระเบียบของ TRPM8 สำหรับสองเวลาจุดFig. 4Fig. 4TRP ยีนนิพจน์ระดับต่อ Ns, Ah และ Cs แยกรักษาติดเชื้อเซลล์ HeLa CEACAM1a 6 (ก) และ 8 h (ข) เปรียบเทียบกับเชื้อเซลล์ติดเชื้อที่ลงรายการบัญชี บาร์แสดงค่าเฉลี่ยจากการทดลองด้วยตนเอง แถบข้อผิดพลาด...ตรวจสอบการปล่อยไวรัส extracellularเพื่อกำหนดจำนวนของไวรัสต่อสารสกัดจากการรักษาและการติดเชื้อไวรัส TCID50/ml สำหรับเงื่อนไขที่กำหนด และพบว่าเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม สารสกัดรักษาลดลงโหลดไวรัส (Fig. 5) ในกรณีที่รักษา Ah มีไวรัสไม่สามารถตรวจสอบได้ ต่อรักษา Ns จำนวนไวรัสมีน้อยมากที่ติดเชื้อ 6 h โพสต์ และก็ 1/10 จำนวนควบคุมโดย 8 h ลงติดเชื้อ Cs รักษาส่งผลให้จำนวนของไวรัสที่ 6 และ 8 h ลงติดเชื้อ ซึ่งถูก 1/10 จำนวนบวกควบคุมโดย 8 hFig. 5Fig. 5ไวรัสโหลด Ns, Ah และ Cs ต่อไปนี้แยกการรักษาติดเชื้อเซลล์ HeLa CEACAM1a หลังจากการติดเชื้อลงรายการ h 6 และ 8 จำนวนไวรัสที่อยู่ใน supernatants วัฒนธรรมถูกประเมินโดย LR7 เซลล์ และมีคำนวณค่า TCID50 ...ระดับแคลเซียม intracellularต่อไปนี้กำหนดค่าของยีนใน TRP เราขอหาระดับแคลเซียม intracellular (Fig. 6) ระดับแคลเซียม intracellular ไม่เปลี่ยนแปลงหลังจากเพิ่มพืชสารสกัดจากเซลล์เชื้อ อย่างไรก็ตาม เพิ่มโรงแยกไป CoV ติดเชื้อเซลล์ intracellular แคลเซียมเพิ่มระดับFig. 6Fig. 6ระดับ intracellular แคลเซียมในเซลล์เชื้อ (ก) หรือติดไวรัส 6hpi (b) และเชื้อลง 8 h (c) มี และไม่ มีโรงงานแยกบำบัดลุยเลย:บทสรุปผลลัพธ์ที่แสดงที่นี่แนะนำว่า รักษาเซลล์กับ Ns, Ah หรือ Cs แยกก่อนที่จะติดเชื้อกับลด CoV จำลองของไวรัส IL-8 หลั่งเพิ่มขึ้นใน 24 ชมสำหรับ Ns และ Ah สารสกัดรักษาแต่รักษา Cs ไม่ได้แสดงการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญใน IL-8 หลั่งใน 24 ชม อย่างไรก็ตาม IL-8 หลั่งได้มากเวลาจุดเริ่มต้นหลังจากการติดเชื้อ (Fig. 3) ดังนั้น ก็ไม่ทราบถ้าเกี่ยวข้องกับโหลดไวรัสลดระดับ IL-8วิเคราะห์นิพจน์ยีนยีน TRP มีระดับเปลี่ยนแปลงนิพจน์ที่ระบุดังต่อไปนี้: TRPM6 และ TRPA1 มีสองยีนที่ถูกลงควบคุมจุด h เวลา 6 และ 8 ใน CoV ติดเชื้อ และแยกเซลล์บำบัด ยีน TRPC4 ถูกควบคุมต่อไปนี้ Ns และ Ah รักษาจุด h เวลา 6 และ 8, TRPM7 ถูกลงควบคุมหลังจากรักษา Ns สองเวลาจุด, TRPV4 ยีนถูกควบคุมต่อแอมป์รักษาจุดครั้งที่สองและ TRPM8 ถูกลงควบคุมต่อไปนี้ Cs รักษาทั้งสองลงเวลาจุดทั่วไปลงแนวโน้มระเบียบสำหรับยีน TRP ถูกสังเกตใน CoV ติดเชื้อ และแยกเซลล์บำบัด พร้อมข้อมูลแสดงว่า โหลดไวรัสลดลงเมื่อบำบัดสารสกัด ที่เราคาดการณ์ว่า TRP ยีนอาจเกี่ยวข้องในการอยู่รอด CoV ภายในเซลล์ พิจารณาว่า เกี่ยวข้องกับความเข้มข้นของแคลเซียม intracellular จำลองของไวรัสอื่น ๆ และ TRPs modulate ความเข้มข้นของไอออน รวมถึงแคลเซียมเราวัดความเข้มข้นของแคลเซียม intracellular และพบว่า พวกเขาเพิ่มต่อพืชแยกรักษาเซลล์ติดเชื้อ แย้ง TRP ยีนและแคลเซียมเข้มข้นผลแนะนำว่า พวกเขาอาจไม่เกี่ยวข้องเพื่อลดปริมาณไวรัสในพืช สารสกัดรักษาเซลล์ที่ติดเชื้อ หรือลดยีน TRP หรือแคลเซียมเพิ่มความเข้มข้นลดโหลดไวรัสผ่านกลไกที่ไม่รู้จัก ระดับสามคไวรัสหลังจากรักษา Ah สามารถหมายความว่า ปัจจัยการมีส่วนร่วมต่อที่ รักษาและปัจจัยนี้อาจเป็นยีน TRPV4 นิพจน์ที่มีไปลงเฉพาะกรณีรักษา Ah สำหรับจุด h เวลา 6 และ 8 ปัจจุบันมีวรรณกรรมไม่ผูกยีนใน TRP จะรอดไวรัสเหตุผลต่อสารสกัดรักษาปริมาณไวรัสลดลงณจุดนี้ไม่ทราบ วิจัยเพิ่มเติมจะต้อง การระบุ ingredient(s) เฉพาะในสารสกัดที่นำไปสู่นี้ phenotype และระบุกลไกที่จะป้องกันไวรัสจำลอง หรือนำไปฆ่าไวรัสที่มีประสิทธิภาพมากขึ้น สามคไวรัสโหลดหลังจาก Ah สารสกัดรักษาอาจหมายถึง การวิจัยในอนาคตสามารถระบุบาง molecule(s) ในสารสกัดแอมป์ที่สามารถใช้เป็นยาที่มีประสิทธิภาพสูงกับไม่ CoV แต่ไวรัสอื่น ๆ เช่นลุยเลย:วัสดุอิเล็กทรอนิกส์ส่งเสริมการขาย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผลและอภิปราย
การกำหนดปริมาณที่ไม่เป็นพิษสูงสุดเพื่อที่จะประเมินผลกระทบที่เป็นพิษที่เป็นไปได้ใด ๆ ของ NS, Ah และ Cs สารสกัดจากเซลล์ HeLa CEACAM1a, เจือจางอนุกรม (1/10, 1/50, 1/100, 1/1000, 1 /10.000) ของ NS, Ah และสารสกัดจาก Cs ถูกบ่มกับเซลล์ HeLa CEACAM1a 24 และ 48 ชั่วโมง มีชีวิตเซลล์ได้รับการประเมินโดยเกลือ tetrazolium 3- (4,5-dimethylthiazol-2-YL) โบรไมด์ -2,5-diphenyltetrazolium (MTT) ในการตรวจ สามเหล่านี้แสดงให้เห็นว่าสารสกัดจากพืชพิษที่ 1/10 ลดสัดส่วน แต่ความเป็นพิษของสารสกัดลดลงอย่างเห็นได้ชัดที่ 1/50 ลดสัดส่วน 24 และ 48 ชั่วโมงจุดเวลา (มะเดื่อ. 1, 2) 0.2) ผลการศึกษานี้ชี้ให้เห็นว่าผลกระทบที่เกิดพิษของสารสกัดพืชเหล่านี้มีความเข้มข้นขึ้น แต่ไม่ขึ้นกับเวลาในการที่เซลล์น้อยได้รับการทำงานที่ 1/10 เมื่อเทียบกับการลดสัดส่วน 1/50 เจือจาง บนพื้นฐานของผลเหล่านี้เจือจางสารสกัดจากพืชที่ 1/50 ได้รับการยอมรับในฐานะที่เป็นยาที่ใช้งาน. รูป 1 รูป 1 ผลของ NS, Ah และ Cs สารสกัดต่อการอยู่รอดของเซลล์ HeLa CEACAM1a HeLa เซลล์ CEACAM1a ถูกบ่มด้วยสารสกัดจากปรับลดความเป็นพิษ 24 ชั่วโมงและเซลล์วัดด้วยวิธี MTT แถบแสดงค่าเฉลี่ยจากการทดลองที่เป็นอิสระ 2 ... รูป 2 รูป 2 ผลของการ Ns อา Cs และสารสกัดต่อการอยู่รอดของเซลล์ HeLa CEACAM1a HeLa เซลล์ CEACAM1a ถูกบ่มด้วยสารสกัดจากเวลา 48 ชั่วโมงและความเป็นพิษของเซลล์โดยวัดจากการทดสอบ MTT แถบแสดงค่าเฉลี่ยจากสองทดลองที่เป็นอิสระด้วย ... IL-8 ระดับการรักษาต่อไปนี้สารสกัดจากเซลล์ที่ติดเชื้อ COV ระดับของไซโตไคน์อักเสบ IL-8 ใน supernatants ของเซลล์ที่ได้รับการรักษาด้วยสารสกัดจากพืชที่ได้รับการพิจารณาโดยวิธี ELISA ( รูปที่. 3) IL-8 เป็นทางเลือกสำหรับบทบาทที่เป็นไปได้ในการป้องกันเซลล์ DC จากรองพื้นเสื้อเซลล์ระหว่างการติดเชื้อ -COV และกระตุ้นให้เกิดการส่งสัญญาณแคลเซียมที่อาจจะเกี่ยวข้องกับยีน TRP [45] IL-8 เพิ่มระดับการรักษาต่อไปโดย NS, Ah และ Cs สารสกัดทั้ง 1/50 และ 1/100 เจือจางเวลา 24 ชั่วโมง อย่างไรก็ตาม IL-8 ระดับได้ลดลงใน 48 ชั่วโมงสำหรับ Ah และ Cs รับการรักษาเซลล์ นี้แสดงให้เห็นว่าสารสกัดจากณ์ก็ยังดีที่กระตุ้นการหลั่ง IL-8 จากเซลล์ที่ติดเชื้อที่จะนำไปสู่การตอบสนองการอักเสบที่ใหญ่กว่า เมื่อ IL-8 ระดับมีการวัดการรักษาสารสกัดจากพืชต่อไปนี้ของเซลล์ที่ติดเชื้อ 6 และ 8 ชั่วโมงหลังการติดเชื้อพบว่า IL-8 ระดับต่ำกว่ามาตรฐานที่ถูกที่สุดและต่ำมาก (รูปเสริม) ดังนั้นเราจึงไม่สามารถแสดงความคิดเห็นเกี่ยวกับผลกระทบของสารสกัดจากพืชใน IL-8 หลั่งจากเซลล์ที่ติดเชื้อ COV. รูป 3 รูป 3 ผลของการ Ns อา Cs และสารสกัดจากการหลั่งของ IL-8 จากเซลล์ HeLa CEACAM1a หลังจาก 24 และ 48 ชั่วโมง แถบแสดงค่าเฉลี่ยจากสองทดลองที่เป็นอิสระกับสี่ซ้ำสำหรับการรักษาแต่ละ แถบแสดงข้อผิดพลาดข้อผิดพลาดมาตรฐาน C ลบ ... การแสดงออกของยีน TRP ต่อไปนี้การรักษาสารสกัดจากเซลล์ที่ติดเชื้อ COV ในการแสดงผลของการ Ns อา Cs และสารสกัดในการแสดงออกของยีน TRP ระหว่างการติดเชื้อ COV ปริมาณที่ใช้งานของ NS, Ah และสารสกัดจาก Cs ถูกเพิ่มเข้าไปใน HeLa เซลล์ CEACAM1a หนึ่งชั่วโมงก่อนการติดเชื้อ COV ต่อจากนั้นเซลล์มีการติดเชื้อ COV 6 ชั่วโมงหลังการติดเชื้อและ 8 ชั่วโมง mRNA ระดับการแสดงออกสำหรับครอบครัวช่อง TRP ถูกตรวจสอบโดยใช้ fluidigm RT PCR การแสดงออก GAPDH ถูกนำมาใช้สำหรับการฟื้นฟูการแสดงออกของยีน เซลล์ที่ไม่ติดเชื้อถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบ การติดเชื้อ แต่ไม่สารสกัดจากพืชสัมผัสเซลล์ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมบวก. การแสดงออกของยีน TRP ได้รับการประเมิน 6 และ 8 ชั่วโมงหลังการติดเชื้อ จุดเวลานี้ได้รับเลือกเพราะ COV แสดงผล cytopathic โดยการโพสต์ 8 ชั่วโมงติดเชื้อ [43] การเปลี่ยนแปลงในระดับการแสดงออกถูกกำหนดโดยการคำนวณพับเปลี่ยนแปลง (2-ΔΔCt) สำหรับยีน TRP และ normalizing พวกเขาโดยการหารด้วยพับเปลี่ยนแปลง GAPDH ยีนควบคุม. พับเปลี่ยนค่ามากกว่า 1 บ่งบอกถึงการควบคุมขึ้น และค่านิยมพับเปลี่ยนแปลงน้อยกว่า 1 บ่งบอกถึงกฎระเบียบลง อย่างไรก็ตามพับเปลี่ยนค่ากว่า 2 และน้อยกว่า 0.5 ได้รับการพิจารณาอย่างมีนัยสำคัญ. จากผลการวิเคราะห์การแสดงออกของยีน TRP, ระดับการแสดงออกส่วนใหญ่ลง (รูปที่ 4). ช่อง TRP รับผลกระทบจากสารสกัดมี TRPA1, TRPC4, TRPM6, TRPM7, TRPM8 และ TRPV4 การรักษาด้วย NS, Ah และสารสกัดจาก Cs ระหว่างการติดเชื้อ COV ผลในการลงระเบียบของ TRPM6 และ TRPA1 ทั้ง 6 และ 8 ชั่วโมงจุดเวลา TRPC4 ถูกควบคุมลง Ns ต่อไปและการรักษา Ah ทั้ง 6 และ 8 ชั่วโมงจุดเวลา TRPM7 ถูกควบคุมลดลงเพียงหลังการรักษา Ns สำหรับสองจุดเวลา Ah รักษาผลในการลงระเบียบของ TRPV4 สำหรับสองจุดเวลา การรักษา Cs ผลในการลงระเบียบของ TRPM8 สำหรับสองจุดเวลา. รูป 4 รูป 4 ระดับการแสดงออกของยีน TRP ต่อไป NS, Ah และ Cs รักษาสารสกัดจากเซลล์ที่ติดเชื้อ HeLa CEACAM1a หลังจาก 6 (ก) และการติดเชื้อ 8 ชั่วโมงโพสต์ (ข) เมื่อเทียบกับเซลล์ที่ไม่ติดเชื้อ แถบแสดงค่าเฉลี่ยจากสองทดลองที่เป็นอิสระ บาร์ข้อผิดพลาด ... ตรวจสอบการปล่อยสารของไวรัสเพื่อตรวจสอบจำนวนของไวรัสดังต่อไปนี้การรักษาสารสกัดและการติดเชื้อไวรัส, TCID50 / ml ถูกกำหนดสำหรับเงื่อนไขและพบว่าเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุมรักษาสารสกัดลดลง โหลดไวรัส (รูปที่. 5) ในกรณีของการรักษา Ah ไม่มีไวรัสที่ตรวจพบ ต่อไปนี้การรักษา Ns จำนวนของไวรัสเป็นไปได้น้อยมากที่ติดเชื้อโพสต์ 6 ชั่วโมงและมันก็เป็น 1/10 ของจำนวนเงินการควบคุมโดยการติดเชื้อ 8 ชั่วโมงโพสต์ การรักษา Cs ส่งผลให้ในจำนวนที่เท่ากันของไวรัสที่ 6 และ 8 ชั่วโมงติดเชื้อโพสต์ซึ่งเป็น 1/10 ของตัวเลขควบคุมบวก 8 ชั่วโมง. รูป 5 รูป 5 โหลดไวรัสต่อไป NS, Ah และ Cs รักษาสารสกัดจากเซลล์ที่ติดเชื้อ HeLa CEACAM1a หลังจากที่ 6 และ 8 ชั่วโมงติดเชื้อโพสต์ ปริมาณของเชื้อไวรัสอยู่ใน supernatants วัฒนธรรมได้รับการประเมินโดยใช้เซลล์ LR7 และค่า TCID50 ถูกคำนวณ ... ระดับแคลเซียมภายในเซลล์ต่อไปนี้ความมุ่งมั่นในการแสดงออกของยีน TRP เราพยายามที่จะหาระดับแคลเซียมในเซลล์ (รูปที่. 6) ระดับแคลเซียมในเซลล์ไม่ได้เปลี่ยนไปหลังจากที่การเพิ่มขึ้นของสารสกัดจากพืชไปยังเซลล์ที่ไม่ติดเชื้อ อย่างไรก็ตามการเพิ่มขึ้นของสารสกัดจากพืชไปยังเซลล์ที่ติดเชื้อ COV เพิ่มระดับแคลเซียมในเซลล์. รูป 6 รูป 6 ระดับแคลเซียมภายในเซลล์ที่ไม่ติดเชื้อใน (ก) หรือเซลล์ที่ติดเชื้อ 6hpi (ข) และการติดเชื้อ 8 ชั่วโมงโพสต์ (ค) ที่มีและไม่มีการรักษาสารสกัดจากพืชไปที่: สรุปผลนำเสนอที่นี่แสดงให้เห็นว่าการรักษาเซลล์ที่มี NS, Ah หรือสารสกัดจาก Cs ก่อนที่จะมีการติดเชื้อลดลง COV การจำลองแบบของไวรัส IL-8 หลั่งเพิ่มขึ้นเวลา 24 ชั่วโมงสำหรับ Ns Ah และการรักษาสารสกัด แต่การรักษา Cs ไม่ได้แสดงการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญใน IL-8 หลั่งเวลา 24 ชั่วโมง อย่างไรก็ตามการหลั่ง IL-8 เป็นที่ต่ำมากที่จุดเวลาช่วงต้นหลังจากการติดเชื้อ (รูปที่. 3) ดังนั้นจึงไม่มีใครรู้ว่า IL-8 ระดับที่เกี่ยวข้องกับการโหลดไวรัสลดลง. ต่อไปนี้การวิเคราะห์การแสดงออกของยีนยีน TRP ที่มีระดับการแสดงออกของการเปลี่ยนแปลงที่ถูกระบุดังนี้ TRPM6 และ TRPA1 ทั้งสองยีนที่ถูกควบคุมลงทั้ง 6 และ 8 ชั่วโมงจุดเวลาใน COV ติดเชื้อและสารสกัดจากเซลล์ได้รับการรักษายีน TRPC4 ถูกควบคุมลงตาม Ns และการรักษา Ah ทั้ง 6 และ 8 ชั่วโมงจุดเวลา TRPM7 ถูกควบคุมลดลงเพียงหลังการรักษา Ns สำหรับสองจุดเวลายีน TRPV4 ถูกควบคุมลงต่อไปนี้ Ah รักษาสองจุดเวลาและ TRPM8 ถูกควบคุมลงหลังการรักษา Cs สำหรับสองจุดเวลา. แนวโน้มการควบคุมลงทั่วไปของยีน TRP พบว่าใน COV ติดเชื้อและสารสกัดจากเซลล์ได้รับการรักษา ร่วมกับข้อมูลที่แสดงให้เห็นว่าไวรัสโหลดลดลงการรักษาสารสกัดที่เราคาดการณ์ว่ามียีน TRP อาจจะมีส่วนร่วมในการอยู่รอด COV ภายในเซลล์ พิจารณาการจำลองแบบของไวรัสอื่น ๆ ที่เกี่ยวข้องกับความเข้มข้นแคลเซียมภายในเซลล์และ TRPs ปรับความเข้มข้นของไอออนแคลเซียมรวมทั้งเราวัดความเข้มข้นของแคลเซียมในเซลล์และพบว่าพวกเขาเพิ่มขึ้นต่อไปนี้การรักษาสารสกัดจากพืชของเซลล์ที่ติดเชื้อ ความขัดแย้งการแสดงออกของยีน TRP และผลความเข้มข้นแคลเซียมชี้ให้เห็นว่าพวกเขาอาจจะไม่ได้เกี่ยวข้องกับการลดลงโหลดไวรัสในสารสกัดจากพืชได้รับการรักษาเซลล์ที่ติดเชื้อหรือลดการแสดงออกของยีน TRP และ / หรือความเข้มข้นของแคลเซียมเพิ่มขึ้นลดลงโหลดไวรัสผ่านกลไกที่ไม่รู้จัก ระดับ undetectable ของไวรัสหลังการรักษา Ah อาจหมายถึงปัจจัยเฉพาะการมีส่วนร่วมต่อไปรักษาที่และปัจจัยนี้จะมียีน TRPV4 ซึ่งแสดงออกลงไปเฉพาะในกรณีของการรักษา Ah ทั้ง 6 และ 8 ชั่วโมงจุดเวลา ขณะนี้มีวรรณกรรมไม่ผูกยีน TRP เพื่อความอยู่รอดของเชื้อไวรัส. เหตุผลในการโหลดไวรัสลดลงต่อไปนี้การรักษาสารสกัดไม่เป็นที่รู้จักที่จุดนี้ นอกจากนี้การวิจัยเป็นสิ่งจำเป็นเพื่อที่จะระบุส่วนผสมเฉพาะ (s) ในสารสกัดที่นำไปสู่ต้นนี้และยังระบุกลไกที่จะป้องกันไม่ให้เชื้อไวรัสหรือนำไปสู่การฆ่าเชื้อไวรัสที่มีประสิทธิภาพมากขึ้น โหลดไวรัส undetectable หลังการรักษาสารสกัดจากอาอาจจะหมายถึงการวิจัยในอนาคตสามารถระบุโมเลกุลบาง (s) ในสารสกัดจากอาที่สามารถนำมาใช้เป็นยาเสพติดที่มีประสิทธิภาพสูงกับไม่เพียง แต่ COV แต่ยังไวรัสอื่น ๆ เช่นกัน. ไปที่: อิเล็กทรอนิกส์วัสดุเสริม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผลและการอภิปรายการกำหนดปริมาณสูงสุดของสารพิษ

เพื่อประเมินใด ๆเป็นไปได้พิษของเอ็นอ้าและ CS จากเซลล์ Hela ceacam1a , อนุกรมเจือจาง ( 1 / 10 1 / 50 , 1 / 100 , 1 / 1 , 1 / 10 , 000 ) ของ NS และ CS เป็นบ่มด้วยสารสกัดจากอา ceacam1a เซลล์ Hela 24 และ 48 ชั่วโมง ประเมินเซลล์โดย tetrazolium เกลือ 3 - ( 4,5-dimethylthiazol-2-yl ) - 25-diphenyltetrazolium โบรไมด์ ( MTT ) ตามลำดับ 3 สารสกัดจากพืชพบพิษ 1 / 10 เจือจาง แต่ความเป็นพิษของสารสกัดชัดเจนลดลง 1 / 50 เท่ากับ 24 และ 48 ชั่วโมงเวลาจุด ( Figs 1 , ​ 2 ) 2 )ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าผลของสารสกัดพืชพิษเหล่านี้ก็ขึ้นอยู่กับปริมาณที่น้อยลง แต่ไม่ใช่เวลาในเซลล์มีการวางอนาคตใน 1 / 10 ( ถ้าเทียบกับ 1 / 50 เจือจาง ขึ้นอยู่กับผลลัพธ์เหล่านี้ , สารสกัดจากพืช ( 1 / 50 ได้รับการยอมรับเป็นปริมาณการใช้งาน รูปที่ 1


รูปที่ 1
ผลของ NS อาและ CS จากการอยู่รอดของ ceacam1a ล่าเซลล์ceacam1a เซลล์ Hela ถูกบ่มกับเจือจางสารสกัด 24 H และเซลล์พิษถูกวัดโดย MTT assay พบ แถบแสดงเฉลี่ยจากอิสระ 2 การทดลอง . . . . . . .

รูปที่ 2 รูปที่ 2 ผลของ NS อาและ CS จากการอยู่รอดของ ceacam1a ล่าเซลล์ ceacam1a Hela cells ) ด้วยสารสกัดจาก 48 ชั่วโมงและเซลล์พิษถูกวัดโดย MTT assay พบแถบแสดงเฉลี่ยจากสองอิสระทดลองด้วย . . . . . . .
8 ระดับดังนี้สารสกัดตำรับมีเซลล์

ระดับของไซโตไคน์อักเสบนี้ใน supernatants ของเซลล์ที่ได้รับการรักษาด้วยสารสกัดจากพืชถูกกำหนดโดยวิธี ELISA ( รูปที่ 3 )นี้ได้รับเลือกสำหรับบทบาทที่เป็นไปได้ในการป้องกันเซลล์จากเซลล์ DC ไล่ลมในระหว่างการติดเชื้อและแคลเซียมช่วยกระตุ้นการส่งสัญญาณว่าอาจจะเกี่ยวข้องกับยีนก [ 45 ] 8 ระดับเพิ่มต่อไปนี้การรักษาโดย NS อาและ CS สารสกัดทั้ง 1 / 50 หรือ 1 / 100 ที่ 24 ชั่วโมง อย่างไรก็ตาม วิธีการนี้ได้ลดลงที่ระดับ 48 ชั่วโมงอ่าและ CS รักษาเซลล์นี้แสดงให้เห็นว่าสารสกัดนาโนดีกว่าที่กระตุ้นการหลั่งจากเซลล์ที่ติดเชื้อนี้จะนำไปสู่การตอบสนองการอักเสบที่ใหญ่กว่า . เมื่อวัดระดับนี้ต่อไปนี้การรักษาพืชสารสกัดจากเซลล์ 6 และการติดเชื้อโพสต์ 8 ชั่วโมง พบว่า ระดับนี้ต่ำกว่ามาตรฐานต่ำและน้อยมาก ( รูปเสริม )ดังนั้นเราจึงไม่สามารถแสดงความคิดเห็นเกี่ยวกับผลของสารสกัดจากพืชในการหลั่งจากเซลล์ที่ติดเชื้อนี้ปก


รูปที่ 3 รูปที่ 3 ผลของ NS อาและ CS จากการหลั่งจากเซลล์ถึงนี้ ceacam1a หลังจาก 24 และ 48 ชั่วโมง แถบแสดงเฉลี่ยจาก 2 การทดลองอิสระที่มีสี่ทำซ้ำสำหรับการรักษาแต่ละ แถบแสดงข้อผิดพลาดข้อผิดพลาดมาตรฐาน C
ลบ . . . . . . .การแสดงออกของยีนบำบัด ช่วยสกัดกต่อเซลล์

เพื่อแสดงผลของ NS อาและ CS จากการแสดงออกของยีนกในระหว่างการติดเชื้อ cov , ปราดเปรียว , NS , อาและ CS สกัดถูกเพิ่มไปยังเซลล์ Hela ceacam1a หนึ่งชั่วโมงก่อนการติดเชื้อปก ต่อมาเซลล์ที่ติดเชื้อมีการติดเชื้อโพสต์ 6 ชั่วโมงและ 8 ชั่วโมงระดับการแสดงออกยีนสำหรับ TRP ช่องทางครอบครัวศึกษา โดยใช้ fluidigm RT PCR การแสดงออก gapdh ใช้บรรทัดฐานของการแสดงออกของยีน ผู้ที่ไม่ติดเชื้อเซลล์ซึ่งใช้ควบคุมลบ สารสกัดจากพืชที่ติดเชื้อแต่ไม่เปิดเผยเซลล์ถูกใช้เป็นตัวควบคุมบวก

การแสดงออกของยีนกประเมิน 6 และการติดเชื้อหลัง 8 H .จุดเวลาเหล่านี้ได้รับเลือกเพราะมีการแสดงผลของ cytopathic 8 H โพสต์การติดเชื้อ [ 43 ] การเปลี่ยนแปลงในระดับการแสดงออกซึ่งการพับการเปลี่ยนแปลง ( 2 −ΔΔ CT ) สำหรับ TRP และยีนปกติ โดยแบ่งกับการพับเพื่อการควบคุมยีน gapdh .

พับเปลี่ยนค่ามากกว่า 1 บ่งชี้ขึ้นระเบียบและพับเปลี่ยนค่าที่น้อยกว่า 1 แสดง down-regulation . แต่พับเปลี่ยนค่ามากกว่า 2 และน้อยกว่า 0.5 ถือว่าสำคัญ

ตาม TRP ยีนการแสดงออกการวิเคราะห์ผลระดับการแสดงออกส่วนใหญ่ถูกลง ( รูปที่ 4 ) ที่ได้รับผลกระทบจาก trpa1 TRP ช่องทางคือ trpc4 trpm6 trpm7 , , , , และ trpm8 trpv4 .การรักษาด้วย NS อาและ CS สกัดในระหว่างการติดเชื้อมีผลใน down-regulation และของ trpm6 trpa1 ทั้ง 6 และ 8 จุด H เวลา trpc4 ลงระเบียบต่อไปนี้ NS และอาการรักษาทั้ง 6 และ 8 จุด H เวลา trpm7 ลงระเบียบเท่านั้น หลังการรักษา 2 สำหรับ 2 ครั้งคะแนน อาบัด ส่งผล down-regulation ของ trpv4 สำหรับ 2 ครั้งคะแนนการส่งผลของ CS down-regulation trpm8 สำหรับสองเวลาจุด



รูปที่ 4 รูปที่ 4 กการแสดงออกของยีนที่ระดับต่อไปนี้ NS อาและ CS สกัดรักษาโรคติดเชื้อเซลล์ Hela ceacam1a หลังจาก 6 ( A ) และ ( B ) 8 H เชื้อโพสต์เมื่อเทียบกับผู้ที่ไม่ติดเชื้อเซลล์ แถบแสดงเฉลี่ยจาก 2 การทดลองที่เป็นอิสระ ข้อผิดพลาดการตรวจสอบบาร์ . . . .

ปล่อยภายนอกเซลล์ของไวรัสเพื่อตรวจสอบจำนวนของไวรัสต่อไปนี้สารสกัดจากการรักษาและการติดเชื้อไวรัส tcid50 / ml เป็นพิจารณาเงื่อนไข และพบว่าเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม แยกการรักษาลดลง ไวรัส โหลด ( ภาพที่ 5 ) ในกรณีของอาบัด ไม่มีการตรวจพบไวรัสต่อไปนี้ NS รักษาจำนวนไวรัสมันต่ำมากที่ 6 H เชื้อโพสต์และมันเป็น 1 / 10 ของปริมาณที่ควบคุมโดย 8 H เชื้อโพสต์ การรักษา CS ( หมายเลขเดียวกันของไวรัสที่ 6 และ 8 ชั่วโมงหลังการติดเชื้อ ซึ่งเป็น 1 / 10 ของตัวเลขการควบคุมบวกด้วย 8 H .



รูปที่ 5 ภาพที่ 5 ไวรัสโหลดต่อไปนี้ NSอาและ CS สกัดการรักษาติดเชื้อเซลล์ Hela ceacam1a 6 และ 8 ชั่วโมงหลังการติดเชื้อ โพสต์ ปริมาณของไวรัสที่มีอยู่ในวัฒนธรรม supernatants ถูกประเมินโดยใช้เซลล์ lr7 tcid50 และค่านิยมได้ ระดับแคลเซียมภายในเซลล์ . . . . . . .


ตามปณิธานของการแสดงออกของยีนก เราพบว่าระดับแคลเซียมภายในเซลล์ ( รูปที่ 6 )ระดับแคลเซียมภายในเซลล์ไม่ได้เปลี่ยนหลัง นอกจากสารสกัดจากพืชเพื่อมาก่อน เซลล์ อย่างไรก็ตาม นอกจากสารสกัดจากพืช เพื่อช่วยเพิ่มระดับแคลเซียมภายในเซลล์ที่ติดเชื้อ .



รูปที่ 6 ภาพที่ 6 ระดับแคลเซียมในเซลล์เชื้อ มาลาเรีย ( ) หรือเซลล์ 6hpi ( B ) และ 8 H เชื้อโพสต์ ( C ) และไม่มีการแยกพืชไป


: บทสรุปผลการทดลองนี้ชี้ให้เห็นว่า การรักษาเซลล์ด้วย NS อ่าหรือ CS สกัดก่อนช่วยลดการติดเชื้อด้วยการจำลองแบบของไวรัส 8 การหลั่งเพิ่มขึ้นใน 24 ชั่วโมงสำหรับ NS และอาสกัดทรีทเมนต์แต่รักษา CS ไม่ได้แสดงการเพิ่มขึ้นนี้ใน 24 ชั่วโมง อย่างไรก็ตาม การหลั่งนี้ต่ำมาก จุดแรกหลังจากการติดเชื้อ ( รูปที่ 3 )ดังนั้น มันไม่ได้เป็นที่รู้จักกันถ้าระดับนี้เกี่ยวข้องกับค่าไวรัสโหลด

ต่อการแสดงออกของยีนและยีนที่มีการแสดงออกกเปลี่ยนระดับได้ระบุดังนี้ trpm6 และ trpa1 ทั้งสองยีนที่ลงมาควบคุมทั้ง 6 และ 8 ชั่วโมง เวลาจุด ปิดที่ติดเชื้อและการแยกเซลล์trpc4 ยีนควบคุมต่อไปนี้ลง NS และอาการรักษาทั้ง 6 และ 8 จุด H เวลา trpm7 ลงระเบียบเท่านั้น หลังการรักษา 2 สำหรับสองเวลาจุด trpv4 ยีนลงระเบียบต่อไปนี้อาการรักษาทั้งสองเวลา จุด และ trpm8 ลงระเบียบต่อไปนี้การรักษา CS สำหรับสอง

เวลาจุดทั่วไปลงระเบียบแนวทางกยีนที่พบในเซลล์ที่ติดเชื้อและสกัดช่วยรักษา พร้อมกับข้อมูลที่แสดงให้เห็นว่าโหลดไวรัสลดลงเมื่อแยกการรักษา เราคาดการณ์ว่าอาจจะเกี่ยวข้องกับยีนกช่วยให้รอดภายในเซลล์พิจารณาว่าคำตอบของไวรัสอื่น ๆที่เกี่ยวข้องกับความเข้มข้นของแคลเซียมไอออน และ trps ปรับความเข้มข้นภายในเซลล์ ได้แก่ แคลเซียม เราวัดความเข้มข้นของแคลเซียมภายในเซลล์และพบว่าเพิ่มขึ้นตามสารสกัดจากพืช การรักษาเซลล์ที่ติดเชื้อการโต้เถียงและความเข้มข้นของแคลเซียมกการแสดงออกของยีน พบว่าพวกเขาไม่อาจจะเกี่ยวข้องกับไวรัสโหลดลดลงในเซลล์ที่ติดเชื้อ หรือ ลดลง สารสกัดจากพืชที่ได้รับยีนก และ / หรือ เพิ่มความเข้มข้นของแคลเซียมลดลง ไวรัสโหลด ผ่านกลไกที่ไม่รู้จักระดับ undetectable ของไวรัสหลังจากอาการรักษาสามารถหมายถึงเฉพาะปัจจัยที่เกี่ยวข้องต่อไปนี้การรักษาและปัจจัยนี้สามารถ trpv4 ยีนที่มีการแสดงออกลงไปเท่านั้น ในกรณีของอาการทั้ง 6 และ 8 จุด H เวลา ขณะนี้มีวรรณคดีผูก TRP เพื่อความอยู่รอด

ยีนไวรัส .เหตุผลไวรัสโหลดลดลงต่อไปนี้สารสกัดจากการรักษาไม่เป็นที่รู้จัก ณจุดนี้ ต้องมีการวิจัยเพิ่มเติมเพื่อระบุส่วนประกอบเฉพาะ ( s ) ที่นำไปสู่การแยกและระบุกลไกซึ่งมันป้องกันไวรัส หรือนำไปสู่การมีประสิทธิภาพมากขึ้นไวรัสฆ่าundetectable ไวรัสโหลดหลังการรักษาแยกอ้าสามารถหมายถึงการวิจัยในอนาคตสามารถระบุโมเลกุลบางอย่าง ( s ) ในอ้าแยกที่สามารถใช้เป็นยาที่มีประสิทธิภาพสูงกับไม่เพียง แต่ยังอื่น ๆ มีไวรัสด้วย

ไป :
วัสดุเสริมอิเล็กทรอนิกส์