he oleaginous bacterium Rhodococus

he oleaginous bacterium Rhodococus opacus strain PD630 serves as a model organism to investigate the metabolism of storage triacylglycerols (TAGs) in bacteria. The key enzyme catalysing the last step of TAG biosynthesis in bacteria is a promiscuous acyltransferase (Atf), exhibiting acyl-CoA acyltransferase activity to both diacylglycerols (DGAT activity) and fatty alcohols (wax ester synthase, WS activity). An 800 bp PCR product was obtained from chromosomal DNA of strain PD630 by using degenerate primers designed from conserved stretches of Atf proteins of Acinetobacter baylyi strain ADP1 and Mycobacterium smegmatis mc2155. The atf fragment was used as a probe on a strain PD630 gene library, resulting in the identification of a 3948 bp chromosomal DNA fragment containing the complete atf1 gene. An atf1 disruption mutant of strain PD630 exhibited a TAG-leaky phenotype and accumulated up to 50 % less fatty acids than the wild-type, with significantly reduced oleic acid content when cultivated in the presence of gluconate or oleic acid. Whereas DGAT activity was drastically reduced in comparison to the wild-type, WS activity remained almost unchanged in the mutant. RT-PCR analysis of gluconate-grown cells of strain PD630 showed that there is expression of atf1 under conditions of TAG synthesis. To identify additional Atfs in strain PD630, PCR employing non-degenerate primers deduced from Rhodococcus jostii RHA1 sequence data was used. This yielded nine additional atf-homologous genes exhibiting 88–99 % sequence identity to the corresponding strain RHA1 enzymes. Besides Atf1 only Atf2 exhibited high DGAT and/or WS activity when heterologously expressed in Escherichia coli.

Atf, acyltransferase
DGAT, diacylglycerol acyltransferase

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เขา opacus Rhodococus oleaginous แบคทีเรียสายพันธุ์ PD630 ทำหน้าที่เป็นสิ่งมีชีวิตจำลองสืบเผาผลาญเก็บ triacylglycerols (แท็ก) ในแบคทีเรีย เอนไซม์สำคัญที่ catalysing ขั้นตอนสุดท้ายของการสังเคราะห์แท็กในแบคทีเรียเป็น acyltransferase promiscuous (Atf), อย่างมีระดับกิจกรรม acyltransferase acyl CoA diacylglycerols (DGAT กิจกรรม) และไขมัน alcohols (ขี้ผึ้งเอส synthase, WS กิจกรรม) ผลิตภัณฑ์ PCR bp เป็น 800 กล่าวจาก DNA ของโครโมโซมของต้องใช้ PD630 โดยใช้ไพรเมอร์ degenerate มาจากยาวเหยียดนำโปรตีน Atf ของ Acinetobacter ต้องใช้ baylyi mc2155 smegmatis ADP1 และมัยโคแบคทีเรีย ส่วน atf ถูกใช้เป็นโพรบในไลบรารียีนต้องใช้ PD630 ในรหัสของ 3948 bp ของโครโมโซมดีเอ็นเอส่วนที่ประกอบด้วยยีน atf1 สมบูรณ์ Mutant ทรัพยการ atf1 ของต้องใช้ PD630 จัดแสดง phenotype แท็กที่รั่ว และสะสมกรดไขมันมากกว่าป่าชนิด มีเนื้อหาลดลงอย่างมีนัยสำคัญ oleic กรดเมื่อ cultivated ในต่อหน้าของ gluconate หรือ oleic กรดถึง 50% ในขณะที่กิจกรรม DGAT ถูกลดอย่างรวดเร็ว โดยชนิดป่า กิจกรรม WS ยังคงเกือบไม่เปลี่ยนแปลงในการ mutant วิเคราะห์ RT-PCR gluconate โตเซลล์ต้องใช้ PD630 พบว่า มีค่าของ atf1 ภายใต้เงื่อนไขของการสังเคราะห์แท็ก ระบุเพิ่มเติม Atfs ใน PD630 ต้องใช้ มีใช้ PCR ที่ใช้ไพรเมอร์ไม่ใช่ degenerate deduced จาก Rhodococcus jostii RHA1 ลำดับข้อมูล นี้ผล 9 เพิ่มเติม atf homologous ยีนอย่างมีระดับฐานลำดับ 88-99% ต้องใช้ RHA1 เอนไซม์ที่เกี่ยวข้อง นอกจาก Atf1 เพียง Atf2 จัดแสดงสูง DGAT / WS กิจกรรมเมื่อ heterologously แสดงใน Escherichia coli Atf, acyltransferase DGAT, diacylglycerol acyltransferase

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เขาแบคทีเรียน้ำมัน PD630 ความเครียด Rhodococus opacus ทำหน้าที่เป็นแบบอินทรีย์ในการตรวจสอบการเผาผลาญอาหารของ triacylglycerols การจัดเก็บข้อมูล (แท็ก) ในแบคทีเรีย เอนไซม์ที่สำคัญ catalysing ขั้นตอนสุดท้ายของการสังเคราะห์ TAG ในแบคทีเรียเป็น acyltransferase สำส่อน (Atf) การแสดง acyl-CoA กิจกรรม acyltransferase เพื่อ diacylglycerols ทั้งสอง (กิจกรรม DGAT) และแอลกอฮอล์ไขมัน (ขี้ผึ้งเทสเอสเตอร์, กิจกรรม WS) 800 bp ผลิตภัณฑ์ PCR ที่ได้รับจากโครโมโซมของ PD630 สายพันธุ์โดยใช้ไพรเมอร์ที่ออกแบบมาจากคนเลวเหยียดอนุรักษ์ของโปรตีน Atf ของ Acinetobacter ADP1 ความเครียด baylyi และ Mycobacterium smegmatis MC2155 ส่วน ATF ถูกนำมาใช้เป็น probe ในห้องสมุดยีนความเครียด PD630 ผลในตัวของชิ้นดีเอ็นเอโครโมโซม bp 3948 ที่มียีน atf1 สมบูรณ์ กลายพันธุ์ atf1 การหยุดชะงักของสายพันธุ์ PD630 แสดงฟีโนไทป์ TAG-รั่วและสะสมสูงสุดถึง 50% กรดไขมันน้อยกว่าชนิดป่าที่มีอย่างมีนัยสำคัญลดปริมาณกรดโอเลอิกเมื่อปลูกในการแสดงตนของกลูโคเนตหรือกรดโอเลอิก ในขณะที่กิจกรรม DGAT ก็ลดลงอย่างมากเมื่อเทียบกับป่าประเภทกิจกรรม WS ทรงตัวใกล้เคียงในมนุษย์กลายพันธุ์ การวิเคราะห์ RT-PCR ของเซลล์ gluconate ปลูกสายพันธุ์ PD630 แสดงให้เห็นว่ามีการแสดงออกของ atf1 ภายใต้เงื่อนไขของการสังเคราะห์ TAG เพื่อระบุ ATFS เพิ่มเติมในสายพันธุ์ PD630, PCR จ้างไพรเมอร์ที่ไม่เลว deduced จากข้อมูลลำดับ RHA1 Rhodococcus jostii ถูกนำมาใช้ นี้ส่งผลให้ผู้เก้ายีน ATF-คล้ายคลึงกันเพิ่มเติมการแสดงตัวตนลำดับ 88-99% เป็นเอนไซม์ RHA1 สายพันธุ์ที่สอดคล้องกัน นอกจาก Atf1 เพียง Atf2 แสดง DGAT สูงและ / หรือกิจกรรม WS เมื่อแสดง heterologously ใน Escherichia coli. เอฟ acyltransferase DGAT, diacylglycerol acyltransferase

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ที่ผสมด้วยน้ำมัน ซึ่งเขา rhodococus โอเพคัสสายพันธุ์ pd630 ทำหน้าที่เป็นแบบอินทรีย์เพื่อศึกษาเมแทบอลิซึมของไตรกลีเซอรอลกระเป๋า ( Tags ) ในแบคทีเรีย คีย์รายละเอียดในขั้นตอนสุดท้ายของเอนไซม์ , แบคทีเรียในการผลิตเป็น acyltransferase สำส่อน ( ATF ) , จัดแสดง , COA acyltransferase กิจกรรมทั้ง diacylglycerols ( กิจกรรม dgat ) และไขมัน แอลกอฮอล์ และเอสเทอร์ ( ขี้ผึ้งกิจกรรม WS ) 800   BP ซึ่งผลิตภัณฑ์ได้จากโครโมโซมดีเอ็นเอของสายพันธุ์ pd630 โดยใช้ไพรเมอร์ที่ออกแบบมาเพื่อการยืดของรัฐบาลกลางจากโปรตีนของสายพันธุ์ และเชื้อ Acinetobacter baylyi adp1 smegmatis mc2155 . ATF ส่วนถูกใช้เป็น probe ในสายพันธุ์ pd630 ยีนห้องสมุดที่เกิดขึ้นในตัวของ  BP 1 โครโมโซมดีเอ็นเอที่มียีน atf1 สมบูรณ์ การหยุดชะงัก atf1 กลายพันธุ์สายพันธุ์ pd630 มีแท็กรั่วการสะสมได้ถึง 50   % กรดไขมันน้อยกว่าของ กับลดปริมาณกรดโอเลอิก เมื่อปลูกในการแสดงตนของกลูโคเนต หรือ กรดโอเลอิก .ส่วนกิจกรรม dgat ได้ลดลงอย่างมากในการเปรียบเทียบกับของกิจกรรม มันยังคงไม่เปลี่ยนแปลงเกือบในการกลายพันธุ์ การวิเคราะห์ RT-PCR gluconate ปลูกเซลล์ของสายพันธุ์ pd630 พบว่ามีการแสดงออกของ atf1 ภายใต้เงื่อนไขของการสังเคราะห์แท็ก ระบุเพิ่มเติมใน pd630 atfs เมื่อยPCR ใช้ degenerate primers ไม่ deduced จาก rhodococcus jostii rha1 ลำดับข้อมูลที่ถูกใช้ นี้ให้ผลเก้ารัฐบาลกลางเพิ่มเติมโฮโมโลกัสยีนแสดง 88 99 % และ ลำดับใครที่เครียด rha1 เอนไซม์ นอกจากนี้ atf1 เท่านั้น atf2 จัดแสดง dgat สูงและ / หรือ WS กิจกรรมเมื่อ heterologously แสดงออกในเชื้อ Escherichia coli .


dgat acyltransferase , ATFacyltransferase diacylglycerol