Results and Discussion
The present study reports rapid, reliable and reproducible protocols for efficient
micropropagation of two accessions of J. curcas. Although plant regeneration was
reported previously (Sujatha and Mukta 1996, Jyothi et al. 2000, Wei et al. 2004,
Rajore and Batra 2005, Sujatha et al. 2005, Nannapat et al. 2006, Datta et al. 2007),
an attempt was made to achieve a higher frequency of regeneration to enhance
micropropagation. As selection of explants is an important criterion, different
explants were used presently and encouraging results obtained with CN, AN
and ST explants through direct regeneration, and through callus and via somatic
embryos.
Adventitious shoot‐buds developed from all three explants of RSAD and KM
accessions by the fourth week on medium‐A (Fig. 1a, b). The most efficient shootbud
induction was recorded from CN explants viz. 95 ± 0.3 and 86 ± 0.6 in
“RSAD” and “KM” accessions respectively followed by AN explants viz. 81 ± 0.3
and 76 ± 0.2 in “RSAD” and “KM” accessions, respectively and ST explants viz.
60 ± 0.4 and 64 ± 0.8 in “RSAD” and “KM” accessions, respectively (Table 2). The
cultured shoots proliferated to about 5 cm in length with fully expanded leaves
by the end of the fourth week after transfer to medium‐D. Shoots could be
regenerated with a higher efficiency from CN explants (94 ± 0.3 in “RSAD” and
92 ± 0.3 in “KM” accessions than those from AN and ST explants and were also
induced to develop roots on medium‐G with a higher efficiency. Although direct
shoot regeneration was earlier reported from AN explants (Sujatha et al. 2005,
Nannapat et al. 2006, Datta et al. 2007), ST explants (Rajore and Batra 2005) and
leaf segments (Sujatha et al. 2005), the present efficiency achieved is considerably
higher.
Green nodular callus developed from CN and ST explants on medium‐B
(Fig. 1d) with callusing frequency of 38 ± 0.5 to 69 ± 0.4 (Table 2). Shoot‐buds
regenerated from these calluses (confirmed by histological studies) by the end of
the second week on medium‐E proliferated into 3 ‐ 4 cm long shoots with fully
expanded leaves by the end of the fourth week and developed roots on medium‐
G (Fig. 1d, e). A higher frequency of shoot regeneration was recorded from CN
explants (30 ± 0.3 and 38 ± 0.4 in “RSAD” and “KM” accessions respectively),
than those of ST explants (24 ± 0.3 and 28 ± 0.5 in “RSAD” and “KM” accessions,
respectively) (Table 2). There are no reports of shoot regeneration via callus from
the CN or ST explants. However, it was reported from leaf, hypocotyl, and
petiole explants (Sujatha and Mukta 1996) and epicotyl explants (Wei et al. 2004).
Green and globular proembryos developed from embryogenic callus from
CN explants on medium‐C further differentiated into heart‐shaped somatic
embryos by the end of the third week (Fig. 1e, f). After the conversion of these
Development of Efficient Micropropagation Protocols 235embryos into plantlets on medium‐F (Fig.1g), they were transferred to medium‐
G where they developed stronger roots in eight weeks. The frequency of
conversion of somatic embryos into plantlets was higher in “KM” accession (69 ±
0.3) than that of “RSAD” accession (63 ± 0.7) (Table 2). Plantlet regeneration from
leaf explants via somatic embryogenesis was reported by Jyothi et al. (2000).
However, the H, E, P and L explants did not respond to in vitro culture presently.
This might have occurred due to innate differences in the concentration of
endogenous growth regulators based on varietal differences and age of the
seedlings.
ผลและการสนทนาการศึกษานำเสนอรายงานอย่างรวดเร็ว เชื่อถือได้ และจำลองโปรโตคอลสำหรับมีประสิทธิภาพmicropropagation ของ accessions สองของ J. curcas แม้ว่าพืชฟื้นฟูได้รายงานก่อนหน้านี้ (Sujatha และ Mukta 1996 โชติร้อยเอ็ด al. 2000, Wei et al. 2004Rajore และ Batra 2005, al. et Sujatha 2005 นันณภัส et al. 2006, Datta et al. 2007),มีความพยายามที่ให้ฟื้นฟูเพื่อเพิ่มความถี่สูงmicropropagation เป็นตัวเลือก explants สำคัญเกณฑ์ แตกต่างกันexplants มีใช้ปัจจุบัน และรอบผลรับกับ CN, ANและเซนต์ explants ผ่าน ฟื้นฟูโดยตรง และ ผ่านแคลลัส และ ทาง somaticโคลนAdventitious shoot‐buds พัฒนาจาก explants สามทั้งหมดของ RSAD และ KMaccessions โดยในสัปดาห์ที่สี่บน medium‐A (Fig. 1a, b) Shootbud มีประสิทธิภาพสูงสุดเหนี่ยวนำบันทึกจาก CN explants viz. 95 ± 0.3 และ 86 ± 0.6 ใน"RSAD" และ "KM" ตามลำดับตามการ explants viz. 81 ± 0.3 accessionsและ 76 ± 0.2 ใน "RSAD" และ "KM" accessions ตามลำดับ และเซนต์ explants viz60 ± 0.4 และ 64 ± 0.8 ใน "RSAD" และ "KM" accessions ตามลำดับ (ตารางที่ 2) ที่ถ่ายภาพอ่าง proliferated พร้อมใบขยายเต็มที่ความยาวประมาณ 5 ซม.อาจจะถ่ายภาพ โดยในสัปดาห์ที่สี่หลังจากโอนย้ายไปที่ medium‐Dสร้างใหม่ มีประสิทธิภาพสูงจาก CN explants (94 ± 0.3 ใน "RSAD" และ92 accessions ± 0.3 ใน "KM" กว่าจาก AN และเซนต์ explants แนะทำให้เกิดการพัฒนารากบน medium‐G มีประสิทธิภาพสูง แม้ว่าโดยตรงยิง ฟื้นฟูก่อนหน้านี้รายงานจาก explants ใบ (Sujatha และ al. ปี 2005นันณภัส et al. 2006, Datta et al. 2007), เซนต์ explants (Rajore และ Batra 2005) และใบไม้ส่วน (Sujatha และ al. 2005) ประสิทธิภาพปัจจุบันประสบความสำเร็จเป็นอย่างมากสูงขึ้นแคลลัสสีเขียวที่พัฒนาจาก CN และเซนต์ explants บน medium‐B nodularกิน 1d) ด้วยความถี่ callusing ของ 38 ± 0.5-69 ± 0.4 (ตารางที่ 2) Shoot‐budsสร้างจาก calluses เหล่านี้ (ยืนยันจากการศึกษาสรีรวิทยา) โดยสัปดาห์สองใน medium‐E proliferated ใน 3 ‐ 4 ซมยาวถ่ายภาพกับเต็มใบขยาย โดยปลายสัปดาห์ที่สี่และรากพัฒนาบน medium‐กรัม (Fig. 1 d, e) บันทึกความถี่สูงยิงฟื้นฟูจาก CNexplants (30 ± 0.3 และ 38 ± 0.4 ใน "RSAD" และ "KM" accessions ตามลำดับ),กว่าของเซนต์ explants (24 ± 0.3 และ 28 ± 0.5 ใน accessions "RSAD" และ "KM"ตามลำดับ) (ตารางที่ 2) ไม่มีรายงานของฟื้นฟูยิงผ่านแคลลัสจากexplants CN หรือเซนต์ อย่างไรก็ตาม มันเป็นรายงานจากใบไม้ hypocotyl และpetiole explants (Sujatha และ Mukta 1996) และ epicotyl explants (Wei et al. 2004)สีเขียว และ globular proembryos พัฒนาจากเยื่อแคลลัสจากCN explants ใน medium‐C ที่แตกต่างกันเพิ่มเติม ใน heart‐shaped somaticการโคลน โดยจุดสิ้นสุดของสัปดาห์สาม (Fig. 1e, f) หลังจากการแปลงเหล่านี้การพัฒนาของ 235embryos มีประสิทธิภาพ Micropropagation รโตเป็น plantlets บน medium‐F (Fig.1g), จะถูกโอนย้ายไป medium‐G ที่จะพัฒนารากฐานที่แข็งแกร่งในแปดสัปดาห์ ความถี่ของแปรสภาพของโคลน somatic plantlets สูงกว่า "KM" ทะเบียน (69 ±0.3) กว่าที่ "RSAD" ทะเบียน (63 ± 0.7) (ตารางที่ 2) Plantlet ฟื้นฟูจากexplants ใบผ่านการเกิดเอ็มบริโอ somatic ถูกรายงานโดยโชติ et al. (2000)อย่างไรก็ตาม explants P และ L H, E ไม่ตอบสนองการเพาะในปัจจุบันนี้อาจเกิดขึ้นเนื่องจากความแตกต่างโดยธรรมชาติในความเข้มข้นของเร็คกูเลเตอร์ endogenous เติบโตตามความแตกต่างของพันธุ์และอายุของการกล้าไม้
การแปล กรุณารอสักครู่..
ผลการทดลองและการอภิปรายรายงานการศึกษาปัจจุบันอย่างรวดเร็วโปรโตคอลที่เชื่อถือได้และทำซ้ำได้อย่างมีประสิทธิภาพสำหรับการขยายของทั้งสองสายของเจดำ แม้ว่าการฟื้นฟูโรงงานที่ได้รับการรายงานก่อนหน้านี้ (Sujatha และ Mukta ปี 1996 Jyothi et al. 2000 Wei et al. 2004 Rajore และ Batra 2005 Sujatha et al. 2005 Nannapat et al. 2006 Datta et al. 2007) ความพยายามที่ ถูกสร้างขึ้นมาเพื่อให้บรรลุความถี่สูงของการฟื้นฟูเพื่อเพิ่มการขยาย ขณะที่การเลือกของชิ้นเป็นเกณฑ์สำคัญที่แตกต่างกันชิ้นถูกนำมาใช้ในปัจจุบันและผลการส่งเสริมให้ได้รับกับ CN, และ ST ชิ้นผ่านการฟื้นฟูโดยตรงและผ่านการแคลลัสและผ่านร่างกายตัวอ่อน. บังเอิญยิงตูมพัฒนาจากทั้งสามชิ้นของ RSAD และ KM สายโดยสัปดาห์ที่สี่ในกลาง-A (รูป. 1a b) มีประสิทธิภาพมากที่สุด shootbud เหนี่ยวนำได้รับการบันทึกจาก CN ชิ้น ได้แก่ 95 ± 0.3 และ 86 ± 0.6 "RSAD" และ "KM" ตามสายตามลำดับโดยชิ้น ได้แก่ 81 ± 0.3 และ 76 ± 0.2 "RSAD" และ "KM" สายตามลำดับและชิ้น ได้แก่ ST. 60 ± 0.4 และ 0.8 ± 64 ใน "RSAD" และ "KM" สายตามลำดับ (ตารางที่ 2) หน่อเลี้ยงแพร่กระจายออกไปประมาณ 5 เซนติเมตรยาวที่มีใบขยายตัวได้เต็มที่ในช่วงปลายสัปดาห์ที่สี่หลังจากที่ถ่ายโอนไปยังกลาง-D ข้าวกล้าจะได้รับการสร้างใหม่ที่มีประสิทธิภาพสูงขึ้นจากชิ้นส่วน CN (94 ± 0.3 "RSAD" และ 92 ± 0.3 "KM" สายกว่าผู้ที่มาจากและ ST ชิ้นและยังเหนี่ยวนำให้เกิดการพัฒนารากในสื่อ-G ที่มีประสิทธิภาพที่สูงขึ้น . แต่ตรงฟื้นฟูยิงรายงานก่อนหน้านี้จากชิ้น(Sujatha et al. 2005 Nannapat et al. 2006 Datta et al. 2007), ST ชิ้น (Rajore และ Batra 2005) และส่วนใบ(Sujatha et al. 2005) ประสิทธิภาพในปัจจุบันประสบความสำเร็จเป็นอย่างมากที่สูงขึ้น. แคลลัสเป็นก้อนกลมสีเขียวที่พัฒนามาจาก CN และ ST ชิ้นในสื่อ-B (รูป. 1 d) มีความถี่ callusing 38 ± 0.5-69 ± 0.4 (ตารางที่ 2). ยิงตูม-สร้างใหม่จากแคลลัสเหล่านี้( ได้รับการยืนยันจากการศึกษาเนื้อเยื่อ) ในตอนท้ายของสัปดาห์ที่สองในสื่อE-แพร่กระจายเข้ามาใน 3-4 ซม. ใบยาวกับอย่างเต็มที่ใบขยายตัวในช่วงปลายสัปดาห์ที่สี่และรากพัฒนาบนกลางG (รูปที่ 1 d, จ). ความถี่ที่สูงขึ้นของการฟื้นฟูยิงได้รับการบันทึกจาก CN ชิ้น (30 ± 0.3 และ 38 ± 0.4 "RSAD" และ "KM" สายตามลำดับ) กว่า ST ชิ้น (24 ± 0.3 และ 28 ± 0.5 "RSAD" และ " KM "สาย, ตามลำดับ) (ตารางที่ 2) ไม่มีรายงานของการฟื้นฟูยิงผ่านแคลลัสจากที่มีการ CN หรือ ST ชิ้น อย่างไรก็ตามมีรายงานจากใบ hypocotyl และชิ้นส่วนก้านใบ(Sujatha และ Mukta 1996) และชิ้น epicotyl (Wei et al. 2004). สีเขียวและ proembryos ดาวทรงกลมที่พัฒนามาจากแคลลัส embryogenic จากชิ้นส่วนในสื่อCN-C ที่แตกต่างต่อไปใน heart- รูปร่างกายตัวอ่อนในช่วงปลายสัปดาห์ที่สาม(รูป. 1e, ฉ) หลังจากการแปลงเหล่านี้พัฒนาโปรโตคอลการขยายประสิทธิภาพ 235embryos เข้าไปในต้นบนสื่อ-F (Fig.1g) พวกเขาถูกย้ายไปขนาดกลาง G ที่พวกเขาพัฒนารากที่แข็งแกร่งในแปดสัปดาห์ ความถี่ของการเปลี่ยนแปลงของร่างกายตัวอ่อนเข้าไปในต้นสูงใน "KM" ภาคยานุวัติ (69 ± 0.3) กว่า "RSAD" ภาคยานุวัติ (63 ± 0.7) (ตารางที่ 2) การฟื้นฟูต้นจากใบชิ้นผ่าน embryogenesis ร่างกายถูกรายงานโดย Jyothi et al, (2000). อย่างไรก็ตาม H, E, P และ L ชิ้นไม่ตอบสนองต่อในหลอดทดลองวัฒนธรรมปัจจุบัน. นี้อาจเกิดขึ้นเนื่องจากความแตกต่างโดยธรรมชาติความเข้มข้นของหน่วยงานกำกับดูแลการเจริญเติบโตภายนอกที่แตกต่างกันขึ้นอยู่กับพันธุ์และอายุของต้นกล้า
การแปล กรุณารอสักครู่..