DNA extractions: Total DNA was isol

DNA extractions: Total DNA was isolated from EtOH-pre- served blood samples by a modification of the salt-extraction procedure of MILLER et al. (1988). Approximately 200 pl of blood was pelleted, washed with high TE (100 mM Tris-HC1, 10 mM EDTA, pH 8.0) and resuspended in 700 pl of lysis buffer (10 mM Tris-HC1,4 00 mM NaCl, 2 mM EDTA, pH 8.3) containing 0.8% SDS and 200 pg Proteinase K. After incubating the sample overnight at 55", protein was precipi- tated by the addition of 350 pl of saturated NaCl solution followed by vigorous shaking on a Vortex for 15 min. After centrifuging for 30 min at 14,000 rpm, the supernatant was transferred to a fresh microfuge tube. DNA was precipitated by the addition of 1 volume of isopropanol. Samples were pelleted, washed with 70% EtOH and resuspended in 100- 150 pl TE. DNA concentrations were determined by measur- ing absorbance at 260 nm on a Hewlett-Packard HP8452A Diode Array spectrophotometer.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สกัดดีเอ็นเอ: ดีเอ็นเอทั้งหมดถูกแยกจากคะแนน-pre-ให้บริการตัวอย่างเลือด โดยการเปลี่ยนแปลงของกระบวนการสกัดเกลือของมิลเลอร์ et al. (1988) ประมาณ 200 pl ของเลือดถูกสัตว์ ล้าง ด้วย TE สูง (100 มม.ทริ-HC1, EDTA, 10 มม. pH 8.0) และ resuspended ใน 700 pl ของ lysis บัฟเฟอร์ (10 มม.ทริสเรทติ้ง HC1, 4 00 มม. NaCl, 2 mM EDTA, pH 8.3) ที่มี 0.8% SDS และ pg 200 เค Proteinase หลังจาก incubating ตัวอย่างค้างคืนที่ 55 โปรตีนเป็น precipi-tated โดยการเพิ่ม 350 pl ของสารละลาย NaCl อิ่มตัวตาม ด้วยการเขย่าคึกคักในวังวน 15 นาที หลังจากสิ่งที่ 14,000 rpm 30 นาที supernatant ถูกถ่ายโอนไปหลอด microfuge สด ดีเอ็นเอถูกตกตะกอน โดยการเติม isopropanol ระดับ 1 ตัวอย่างที่สัตว์ ล้าง ด้วย 70% คะแนนและ resuspended ใน 100-150 pl TE ความเข้มข้นของดีเอ็นเอถูกกำหนด โดยค่าการระบายตัวอย่างนั้น-ing ที่ 260 nm ในสเปค Hewlett-Packard HP8452A ไดโอดอาร์เรย์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สกัดดีเอ็นเอรวมดีเอ็นเอที่แยกได้จาก EtOH-ก่อนเสิร์ฟตัวอย่างเลือดโดยการเปลี่ยนแปลงขั้นตอนการสกัดเกลือของ Miller et al, (1988) ระยะทางประมาณ 200 PL ของเลือดเม็ดล้างด้วย TE สูง (100 มิลลิเมตร Tris-HC1 10 มิลลิ EDTA, ค่า pH 8.0) และ resuspended ใน 700 PL สลายของบัฟเฟอร์ (10 mM Tris-HC1,4 00 มิลลิโซเดียมคลอไรด์, 2 mm EDTA, ค่า pH 8.3) ที่มีระบบ SDS 0.8% และ 200 PG Proteinase เคหลังจากบ่มตัวอย่างค้างคืนที่ 55 "โปรตีนถูก precipi- tated โดยนอกเหนือจาก 350 PL ของการแก้ปัญหาโซเดียมคลอไรด์อิ่มตัวตามด้วยพลังเขย่า Vortex สำหรับ 15 นาที. หลังจากเหวี่ยง 30 นาทีที่ 14,000 รอบต่อนาทีใสถูกย้ายไปยังหลอด microfuge สด. ดีเอ็นเอตกตะกอนโดยการเพิ่มขึ้นของปริมาณของ 1 isopropanol. ตัวอย่างเม็ดล้างด้วย 70% เอทานอลและ resuspended ใน 100 150 ความเข้มข้น PL TE. ดีเอ็นเอ กำหนดโดยการดูดกลืนแสงไอเอ็นจี measur- ที่ 260 นาโนเมตรบนอาร์เรย์ spectrophotometer Hewlett-Packard HP8452A ไดโอด