For isolation of LAB, samples of tr

For isolation of LAB, samples of traditional fermented sausages
of Campania region (Italy) were 10-fold diluted with sterile quarterstrength
Ringer's Solution (Oxoid, UK) and homogenised for 90 s
using a Stomacher 400 (Seward, London UK). Serial 10-fold dilutions
were prepared in sterile quarter-strength Ringer's Solution
and inoculated on MRS Agar (Oxoid, UK) incubated in anaerobic
conditions for 48 h at 30 C. 118 isolates of lactobacilli were
screened for production of bacteriocins. The isolates were grown in
MRS broth (Oxoid, UK) for 16 h at 30 C. The cells were removed by
centrifugation (10,000 g for 10 min at 4 C) and the cell-free supernatant
fluid (CFSF) was adjusted to pH 7.0 with 2 mol l
1 NaOH
and filter-sterilized through 0.22 mm pore size filters (Sterile
Acrodisc, Gelman Sciences, USA). Aliquots (10 ml) of the CFSF were
assayed for bacteriocin activity using the spot-on-lawn method
(Villani et al., 1993) against indicator strains listed in Table 1. Inhibition
due to proteinaceous substances was assessed by spotting
near the spot containing the CFSF 5 ml of proteolytic enzymes
(10 mg ml
1
; trypsin, pronase E, a-chymotrypsin and pepsin, all
from Sigma, Chemical Co., St. Louis, MO, USA, were tested; the
enzymes were dissolved in 50 mmol l
1 TriseHCl, pH 7.0) which
resulted in the disappearance of the inhibition zone near the
enzyme spot. Bacteriocin activity was measured by the spot-onlawn
method and critical dilution assay as previously described
(Villani et al., 1995). Briefly, 10 ml of serial two-fold dilutions of CFSF
were spotted on Tryptone Soya Agar (TSA, Oxoid, UK) plates previously
inoculated with the selected indicator strain (about
106 cfu ml1
). After diffusion (30 min at room temperature) the
plates were incubated at 30 C for 24 h and examined for zone of
inhibition. The titer of the bacteriocin in Arbitrary Units (AU) ml
1
was expressed as the reciprocal of the highest dilution showing a
definite zone of inhibition on the indicator lawn.
One of the isolates exhibiting inhibitory activity against
L. monocytogenes ATCC 7644 was identified as L. curvatus 54M16
(see below) and studied in detail for its antimicrobial substances.
2

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สำหรับแยกของห้องปฏิบัติการ ตัวอย่างแบบหมักไส้กรอกภาค Campania (อิตาลี) ถูก 10-fold ผสมกับ quarterstrength ใส่Ringer ของโซลูชัน (Oxoid, UK) และ homogenised สำหรับ 90 sใช้ 400 แผงประดับหน้าอก (เวิร์ด ลอนดอนสหราชอาณาจักร) Dilutions 10-fold ประจำได้เตรียมไว้ในโซลูชันของ Ringer แรงไตรมาสผ่านการฆ่าเชื้อและ inoculated บน MRS Agar (Oxoid, UK) incubated ในไม่ใช้มีเงื่อนไขสำหรับ h 48 ที่ 30 C. 118 แยกของ lactobacilliฉายสำหรับผลิต bacteriocins แยกถูกปลูกในนางซุป (Oxoid, UK) สำหรับ h 16 ที่ 30 ซี เซลล์ถูกลบโดยcentrifugation (10000 g สำหรับ 10 นาทีที่ 4 C) และ supernatant ฟรีเซลล์น้ำมัน (CFSF) ถูกปรับ pH 7.0 2 โมล l 1 กับ NaOHและกรอง sterilized ผ่าน 0.22 มม.รูขุมขนขนาดกรอง (SterileAcrodisc เกลแมนวิทยาศาสตร์ สหรัฐอเมริกา) Aliquots (10 มล.) ของ CFSF ถูกassayed bacteriocin กิจกรรมใช้วิธี spot-on-หญ้า(Villani et al., 1993) กับสายพันธุ์ตัวบ่งชี้ที่แสดงในตารางที่ 1 ยับยั้งการเนื่องจากสาร proteinaceous ถูกประเมิน ด้วยการจำใกล้จุดประกอบด้วยมล CFSF 5 เอนไซม์ proteolytic(มก. 10 ml 1; ทริปซิน pronase E, a chymotrypsin และเพพซิน ทั้งหมดจากซิก เคมี จำกัด St. Louis, MO สหรัฐอเมริกา ทดสอบ ที่เอนไซม์ถูกละลายใน 50 mmol l 1 TriseHCl, pH 7.0) ซึ่งส่งผลให้เกิดการสูญหายของโซนยับยั้งใกล้เอนไซม์ที่จุด กิจกรรม bacteriocin ถูกวัดตามจุด-onlawnวิธีการและวิเคราะห์เจือจางสำคัญที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้เป็น(Villani และ al., 1995) อนุกรมสองพับ dilutions ของ CFSF สั้น ๆ 10 mlมีด่างบนจานเหลือง Tryptone Agar (TSA, Oxoid สหราชอาณาจักร) ก่อนหน้านี้inoculated กับสายพันธุ์การเลือกตัวบ่งชี้ (เกี่ยวกับ106 cfu ml1). หลังจากแพร่ (30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง)incubated ที่ 30 C ใน 24 ชม และตรวจสอบสำหรับโซนของแผ่นยับยั้ง Titer ของ bacteriocin ในหน่วยกำหนด (AU) ml 1ถูกแสดงเป็นส่วนกลับของแสดงการเจือจางสูงสุดเขตพื้นที่ที่แน่นอนของยับยั้งบนสนามหญ้าตัวบ่งชี้หนึ่งแยกอย่างมีระดับกิจกรรมลิปกลอสไขกับระบุเป็น L. curvatus L. monocytogenes ATCC 7644 54M 16(ดูด้านล่าง) และศึกษาในรายละเอียดของสารต้านจุลชีพ2

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สำหรับการแยก LAB
ตัวอย่างของไส้กรอกหมักแบบดั้งเดิมของภูมิภาคCampania (อิตาลี) เป็น 10 เท่าเจือจางด้วย quarterstrength
หมันโซลูชั่นริงเกอร์(Oxoid สหราชอาณาจักร) และ homogenised 90 s
ใช้ Stomacher 400 (เอิร์ด, ลอนดอนสหราชอาณาจักร) อนุกรมเจือจาง 10
เท่าได้จัดทำขึ้นผ่านการฆ่าเชื้อแรงไตรมาสโซลูชั่นริงเกอร์และเชื้อใน
MRS วุ้น (Oxoid สหราชอาณาจักร)
บ่มเพาะกายในเงื่อนไขเวลา48 ชั่วโมงวันที่ 30 ซี 118
สายพันธุ์ของแลคโตได้รับการคัดเลือกในการผลิตbacteriocins เชื้อที่ปลูกในน้ำซุป MRS (Oxoid สหราชอาณาจักร) เป็นเวลา 16 ชั่วโมงที่ 30 องศาเซลเซียสเซลล์ถูกลบออกโดยการหมุนเหวี่ยง(10,000 กรัมเป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส) และสารละลายมือถือฟรีของเหลว (CFSF) ปรับค่า pH 7.0 มี 2 โมลต่อลิตร 1 NaOH และกรองผ่านการฆ่าเชื้อ 0.22 มมกรองขนาดรูขุมขน (หมันAcrodisc, Gelman วิทยาศาสตร์ USA) aliquots (10 มล.) ของ CFSF ถูกassayed กิจกรรมแบคโดยใช้จุดบนสนามหญ้าวิธี(Villani et al., 1993) กับสายพันธุ์ที่ตัวบ่งชี้ที่ระบุไว้ในตารางที่ 1 การยับยั้งเนื่องจากสารโปรตีนได้รับการประเมินโดยการจำที่อยู่ใกล้จุดที่มีCFSF 5 มิลลิลิตรเอนไซม์โปรตีน(10 มก. มล. 1; trypsin อี pronase เป็น-chymotrypsin และน้ำย่อยทั้งหมดจากซิกChemical Co. , เซนต์หลุยส์สหรัฐอเมริกาได้มีการทดสอบนั้นเอนไซม์ถูกกลืนหายไปใน50 มิลลิโมลต่อลิตร 1 TriseHCl ค่า pH 7.0) ซึ่งมีผลในการหายตัวไปของโซนยับยั้งใกล้จุดเอนไซม์ กิจกรรมแบคโดยวัดจากจุด onlawn วิธีการทดสอบและการลดสัดส่วนที่สำคัญตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้(Villani et al., 1995) สั้น ๆ , 10 มิลลิลิตรเจือจางอนุกรมสองเท่าของ CFSF เป็นด่างใน Tryptone ถั่วเหลืองวุ้น (TSA, Oxoid สหราชอาณาจักร) แผ่นก่อนหน้านี้เชื้อด้วยความเครียดตัวบ่งชี้ที่เลือก(ประมาณ106 cfu ML1) หลังจากที่แพร่ (30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง) คำจานถูกบ่มที่30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงและตรวจสอบสำหรับโซนของการยับยั้ง titer ของแบคในหน่วยพล (AU มล) 1 ได้รับการแสดงเป็นซึ่งกันและกันของการลดสัดส่วนที่สูงที่สุดแสดงเป็นโซนที่ชัดเจนของการยับยั้งบนสนามหญ้าตัวบ่งชี้. หนึ่งในเชื้อแสดงฤทธิ์ยับยั้งต่อลิตร monocytogenes ATCC 7644 ถูกระบุว่าเป็นแอล curvatus 54M16 (ดูด้านล่าง) และศึกษาในรายละเอียดสำหรับสารต้านจุลชีพของ. 2

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อแยกห้องตัวอย่างแบบไส้กรอกหมัก
ของ Campania ภูมิภาค ( อิตาลี ) 10 เท่าเจือจางด้วยสารละลายฆ่าเชื้อ quarterstrength
สั่น ( oxoid , UK ) และ homogenised 90 s
ใช้แผงประดับหน้าอก 400 ( ซีเวิร์ด , ลอนดอน UK ) หมายเลข 10 วิธีการพับ

เตรียมสารละลายฆ่าเชื้อในไตรมาสแรงสั่นและนางเชื้อในวุ้น ( oxoid , UK ) บ่มในถัง
เงื่อนไขที่ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมงเชื้อแลคโตบาซิลัสถูก
118 จากการผลิตวัตถุดิบ . การเจริญเติบโตใน MRS broth (
oxoid , UK ) 16 H ที่ 30 องศาเซลเซียสเซลล์ออกโดย
3 ( 10 , 000 G สำหรับ 10 นาทีที่ 4 C ) และการสังเคราะห์น่าน
ของไหล ( cfsf ) คือค่า pH 7.0 กับ 2 โมล ผม
1 NaOH
และกรองฆ่าเชื้อผ่านขนาดรูขุมขนตัวกรอง ( เป็นหมัน
0.22 มม.acrodisc เกลแมน , วิทยาศาสตร์ , USA ) เฉยๆ ( 10 ml ) ของ cfsf ถูก
assayed สำหรับกิจกรรมการต่อจุดบนสนามหญ้า )
( villani et al . , 1993 ) กับสายพันธุ์ที่แสดงไว้ในตารางที่ 1 การยับยั้ง
เนื่องจากสาร proteinaceous ประเมินโดยเฉพาะ
ใกล้จุดที่มี cfsf 5 มิลลิลิตรโปรตีนเอนไซม์
( 10 มิลลิกรัม ml
1
; เอนไซม์โปรเนส , E , ไคโมทริปซินและเพพซินทั้งหมด
จาก Sigma , Chemical Co . , St . Louis , MO , อเมริกา , ทดสอบ ;
เอนไซม์ละลาย 50 mmol l
1 trisehcl , pH 7.0 ) ซึ่งมีผลในการหายตัวไปของ

ใกล้จุดบริเวณยับยั้งเอนไซม์ กิจกรรมต่อวัดจากจุด onlawn
วิธีและวิธีเจือจางวิกฤตตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้
( villani et al . , 1995 ) สั้น ๆ , 10 ml ของอนุกรมทวิวิธีการ cfsf
เป็นด่างในทริพโทนเหลือง ( TSA oxoid , UK ) แผ่นก่อนหน้านี้
ใส่ตัวบ่งชี้สายพันธุ์ ( ประมาณ 106 cfu ml1

) หลังจากที่การแพร่กระจาย ( 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง )
แผ่นอุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 24 ชั่วโมง และตรวจสอบบริเวณ
การยับยั้ง ไตเตอร์ของพลในหน่วยต่อมิลลิลิตร
1
( AU ) จะแสดงเป็นส่วนกลับของ dilution สูงสุดแสดง
โซนที่ชัดเจนในการยับยั้งในตัวบ่งชี้ที่สนามหญ้า
หนึ่งในสายพันธุ์แสดงฤทธิ์ยับยั้งเชื้อ 7644
L monocytogenes ถูกระบุว่าเป็น L . curvatus 54m16
( ดูด้านล่าง ) และศึกษาในรายละเอียดของสารยับยั้ง .
2