For the quantification of grape sam

For the quantification of grape samples positive to A. carbonarius
presence, a SYBR-Green I Real Time PCR assay was implemented
using the AcKS10L/R primers (Selma et al., 2008). To generate the
standard curve (Fig. 3), serial dilutions of A. carbonarius 5010
template DNA measured spectrophotometrically, were used in
duplicate. The regression coefficient (R2) was above 0.99 with an
estimated curve slope of 3.23, indicating an assay efficiency of
104.2%. Based on Selma et al. (2008) the genomic DNA weight of
A. carbonarius is assumed similar to that of Aspergillus niger which is
4.13
105 ng per haploid genome. The range of haploid genomes
that could be determined from the standard curve generated was
from 12 to 12
105. The amount of A. carbonarius DNA in the 37
natural grape samples positive for A. carbonarius detection, were
calculated using the equation of the standard curve and the corresponding
Ct values (Fig. 4). Conversion of these values to haploid
genomes showed a representation of A. carbonarius from as low as
13 to 50
103 haploid genomes per g of grape. Melt curve analysis
verified the specificity of the real time PCR reaction and the absence
of by-products

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สำหรับปริมาณของตัวอย่างองุ่นบวกกับเอ carbonarius
การแสดงตนเป็นทดสอบ SYBR เขียวผม PCR แบบ Real Time
ได้ดำเนินการโดยใช้ไพรเมอร์AcKS10L / R (เซล et al., 2008) ในการสร้างกราฟมาตรฐาน (รูปที่. 3), เจือจางอนุกรมของเอ carbonarius 5010 ดีเอ็นเอแม่แบบวัด spectrophotometrically ถูกนำมาใช้ในที่ซ้ำกัน ค่าสัมประสิทธิ์การถดถอย (R2) อยู่เหนือ 0.99 ที่มีความลาดชันโค้งประมาณ? 3.23 แสดงให้เห็นประสิทธิภาพของการทดสอบ104.2% ขึ้นอยู่กับเซล et al, (2008) น้ำหนักดีเอ็นเอของเอ carbonarius สันนิษฐานคล้ายกับที่ของไนเจอร์ Aspergillus ซึ่งเป็น4.13? 10 นาโนกรัมต่อ 5 จีโนมเดี่ยว ช่วงของจีโนมเดี่ยวที่อาจได้รับการพิจารณาจากกราฟมาตรฐานที่สร้างขึ้นเป็น12-12? 105. ปริมาณของดีเอ็นเอ carbonarius เอใน 37 ตัวอย่างองุ่นธรรมชาติในเชิงบวกสำหรับการตรวจสอบเอ carbonarius ถูกคำนวณโดยใช้สมการของเส้นโค้งมาตรฐานและสอดคล้องกันค่ากะรัต(รูปที่. 4) การแปลงค่าเหล่านี้จะเดี่ยวจีโนมแสดงให้เห็นว่าเป็นตัวแทนของเอ carbonarius จากที่ต่ำเป็น 13-50? 103 จีโนมเดี่ยวต่อกรัมองุ่น การวิเคราะห์โค้งละลายรวจสอบความจำเพาะของเวลาจริงปฏิกิริยา PCR และการขาดของโดยผลิตภัณฑ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สำหรับปริมาณขององุ่นตัวอย่างบวก . ตน carbonarius
, สีเขียว SYBR จริงเวลา PCR assay คือการใช้ acks10l /
r PCR ( เซลมา et al . , 2008 ) ในการสร้างกราฟมาตรฐาน
( รูปที่ 3 ) , อนุกรมวิธีการ . carbonarius 5010
อุปถัมภ์วัดนี้ถูกใช้ใน
ที่ซ้ำกัน ค่าสัมประสิทธิ์ถดถอย ( R2 ) สูงกว่า 0.99 ด้วย
เส้นโค้งความชันของ  ประมาณ 3.23 ระบุการทดสอบประสิทธิภาพของ
104.2 % จากเซลมา et al . ( 2008 ) ดีเอ็นเอน้ำหนัก
. carbonarius ถือว่าคล้ายกับที่ของ Aspergillus niger ซึ่ง
4.13
5 นาโนกรัมต่อ 10  แฮพลอยด์จีโนม . ช่วงแฮพลอยด์จีโนม
ที่อาจได้รับการพิจารณาจากเส้นโค้งมาตรฐานที่เกิดขึ้นคือ
12 12
105 ปริมาณของดีเอ็นเอใน carbonarius 37
Aองุ่นธรรมชาติตัวอย่างบวกเพื่อ ตรวจสอบ carbonarius ,
คำนวณโดยใช้สมการของเส้นโค้งมาตรฐานและ CT สอดคล้อง
ค่า ( รูปที่ 4 ) การแปลงค่าเหล่านี้เพื่อหาจำนวนโครโมโซม
เป็นตัวแทนของ . carbonarius จากที่ต่ำเป็น
13 50
103 แฮพลอยด์จีโนม / กรัมขององุ่น ละลาย
การวิเคราะห์เส้นโค้งตรวจสอบ ที่เฉพาะเจาะจงของเวลาจริงเพื่อตรวจหาและการขาด
ของผลพลอยได้