Sea cucumbers, Cucumaria frondosa,

Sea cucumbers, Cucumaria frondosa, were
collected in the Gulf of Maine during the
month of September and were maintained for
up to 2 months before sacrifice in the constantly
flowing fresh seawater system at
Mount Desert Island Biological Laboratory
(Salsbury Cove, ME, USA). The temperature
of the seawater was approximately 12” to
15°C. All studies were performed on pieces of
white inner dermis from the two ventral interambulacral
regions, lacking podia (Hyman,
1955). The attached inner muscular layer was
pulled off with tweezers, and the pigmented
outer dermis was removed with a razor blade.
The tissue was cut into pieces approximately 1
x 3 x 10 mm, weighed, and stored at -70°C.
Manipulation of the animal during the above
procedures caused the dermis to stiffen. If it
was desired instead to start with relaxed dermis,
the animal was placed for approximately
4 h in natural sea water diluted 1: 1 with 0.6 M
MgCIZ (Dales, 1970). This treatment produced
“narcosis” of the animal, and the dermis remained
compliant during dissection and after
being thawed.
Isolation and purzjication of whole collagen
jibrils from sea cucumber dermis
Approximately 50 g of inner dermis were
thawed and stirred in 1 L of deionized water
at 4°C for 30 min. The water was discarded
and replaced with an equal volume of fresh
deionized water. After this mixture had been
stirred at 4°C for 1 h, the water was replaced
and the extraction in water repeated once
more. The water was then replaced with 1 L
of 4 mM ethylenediaminetetraacetic acid
(EDTA), 0.1 M Tris HCl, pH 8.0, and stirred
overnight. The tissue remained compact in the
EDTA solution. The liquid was decanted and
replaced with 1 L of deionized water, in which
the tissue was stirred slowly for 15 min. The
liquid was decanted, replaced with fresh water,
and the washing steps were repeated
twice more. The liquid was then replaced with
500 ml of fresh deionized water, and the mixture
was stirred slowly overnight. The next
day the mixture consisted of pieces of swollen
dermis in a cloudy fluid. The fluid was decanted
and centrifuged for 30 min at 1,000 x
G. The top */3 of the centrifuge bottle contents,
containing free collagen fibrils, was collected,
and the rest was recombined with the pieces
of dermis. This mixture was stirred overnight
in sufficient fresh deionized water to make the
total volume 500 ml, after which the isolated
fibrils were collected as described above.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แตงกวาทะเล Cucumaria frondosa ถูก
อ่าวเมนในระหว่างการรวบรวม
เดือนกันยายน และถูกรักษาไว้สำหรับ
2 เดือนก่อนที่จะเสียสละในการตลอดเวลา
ไหลทะเลสดระบบ
ภูเขาทะเลทรายเกาะห้องปฏิบัติการชีวภาพ
(Salsbury โคฟ ME สหรัฐอเมริกา) อุณหภูมิ
ของน้ำทะเลมีประมาณ 12"
15 องศาเซลเซียส ดำเนินการศึกษาทั้งหมดบนชิ้น
ผิวหนังภายในสีขาวจาก ventral สอง interambulacral
ภูมิภาค ขาด podia (Hyman,
1955) ชั้นกล้ามเนื้อด้านในที่แนบถูก
ดึงออก ด้วยปากคีบ ที่มีสี
ผิวหนังภายนอกถูกเอาออก ด้วยใบมีดโกน
เนื้อเยื่อถูกตัดเป็นชิ้นประมาณ 1
x 3 x 10 มิลลิเมตร น้ำหนัก และจัดเก็บที่ -70 ° C.
การจัดการสัตว์ในระหว่างด้านบน
ตอนเกิดจากผิวหนังไป stiffen ถ้ามัน
ถูกต้องแต่จะเริ่มต้นด้วยผ่อนคลายผิวหนัง,
สัตว์ถูกวางในประมาณ
4 h ในน้ำทะเลธรรมชาติผสม 1:1 กับ 0.6 M
MgCIZ (Dales, 1970) รักษานี้ผลิต
"narcosis" ของสัตว์ และผิวหนังยังคง
ตาม ระหว่างชำแหละ และหลัง
กำลัง thawed.
แยกและ purzjication ของคอลลาเจนทั้งหมด
jibrils จากผิวหนังปลิง
ผิวหนังภายในประมาณ 50 g ได้
thawed และกวนในน้ำ deionized 1 L
ที่ 4° C ใน 30 นาที น้ำถูกละทิ้ง
และแทนที่ ด้วยปริมาณเท่ากันของสด
น้ำ deionized หลังจากที่ผสมนี้ได้
กวนที่ 4° C สำหรับ 1 h น้ำถูกแทน
และสกัดน้ำซ้ำอีกครั้ง
เพิ่มเติม น้ำถูกแทนที่ ด้วย 1 L แล้ว
ของ acid
(EDTA) ethylenediaminetetraacetic 4 mM, 0HCl ทริสเรทติ้ง M 1 ค่า pH 8.0 และคน
นอน เนื้อเยื่อยังคงกระชับในการ
EDTA โซลูชัน ของเหลวถูก decanted และ
ถูกแทนที่ ด้วยน้ำ deionized ที่ 1 L
เนื้อเยื่อเป็นกวนช้าสำหรับ 15 นาที
เหลวถูก decanted แทนที่ ด้วยน้ำ,
และทำซ้ำขั้นตอนซักผ้าถูก
เพิ่มเติมสองครั้ง ของเหลวถูกแทนที่ด้วยแล้ว
500 ml น้ำ deionized และส่วนผสม
ไม่กวนช้าค้างคืน ถัดไป
วันผสมประกอบด้วยชิ้นส่วนของบวม
หนังแท้ในน้ำมันมีเมฆมาก น้ำถูก decanted
และ centrifuged ใน 30 นาทีที่ 1000 x
G ด้านบน * / 3 ของเครื่องหมุนเหวี่ยงขวดเนื้อหา,
ประกอบด้วย fibrils ฟรีคอลลาเจน ที่เก็บ,
และส่วนเหลือถูก recombined กับชิ้น
ของผิวหนัง มีกวนส่วนผสมนี้ค้างคืน
พอน้ำ deionized สดต้อง
รวมปริมาตร 500 ml หลังจากที่แยก
fibrils ถูกเก็บรวบรวมตามที่อธิบายไว้ข้างต้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แตงกวาทะเล Cucumaria frondosa ถูก
เก็บรวบรวมไว้ในอ่าวเมนในช่วง
เดือนกันยายนและได้รับการรักษา
ไม่เกิน 2 เดือนก่อนที่จะเสียสละในการอย่างต่อเนื่อง
ไหลของระบบน้ำทะเลสดที่
ภูเขาทะเลทรายทางชีวภาพห้องปฏิบัติการ
(Salsbury Cove, ME, USA) อุณหภูมิ
ของน้ำทะเลอยู่ที่ประมาณ 12 "ถึง
15 องศาเซลเซียส การศึกษาทั้งหมดถูกดำเนินการกับชิ้นส่วนของ
ผิวหนังชั้นหนังแท้ภายในสีขาวจากทั้งสอง interambulacral ท้อง
ภูมิภาคขาด podia (Hyman,
1955) ชั้นกล้ามเนื้อติดภายในได้รับการ
ดึงออกด้วยแหนบและเม็ดสี
ผิวชั้นนอกจะถูกลบออกด้วยใบมีดโกน
เนื้อเยื่อถูกตัดเป็นชิ้นประมาณ 1
x 3 x 10 มมชั่งน้ำหนักและเก็บไว้ที่ -70 ° C
การจัดการของ สัตว์ในช่วงดังกล่าวข้างต้น
ขั้นตอนการเกิดผิวหนังชั้นหนังแท้จะแข็ง ถ้ามัน
เป็นที่ต้องการแทนการเริ่มต้นด้วยหนังแท้ผ่อนคลาย
สัตว์ที่ถูกนำมาวางประมาณ
4 ชั่วโมงในน้ำทะเลธรรมชาติเจือจาง 1: 1 มี 0.6 M
MgCIZ (เดลส์ 1970) การรักษานี้ผลิต
"ง่วงนอน" ของสัตว์และชั้นหนังแท้ที่ยังคงอยู่
ในช่วงที่สอดคล้องกับการตัดและหลัง
ถูกละลาย
แยกและ purzjication คอลลาเจนทั้ง
jibrils จากหนังแท้ปลิงทะเล
ประมาณ 50 กรัมของผิวหนังชั้นในได้รับการ
ละลายและคนใน 1 ลิตรของน้ำกลั่นปราศจากไอออน
ที่ 4 ° C เป็นเวลา 30 นาที น้ำทิ้ง
และแทนที่ด้วยปริมาณที่เท่ากันของสด
น้ำปราศจากไอออน หลังจากที่ผสมนี้ได้รับการ
ขยับที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงน้ำก็ถูกแทนที่
และการสกัดในน้ำซ้ำครั้ง
มากขึ้น น้ำถูกแทนที่แล้วกับ 1 ลิตร
จาก 4 มิลลิกรด ethylenediaminetetraacetic
(EDTA), 0.1 M Tris HCl, pH 8.0 และคน
ในชั่วข้ามคืน เนื้อเยื่อที่ยังคงมีขนาดกะทัดรัดใน
การแก้ปัญหา EDTA ของเหลวที่ได้รับการ decanted และ
แทนที่ด้วย 1 ลิตรของน้ำกลั่นปราศจากไอออนซึ่ง
เนื้อเยื่อถูกขยับช้า 15 นาที
ของเหลวถูก decanted, แทนที่ด้วยน้ำจืด
และขั้นตอนการซักผ้าที่ถูกทำซ้ำ
อีกครั้ง ของเหลวที่ถูกแทนที่แล้วด้วย
500 ml ของน้ำกลั่นปราศจากไอออนสดและส่วนผสมที่
ได้รับการขยับช้าในชั่วข้ามคืน ต่อ
วันส่วนผสมประกอบด้วยชิ้นส่วนของบวม
ผิวหนังชั้นหนังแท้ในของเหลวขุ่น ของเหลวที่ได้รับการ decanted
และหมุนเหวี่ยงเวลา 30 นาทีที่ 1,000 x
G. ด้านบน * / 3 ของขวดเนื้อหา centrifuge,
ที่มีคอลลาเจนซ่านฟรีได้รับการเก็บรวบรวม
และส่วนที่เหลือได้รับการ recombined กับชิ้นส่วน
ของผิวหนัง ส่วนผสมนี้ถูกขยับค้างคืน
ในน้ำปราศจากไอออนเพียงพอสดที่จะทำให้
ปริมาณ 500 มิลลิลิตรหลังจากที่แยก
เก็บซ่านตามที่อธิบายไว้ข้างต้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ทะเลแตงกวา cucumaria frondosa ,
เก็บในอ่าวเมน ในช่วงเดือนกันยายนและ

ประมาณถึง 2 เดือนก่อนที่จะสละในน้ำทะเลที่ไหลตลอดเวลา

ภูเขาทะเลทรายสดระบบห้องปฏิบัติการทางชีวภาพเกาะ
( salsbury Cove , ฉัน , USA ) อุณหภูมิของน้ำทะเลประมาณ 12
"

15 องศา การศึกษาจำนวนชิ้นของ
หนังแท้ด้านในสีขาวจากสอง ) interambulacral
ภูมิภาคขาดโปเดีย ( ไฮแมน
1955 ) แนบกล้ามเนื้อชั้นในชั้น
ดึงออกด้วยแหนบ และหนังแท้ด้านนอกมีสี
ถูกลบออกด้วยใบมีดโกน .
เนื้อเยื่อถูกหั่นเป็นชิ้นประมาณ 1
x 3 x 10 มิลลิเมตร น้ำหนัก และเก็บที่อุณหภูมิ - 70 องศา C .
การจัดการของสัตว์ในระหว่างขั้นตอนข้างต้น
ทำให้หนังแท้เพื่อทำให้แข็งทื่อถ้ามันมีที่ต้องการแทน

เริ่มผ่อนคลายด้วยหนังแท้ , สัตว์ที่ถูกวางไว้ประมาณ
4 H ในทะเลธรรมชาติน้ำเจือจาง 1 : 1 กับ 0.6 M
mgciz ( เดลส์ , 1970 ) การรักษานี้ผลิต
" เวอร์ นาร์โคซิน " ของสัตว์ และหนังแท้ อยู่ในระหว่างและหลัง

ตามการทำละลาย .
การแยกและ purzjication ของ jibrils คอลลาเจนจากทะเลแตงกวา

ทั้งหนังแท้ประมาณ 50 กรัม ) ละลายภายในหนังแท้
กวนใน 1 ลิตรของน้ำ
ที่ 4 คล้ายเนื้อเยื่อประสาน°องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที น้ำถูกทิ้งและถูกแทนที่ด้วยปริมาณเท่ากัน

คล้ายเนื้อเยื่อประสานสด น้ำ หลังจากส่วนผสมนี้มี
กวน 4 °องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง น้ำที่ถูกแทนที่
และการสกัดน้ำซ้ำเมื่อ
เพิ่มเติม น้ำถูกแทนที่ด้วย 1 l
4 มิลบอน acid ( EDTA ) ,
01 M หรือ HCl , pH 8.0 และกวน
ค้างคืน เนื้อเยื่อที่ยังคงกระชับใน
EDTA โซลูชั่น ของเหลวที่ถูกแทนที่ด้วยรินและ
1 l คล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำซึ่งในเนื้อเยื่อที่ถูกกวน

ช้า 15 นาทีของเหลวริน ถูกแทนที่ด้วยน้ำสด
และขั้นตอนการล้างก็ซ้ำ
เป็นสองเท่า ของเหลวที่ถูกแทนที่ด้วย
500 มล. ของน้ำคล้ายเนื้อเยื่อประสานสด และส่วนผสม
ถูกกวนช้าๆข้ามคืน วันถัดไป
ส่วนผสมประกอบด้วยชิ้นบวม
หนังแท้ในของเหลวขุ่น ของเหลวที่ถูกริน
ไฟฟ้าสำหรับ 30 นาทีที่ 1 , 000 x
กรัมด้านบน * / 3 ของขวดซึ่งเนื้อหา
ที่มีฟรีใยคอลลาเจนได้รวบรวม
ที่เหลือก็น้ำนมกับชิ้น
ของหนังแท้ ส่วนผสมนี้ถูกกวนทั้งคืน
ในน้ำให้เพียงพอสดคล้ายเนื้อเยื่อประสาน
ปริมาณ 500 มิลลิลิตร ซึ่งหลังจากแยก
ไฟบริลศึกษา ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น