2.5.2. Analysis of cell morphology

2.5.2. Analysis of cell morphology by acridine orange/ethidium
bromide (AO/EB) fluorescence staining
Analysis of changes in cell morphology was evaluated using
acridine orange/ethidium bromide (AO/EB) fluorescence staining
according to the method described by Jimenez et al. (2008) with
slight modifications. Briefly 3
×
106 cells were plated into 24-well
tissue culture plates and incubated for 24 h in the absence or presence
of 10.0 g/ml extracts of P. watsonii. The cells were then
detached from the plate with a 1.0 ml accutase in PBS pH 7.4. The
cell pellet was obtained by centrifugation at 1000 rpm for 5 min and
resuspended in 25 l of PBS pH 7.4. To each sample, 1 l of AO/EB
solution (1 part of 100 g/ml of AO in PBS; 1 part of 100 g/ml of EB
in PBS) was added just prior to microscopic examination. The cell
suspension was placed on a 3-well teflon coated microscopic slide,
covered with a glass cover slip and was examined with a Nikon
Eclipse 80i microscope under fluorescence illumination using FITC,
Cy3 and DAPI filters. Images were analyzed by Nikon’s Imaging
Software, NIS-Elements.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5.2. วิเคราะห์สัณฐานวิทยาเซลล์โดย acridine ส้ม/ethidiumโบรไมด์ (อ่าว/EB) ย้อมสีเรืองแสงรับการประเมินโดยใช้การวิเคราะห์การเปลี่ยนแปลงลักษณะทางสัณฐานวิทยาของเซลล์ย้อมสี acridine โบรไมด์ ethidium/สี ส้ม (อ่าว/EB) เรืองแสงตามวิธีการอธิบายโดยจิเมเนซ et al. (2008) ด้วยการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สั้น ๆ 3×106 เซลล์ถูกชุบลงในดี 24เยื่อแผ่น และได้รับการกก 24 ชั่วโมงในการขาดงานหรือสถานะการออนไลน์สกัด 10.0 g/ml ของ P. watsonii เซลล์ได้แล้วแยกออกจากแผ่นที่มีการ accutase 1.0 ml ใน PBS pH 7.4 การได้รับเซลล์เม็ด โดยหมุนเหวี่ยงที่ 1000 rpm 5 นาที และresuspended ใน PBS pH 7.4 l 25 ไปแต่ละอย่าง 1 l ของ อ่าว/EBโซลูชัน (ถึง 100 กรัม/มล.ของอ่าวใน PBS ถึง 100 กรัม/มล.ของ EBใน PBS) ถูกเพิ่มก่อนที่จะตรวจสอบด้วยกล้องจุลทรรศน์ เซลล์3 ดีเทฟลอนเคลือบด้วยกล้องจุลทรรศน์ภาพนิ่ง วางระบบกันสะเทือนปกคลุม ด้วยใบฝาครอบแก้ว และมีการตรวจสอบ ด้วย Nikonคราส 80i กล้องจุลทรรศน์ภายใต้แสงฟลูออเรสเซนต์ใช้ FITCตัวกรอง Cy3 และ DAPI ภาพที่ถูกวิเคราะห์ โดยภาพของ Nikonซอฟต์แวร์ nis ในแต่ละองค์ประกอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5.2 การวิเคราะห์ลักษณะทางสัณฐานวิทยาของเซลล์โดยส้ม acridine / ethidium
bromide (AO / EB) การย้อมสีเรืองแสง
การวิเคราะห์การเปลี่ยนแปลงในลักษณะทางสัณฐานวิทยาของเซลล์ถูกประเมินโดยใช้
สีส้ม acridine / ethidium bromide (AO / EB) เรืองแสงการย้อมสี
ตามวิธีการอธิบายโดยเมเนซ, et al (2008) ที่มี
การปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สั้น ๆ 3
×
106 เซลล์ถูกชุบลงใน 24 หลุม
จานเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อและบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงในกรณีที่ไม่มีหรือมี
10.0? g / ml สารสกัดจากพี watsonii เซลล์จากนั้นก็
ออกจากแผ่นที่มี 1.0 มล. accutase ในพีบีเอสพีเอช 7.4
ตะกอนเซลล์ที่ได้รับจากการหมุนเหวี่ยงที่ 1000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาทีและ
resuspended ใน 25? ลิตรพีบีเอสพีเอช 7.4 ? ให้กับแต่ละตัวอย่าง 1 ลิตร AO / EB
วิธีการแก้ปัญหา (1 ส่วนหนึ่งของ 100 g / ml อ่าวในพีบีเอส;? 1 ส่วน 100 กรัม / มิลลิลิตร EB
ในพีบีเอส) คือการเพิ่มเพียงก่อนที่จะมีการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ เซลล์
ระงับถูกวางลงบนสไลด์กล้องจุลทรรศน์ 3 ดีเคลือบเทฟลอน
ปกคลุมด้วยใบแก้วครอบและถูกตรวจสอบด้วยกล้อง Nikon
80i กล้องจุลทรรศน์คราสภายใต้การส่องเรืองแสงใช้ FITC,
Cy3 และตัวกรอง DAPI ภาพที่นำมาวิเคราะห์โดยการถ่ายภาพของ Nikon
ซอฟท์แว NIS องค์ประกอบ