Simultaneous saccharification and fermentation To prepare the substrate
for SSF, 1 g of converge-milled Japanese cedar was added to 50 mL polyethylene
tubes and suspended in 10 mL of 50 mM acetate buffer pH 5.0. T. reesei culture
supernatant containing 5 or 15 mg protein (corresponding to a cellobiase activity
of 0.28 or 0.84 CBU, respectively) was added, and the mixtures were incubated at
50C with shaking at 200 spm for 24 h. SSF was started by the addition of yeast
cell preparations containing equal amounts of S. cerevisiae INVSc1, either
expressing AaBGL1 or supplemented with Novozyme 188 (Sigma), a commercial
preparation of cellobiase from Aspergillus niger. Various amounts of yeast cells
representing approximately 2, 3 or 5 CBU of total cellobiase activity were tested.
The amounts of dry cell weight added to tubes containing converge-milled
Japanese cedar pretreated with 5 mg T. reesei protein were 10, 15 and 26 mg (26
OD600 units). For the tubes with 15 mg T reesei protein, 8, 15 and 29 mg (38 OD600
units) of dry cell weight were added. The tubes were sealed to create oxygenlimited
conditions and were incubated in a shaking incubator at 39C at 100 spm
for 12e72 h.
พร้อม saccharification และหมักเพื่อเตรียมพื้นผิวสำหรับ SSF, g 1 ของซีดาร์ญี่ปุ่นมาบรรจบกันปลายถูกเพิ่ม 50 mL พลาสติกหลอดและมลระงับใน 10 ของค่า pH ของบัฟเฟอร์ acetate 50 มม. 5.0 ต. reesei วัฒนธรรมsupernatant ประกอบด้วย 5 หรือ 15 มิลลิกรัมโปรตีน (ที่สอดคล้องกับกิจกรรม cellobiase0.28 หรือ 0.84 CBU ตามลำดับ) เพิ่ม และส่วนผสมได้ incubated ที่เริ่มต้น โดยการเพิ่มยีสต์ 50C พร้อมเขย่าที่ 200 spm สำหรับ 24 h. SSFการเตรียมเซลล์ที่ประกอบด้วยจำนวนเท่าของ S. cerevisiae INVSc1 อย่างใดอย่างหนึ่งแสดง AaBGL1 หรือเสริม ด้วย Novozyme 188 (ซิกมา), การพาณิชย์การเตรียม cellobiase จากไนเจอร์ Aspergillus จำนวนเซลล์ยีสต์ต่าง ๆแสดงประมาณ 2, 3 หรือ 5 CBU cellobiase รวมกิจกรรมได้ทดสอบจำนวนของน้ำหนักเซลล์แห้งเพิ่มประกอบด้วยมาบรรจบกันปลายท่อPretreated กับโปรตีน reesei มิลลิกรัม 5 ต.ซีดาร์ญี่ปุ่นได้ 10, 15 และ 26 มิลลิกรัม (26OD600 หน่วย) สำหรับหลอดที่มีโปรตีน 15 mg T reesei, 8, 15 และ 29 มิลลิกรัม (38 OD600หน่วย) ของเซลล์แห้ง เพิ่มน้ำหนัก หลอดถูกปิดผนึกเพื่อสร้าง oxygenlimitedเงื่อนไข และถูก incubated ใน incubator งก ๆ ที่ 39C ที่ 100 spmสำหรับ 12e72 h
การแปล กรุณารอสักครู่..