Total RNA from fruit mesocarp was e

Total RNA from fruit mesocarp was extracted following the protocol described by Bonghi et al. (1998). A 2 lg aliquot of total RNA from mesocarp of nectarines at S3 stage was treated with 2 U of DNase I Amplification Grade (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). The first-strand cDNA was obtained from 1 lg of the DNase-treated RNA by using the SuperScript III First Strand Synthesis System for RT-PCR (Invitrogen) with oligo(dT12–18) as a primer. A 1 ll aliquot of cDNA was PCR amplified with 25 pmol of degenerate primers [5#-CT(C/T/G) GA(T/C) GG(A/T/C) AA(A/G) AG(C/T) TT(T/C) CC-3#, sense; 5#-GT (C/T)TC CG(G/A) (G/A/T)CC (A/ G)TT (A/T/G)GA CCA-3#, antisense] designed on the basis of the conserved amino acid regions of other plant AOSs. The PCR conditions were: 95 C for 5 min, followed by 40 cycles of 95 C for 1 min, 56 C for 1 min, 72 C for 2 min, and a final extension for 7 min at 72 C. The PCR produced a single fragment of the expected size, which was purified with the Qiaquick PCR Purification Kit (Qiagen, Hilden, Germany) and cloned into a pGEM-TEasy vector (Promega, Madison, WI, USA) for sequencing. The sequenced fragment (named PpAOS1, AJ633680) was 1035 bp in length and its deduced amino acid sequence shared 76, 71, and 70% identity with Citrus sinensis (AY243478), Solanumlycopersicum (AF230371), and Cucumismelo (AF081954) AOSs, respectively.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

อาร์เอ็นเอรวมจาก mesocarp ผลไม้ถูกสกัดตามโพรโทคอลอธิบายโดย Bonghi et al. (1998) ส่วนลงตัว 2 lg ของอาร์เอ็นเอรวมจาก mesocarp ของ nectarines ในขั้นตอนของ S3 ได้รับการรักษา ด้วย 2 U ของ DNase I ขยายชั้นประถมศึกษาปี (Invitrogen คาร์ลส CA, USA) CDNA สแตรนด์แรกกล่าวจาก lg 1 ของอาร์เอ็นเอ DNase รักษา โดยใช้ตัวยก III แรกสแตรนด์สังเคราะห์ระบบสำหรับ RT-PCR (Invitrogen) กับ oligo(dT12–18) เป็นแนวทางสำหรับการ ส่วนลงตัวจะเป็น 1 ของ cDNA ถูกขยาย ด้วย pmol 25 ของไพรเมอร์ degenerate PCR [5#-CT(C/T/G) GA(T/C) GG(A/T/C) AA(A/G) AG(C/T) TT(T/C) CC-3 รู้สึก 5#-GT (C/T) CC TC CG(G/A) (G/A/T) (A / G) TT (A/T/G) GA CCA-3 #, antisense] ออกแบบตามพื้นที่นำกรดอะมิโนอื่น ๆ โรงงาน Aos เงื่อนไข PCR ได้: C 95 ใน 5 นาที ตาม ด้วยรอบ 40 95 เซลเซียสใน 1 นาที 56 ซีใน 1 นาที 72 C สำหรับ 2 นาที และส่วนขยายเป็นขั้นสุดท้ายใน 7 นาทีที่ 72 C. PCR ที่ผลิตชิ้นส่วนเดียวของขนาดที่คาดไว้ ที่บริสุทธิ์ที่ มีการ Qiaquick PCR ฟอกชุด (Qiagen, Hilden เยอรมนี) และโคลนลงใน pGEM TEasy เวกเตอร์ (Promega เมดิสัน WI สหรัฐอเมริกา) สำหรับลำดับ ส่วนตามลำดับที่ (ชื่อ PpAOS1, AJ633680) ได้ 1035 bp ในความยาวและกรดอะมิโน deduced ร่วมลำดับ 76, 71 และ 70% เอกลักษณ์ sinensis ส้ม (AY243478), Solanumlycopersicum (AF230371), และ Cucumismelo (AF081954) Aos ตามลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

อาร์เอ็นเอรวมจากเนื้อผลไม้ที่ถูกสกัดต่อไปนี้โปรโตคอลอธิบายโดย Bonghi et al, (1998) 2 aliquot ของจีอาร์เอ็นเอรวมจากเนื้อของ nectarines ในขั้นตอน S3 ได้รับการรักษามี 2 U ของฉัน DNase ขยายเกรด (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) cDNA แรกสาระที่ได้รับจากแอลจี 1 ของอาร์เอ็นเอ DNase รับการรักษาโดยการใช้ระบบยกที่สามการสังเคราะห์สาร Strand ครั้งแรกสำหรับ RT-PCR (Invitrogen) กับ Oligo (dT12-18) เป็นไพรเมอร์ aliquot LL 1 ของยีนได้รับการขยาย PCR ที่มี 25 pmol ของไพรเมอร์เลว [5 # -CT (C / T / G) จอร์เจีย (T / C) GG (A / T / C) AA (A / G) AG (C / T) ทีที (T / C) CC-3 # ความรู้สึก; 5 # -GT (C / T) TC CG (G / A) (G / A / T) CC (A / G) TT (A / T / G) CCA GA-3 # antisense] ได้รับการออกแบบบนพื้นฐานของ ภูมิภาคกรดอะมิโนป่าสงวนของ AOSS พืชอื่น ๆ เงื่อนไข PCR คือ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีตามด้วย 40 รอบจาก 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที 56 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาทีและสุดท้ายขยายเวลา 7 นาทีที่ 72 องศาเซลเซียสวิธี PCR ผลิตเดียว ส่วนของขนาดที่คาดซึ่งทำให้บริสุทธิ์ด้วยวิธี PCR Qiaquick บริสุทธิ์ Kit (Qiagen, ฮิลเดน, เยอรมนี) และโคลนเป็นเวกเตอร์ pGEM-TEasy (Promega เมดิสันวิสคอนซินสหรัฐอเมริกา) สำหรับลำดับ ส่วนติดใจ (ชื่อ PpAOS1, AJ633680) เป็น 1,035 bp ในความยาวและลำดับกรดอะมิโนที่ใช้ร่วมกันสรุปได้ว่า 76, 71, และ 70% ตัวตนกับ Citrus sinensis (AY243478) Solanumlycopersicum (AF230371) และ Cucumismelo (AF081954) AOSS ตามลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

อาร์เอ็นเอรวมจากผลไม้สกัดเพิ่มขึ้นตามขั้นตอนที่อธิบายโดย bonghi et al . ( 1998 ) 2 . จากเปลือกของ LG ส่วนลงตัวทั้งหมดของ nectarines ขั้น S3 ได้รับการตรวจหา ADNase 2 U ของฉัน ( เกรด ( Invitrogen Carlsbad , CA , USA )อาร์เอ็นเอรวมจากผลไม้สกัดเพิ่มขึ้นตามขั้นตอนที่อธิบายโดย bonghi et al . ( 1998 ) 2 . จากเปลือกของ LG ส่วนลงตัวทั้งหมดของ nectarines ขั้น S3 ได้รับการตรวจหา ADNase 2 U ของฉัน ( เกรด ( Invitrogen Carlsbad , CA , USA )antisense ] ออกแบบบนพื้นฐานของการอนุรักษ์กรดอะมิโนภูมิภาคของ aoss พืชอื่น ๆ เงื่อนไข PCR เป็น 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที ตามด้วย 40 รอบ 95 องศาเซลเซียสนาน 1 นาที 56 องศาเซลเซียสนาน 1 นาที 72 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 2 นาที และสุดท้ายเป็นส่วนขยายสำหรับ 7 นาทีที่ 72 C ซึ่งผลิตชิ้นส่วนเดียวของคาดขนาด ซึ่งถูกแยกกับ qiaquick PCR ชุดบำบัดน้ำเสีย ( QIAGEN Hilden , ,วิธีแรก คือ สาระที่ได้จากการตรวจหา ADNase 1 LG ของ RNA โดยใช้ลวดหนาม 3 เกลียว การสังเคราะห์ระบบแรกนี้ ( Invitrogen ) กับ โอลิโก ( dt12 – 18 ) เป็นไพรเมอร์ 1 จะเป็นส่วนลงตัวของ cDNA ของยีน 25 pmol degenerate primers [ 5 # - CT ( c / t / G ) Ga ( T / C ) GG ( A / T / C ) C ( A / F ) AG ( C / T ) TT ( T / C ) cc-3 # , ความรู้สึก ; 5 # - GT ( C / T ) TC CG ( G / A ) G / A / T ) CC ( / g ) TT ( / t / g ) cca-3 #กา ,เยอรมนี ) และโคลนเข้าไปใน pgem teasy เวกเตอร์ ( promega เมดิสัน , WI , USA ) สำหรับการติดตาม . การลำดับส่วน ( ชื่อ ppaos1 aj633680 , ) ) และความยาวของ BP ได้ลำดับกรดอะมิโนที่แบ่งปัน 76 , 71 , 70 % และเอกลักษณ์กับส้มเช้ง ( ay243478 ) solanumlycopersicum ( af230371 ) และ cucumismelo ( af081954 ) aoss ตามลำดับ