We investigated the production of a

We investigated the production of a hepatotoxic, cyclic heptapeptide, microcystin, by a filamentous branched cyanobacterium belonging to the order Stigonematales, genus Fischerella. The freshwater Fischerella sp. strain CENA161 was isolated from spring water in a small concrete dam in Piracicaba, São Paulo State, Brazil, and identified by combining a morphological description with 16S rRNA gene sequencing and phylogenetic analysis. Microcystin (MCYST) analysis performed using an ELISA assay on cultured cells gave positive results. High performance liquid chromatography-mass spectrometry (HPLC-MS) analysis detected 33.6microg MCYST-LR per gram dry weight of cyanobacterial cells. Microcystin profile revealed by quadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry (Q-TOF-MS/MS) analysis confirmed the production of MCYST-LR. Furthermore, genomic DNA was analyzed by PCR for sequences similar to the ketosynthase (KS) domain of the type I polyketide synthase gene, which is involved in microcystin biosynthesis. This revealed the presence of a KS nucleotide fragment similar to the mcyD and ndaD genes of the microcystin and nodularin synthetase complexes. Phylogenetic analysis grouped the Fischerella KS sequence together with mcyD sequences of the three known microcystin synthetase operon (Microcystis, Planktothrix and Anabaena) and ndaD of the nodularin synthetase operon, with 100% bootstrap support. Our findings demonstrate that Fischerella sp. CENA161 produces MYCST-LR and for the first time identify a nucleotide sequence putatively involved in microcystin synthesis in this genus.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เราตรวจสอบการผลิตกับวัฏจักร hepatotoxic heptapeptide, microcystin โดย cyanobacterium แบบแยกสาขา filamentous ของใบสั่ง Stigonematales สกุล Fischerella ปลา Fischerella sp.สายพันธุ์ CENA161 ที่แยกจากบ่อน้ำในเขื่อนคอนกรีตขนาดเล็กใน Piracicaba รัฐเซาเปาลู บราซิล และระบุการรวมคำอธิบายของ 16S rRNA ยีนลำดับและวิเคราะห์ phylogenetic Microcystin (MCYST) การวิเคราะห์ทำได้โดยใช้การทดสอบ ELISA ในอ่างเซลล์ให้ผลบวก ประสิทธิภาพสูงของเหลว spectrometry มวล chromatography (HPLC-MS) วิเคราะห์ตรวจพบ 33.6microg MCYST-LR ต่อกรัมแห้งน้ำหนักของเซลล์ cyanobacterial โปรไฟล์ของ Microcystin เปิดเผย โดย quadrupole เวลาของบิน tandem มวล spectrometry (Q-TOF-MS/MS) วิเคราะห์ยืนยันการผลิต MCYST-LR นอกจากนี้ genomic DNA ถูกวิเคราะห์ โดย PCR คล้ายกับโดเมน ketosynthase (KS) ชนิดลำดับผมโพลีคีไทด์ synthase ยีน การมีส่วนร่วมในการสังเคราะห์ microcystin ซึ่งการเปิดเผยของ KS นิวคลีโอไทด์ส่วนคล้ายกับยีน mcyD และ ndaD ของคอมเพล็กซ์ synthetase microcystin และ nodularin Phylogenetic วิเคราะห์จัดกลุ่มลำดับ Fischerella KS กับ mcyD ลำดับของ operon การ synthetase microcystin รู้จักสาม (Microcystis, Planktothrix และ Anabaena) และ ndaD nodularin synthetase operon ด้วยการสนับสนุนการเริ่มต้นระบบ 100% ผลการวิจัยของเราแสดงให้เห็นว่า Fischerella sp. CENA161 สร้าง MYCST LR และครั้งแรกระบุลำดับนิวคลีโอไทด์ putatively เกี่ยวข้องกับการสังเคราะห์ microcystin ในสกุลนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เราตรวจสอบการผลิตของตับ, heptapeptide วงจร, microcystin ได้โดยไซยาโนแบคทีเรียกิ่งใยที่อยู่ในประเภทการสั่งซื้อ Stigonematales สกุล Fischerella น้ำจืด Fischerella SP CENA161 สา​​ยพันธุ์ที่แยกได้จากน้ำฤดูใบไม้ผลิในเขื่อนคอนกรีตขนาดเล็กใน Piracicaba, รัฐเซาเปาลูรัฐบราซิลและระบุโดยการรวมคำอธิบายลักษณะทางสัณฐานวิทยากับ 16S rRNA ลำดับของยีนและการวิเคราะห์สายวิวัฒนาการ Microcystin (MCYST) การวิเคราะห์ดำเนินการโดยใช้การทดสอบ ELISA ในเซลล์เพาะเลี้ยงให้ผลบวก ของเหลวสมรรถนะสูงโคมวลสาร (HPLC-MS) การวิเคราะห์ตรวจพบ 33.6microg MCYST-LR ต่อกรัมน้ำหนักแห้งของเซลล์ไซยาโนแบคทีเรีย รายละเอียด Microcystin เปิดเผยโดย quadrupole เวลาของเที่ยวบินตีคู่มวลสาร (Q-TOF-MS / MS) การวิเคราะห์ได้รับการยืนยันการผลิตของ MCYST-LR นอกจากดีเอ็นเอได้รับการวิเคราะห์โดยวิธี PCR สำหรับลำดับคล้ายกับ ketosynthase (KS) โดเมนประเภทที่ผม polyketide synthase ยีนที่มีส่วนเกี่ยวข้องในการสังเคราะห์ระดับ microcystin ซึ่งเผยให้เห็นการปรากฏตัวของนิวคลีโอส่วน KS คล้ายกับ mcyD และยีน ndaD ของระดับ microcystin และ nodularin คอมเพล็กซ์ synthetase Phylogenetic วิเคราะห์จัดกลุ่มลำดับ Fischerella KS ร่วมกับลำดับ mcyD ของทั้งสามที่รู้จักกัน Operon synthetase ระดับ microcystin (Microcystis, Planktothrix และ Anabaena) และ ndaD ของ Operon synthetase nodularin ด้วยการสนับสนุนเงินทุน 100% ผลการวิจัยของเราแสดงให้เห็นว่า Fischerella SP CENA161 ผลิต MYCST-LR และเป็นครั้งแรกที่ระบุลำดับนิวคลีโอมีส่วนร่วมในการสังเคราะห์สมมุติ microcystin อยู่ในประเภทนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เราตรวจสอบการผลิตของโรคเอดส์ วงจร heptapeptide ที่มี , โดยแยกเป็นไซยาโนแบคทีเรียเป็นของสั่ง stigonematales สกุล , fischerella . ส่วน sp . fischerella น้ำจืดสายพันธุ์ cena161 ถูกแยกจากฤดูใบไม้ผลิน้ำในเขื่อนคอนกรีตขนาดเล็กในปิราคิคาบ้าเซาเปาลู , รัฐ , บราซิลและระบุรายละเอียดลักษณะโดยรวมกับเบส 16S rRNA ยีนและลำดับการวิเคราะห์ phylogenetic . ไมโครซิสติน ( mcyst ) การวิเคราะห์การใช้วิธี ELISA เมื่อเลี้ยงเซลล์ให้ผลบวก สัปดาห์ ( hplc-ms ประสิทธิภาพสูงของเหลว spectrometry ) การวิเคราะห์พบ mcyst-lr 33.6microg กรัมต่อน้ำหนักแห้งของระบบยูเซลล์ครั้ง - ของ - เครื่องที่มีโปรไฟล์เปิดเผยคำตีคู่มวลสาร ( q-tof-ms / MS ) การวิเคราะห์ยืนยันการผลิต mcyst-lr . นอกจากนี้ ดีเอ็นเอ โดยใช้วิธี PCR สำหรับลำดับคล้ายกับ ketosynthase ( KS ) โดเมนของประเภทกรดอะมิโน และยีนที่เกี่ยวข้องในวิถีการสังเคราะห์ที่มี .พบการปรากฏตัวของ KS นิวคลีโอไทด์เบสคล้ายกับยีนจากพ่อและ mcyd ที่มีความสามารถ และโนดูลารินคอมเพล็กซ์ การวิเคราะห์ phylogenetic จัดกลุ่มการ fischerella KS ลำดับพร้อมกับ mcyd ลำดับสามรู้จักโอเพอรอน ( แบบที่มีความสามารถ , และ planktothrix Anabaena ) และพ่อของโนดูลารินเทสโอเปอรอนด้วยการสนับสนุนเท่ากับ 100%ผลการวิจัยของเราแสดงให้เห็นว่า fischerella sp . cena161 ผลิต mycst-lr และเป็นครั้งแรกที่ระบุลำดับนิวคลีโอไทด์ putatively เกี่ยวข้องในการสังเคราะห์ที่มีในสกุลนี้