To ensure the specificity of primer

To ensure the specificity of primers 261F and 261R, extracted DNA from 4 other DNA viruses that infect shrimp including WSSV, BP, IHHNV and HPV were used as a template for the PCR reaction.
No amplification was obtained with DNA extracted from these shrimp viruses (Fig. 2). In addition, primers 261F/R did not amplify shrimp DNA extracted from P. monodon. On the contrary, the specific amplification of the expected 261 bp fragment was observed when DNA extracted from MBV positive tissues was used as the template. The detection limit of the PCR method described here using primers 261F/R and cloned WS-1 plasmid DNA as the template revealed by agarose gel visualization that as few as 100 copies of template DNA could be detected using this one-step method (Fig. 3).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เพื่อให้แน่ใจความของไพรเมอร์ 261F และ 261R สกัดดีเอ็นเอจากไวรัสดีเอ็นเออื่น ๆ 4 ที่ติดเชื้อรวมทั้งตรวจ BP, IHHNV และเชื้อ HPV กุ้ง ถูกใช้เป็นแม่แบบสำหรับปฏิกิริยา PCRขยายไม่ได้รับกับดีเอ็นเอจากไวรัสกุ้งเหล่านี้ (รูป 2) นอกจากนี้ ไพรเมอร์ 261F/R ไม่ขยายกุ้งดีเอ็นเอที่สกัดได้จาก P. monodon การ์ตูน ขยายเฉพาะของส่วน bp ที่ 261 คาดถูกตรวจสอบเมื่อดีเอ็นเอแยกจาก MBV บวกเนื้อเยื่อถูกใช้เป็นแม่แบบ จำกัดตรวจ PCR วิธีการอธิบายไว้ที่นี่โดยใช้ไพรเมอร์ 261F/R และโคลน WS-1 plasmid DNA เป็นแม่แบบที่เปิดเผย โดย agarose เจแสดงว่าเป็นน้อยเป็น 100 สำเนาของแม่แบบดีเอ็นเอสามารถถูกตรวจพบโดยวิธีนี้ขั้นตอนเดียว (รูป 3)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อให้มั่นใจความจำเพาะของไพรเมอร์ 261F และ 261R ดีเอ็นเอที่สกัดจาก 4 ไวรัสดีเอ็นเออื่น ๆ ที่ติดเชื้อกุ้งรวมทั้ง WSSV, BP, IHHNV และการติดเชื้อ HPV ถูกนำมาใช้เป็นแม่แบบสำหรับปฏิกิริยา PCR ได้.
ไม่มีเครื่องขยายเสียงที่ได้รับกับ DNA ที่สกัดจากไวรัสกุ้งเหล่านี้ ( รูปที่. 2) นอกจากนี้ไพรเมอร์ 261F / R ไม่ขยายดีเอ็นเอที่สกัดจากกุ้งกุ้งกุลาดำ ในทางตรงกันข้ามขยายเฉพาะความคาดหวัง 261 bp ชิ้นส่วนที่ถูกพบเมื่อ DNA ที่สกัดจากเนื้อเยื่อบวก MBV ถูกใช้เป็นแม่แบบ ขีด จำกัด ของการตรวจสอบของวิธี PCR อธิบายไว้ที่นี่โดยใช้ไพรเมอร์ 261F / R และโคลนดีเอ็นเอพลาสมิด WS-1 เป็นแม่แบบเปิดเผยโดยการสร้างภาพเจล agarose ว่าเป็นเพียง 100 ชุดดีเอ็นเอแม่แบบสามารถตรวจพบได้โดยใช้วิธีการขั้นตอนหนึ่ง (รูปที่ 3)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อให้ความจำเพาะของไพรเมอร์และ 261f 261r สกัดดีเอ็นเอจากดีเอ็นเอของไวรัสที่ติดเชื้ออื่น ๆ 4 กุ้งรวมทั้งี , BP , และ ihhnv HPV ถูกใช้เป็นแม่แบบสำหรับการตรวจปฏิกิริยาไม่ขยายได้กับดีเอ็นเอที่สกัดจากกุ้ง ไวรัสเหล่านี้ ( รูปที่ 2 ) นอกจากนี้ ไพรเมอร์ 261f / R ไม่ได้ขยาย DNA ที่สกัดจากกุ้งกุ้งกุลาดำ . ในทางตรงกันข้าม การเพิ่มปริมาณที่เฉพาะเจาะจงของคาด 261 BP ส่วนพบว่าเมื่อสกัดออกมาจากเนื้อเยื่อ MBV บวกถูกใช้เป็นแม่แบบ การตรวจสอบวงเงินของวิธีพีซีอาร์โดยใช้ไพรเมอร์ที่อธิบายไว้ที่นี่ 261f / R และโคลน ws-1 พลาสมิดดีเอ็นเอเป็นแม่แบบเปิดเผยโดยเจลการแสดงที่เพียง 100 ชุดของดีเอ็นเอแม่แบบสามารถตรวจพบได้โดยใช้วิธีนี้ขั้นตอนเดียว ( รูปที่ 3 )