The neighbor joining phylogenetic t

The neighbor joining phylogenetic tree of the internal transcribed spacer (ITS) and 5.8S rDNA sequences of two isolates and other 13 known sequences from GenBank database indicated that the Tulasnella isolates (JC-02 and JC-05) associated with D. nobile formed a clade with orchid mycorrhizal fungi from other epiphytic orchids and terrestrial orchids ( McCormick et al., 2004, Suarez et al., 2006, Taylor and McCormick, 2008, Nontachaiyapoom et al., 2010 and Chutima et al., 2010). Tulasnella fungi are a major group of mycorrhizal fungi forming symbiotic association with orchids in the tropics ( Currah et al., 1997, Ma et al., 2003 and Pereira et al., 2005). Tulasnella has also been reported to occur in soil and bark ( Taylor and McCormick, 2008). Based on the molecular data, Shefferson et al. (2005) found that the species of Tulasnellaceae are the major fungal group forming mycorrhizas with Cypripedium spp. by direct PCR amplification of the fungal genes in root tissue.

Many investigations have revealed that the infection of mycorrhizal fungi, which can provide the carbon sources, is essential to the seed germination of all orchids in the nature (Yam and Arditti, 2009). Without the association of mycorrhizal fungi, the small size of orchid seeds cannot carry out germination due to insufficient food reserves contained within the seed (Dressler, 1990, Rasmussen, 2002 and Porras-Alfaro and Bayman, 2007). Therefore, it is very important to assess whether some single fungus can stimulate seed germination of orchids in vitro or not to confirm the symbiotic relationships between the two livings. Moreover symbiotic germination is also an useful and convenient way to propagate orchids in the experiment condition as well as reintroduce orchids in the ecology. In this paper, Tulasnella isolates (JC-02 and JC-05) from roots of D. nobile seedlings showed a significant, positive effect on seeds germination of D. officinale. The rates of seed germination were 98.47% and 99.05%, respectively, significantly higher than that of the control (81.05%). The rate of seed germination was enhanced by 21.49% and 22.21% respectively with infection of fungal isolates JC-02 and JC-05. Moreover, the two Tulasnella isolates not only promoted the highest final percent germination, but also promoted seeds development up to stage 5. Without symbiotic fungi, asymbiotic treatments can only develop to stage 2.

Wang et al. (2011) have previously reported symbiotic seed germination of D. officinale in vitro. In their study, seeds of D. officinale were cultured on the oat meal agar (OMA) with an isolate (SHH44) from the roots of wild D. officinale, and the result indicated that germination rate was 33.4%, and only 1.8% higher than asymbiotic group (control). The fungal isolate originating from the roots of wild D. officinale was identified as belonging to Sebacina genus ( Wang et al., 2011), which was known to have a positive effect on seed germination of some orchids (Batty and Dixon, 2001). Interestingly, Tulasnella isolates appear to be more suited at facilitating germination in D. officinale than Sebacina isolates reported previously ( Wang et al., 2011). Porras-Alfaro and Bayman (2007) also observed the same result that the mycorrhizal fungi isolated from Ionopsis utricularioides can improve seed germination of Vanilla better than the isolates form Vanilla itself. This finding is also supported by other studies (e.g., Otero et al., 2004 and McCormick et al., 2004), and may prove useful for future orchid conservation studies that select mycorrhizal fungi for propagation.

Moreover, the two Tulasnella isolates had significantly positive effects on plant fresh growth and plant dry weight. This result was morphologic supported by the observation of mycorrhizal fungi colonization. Differences between JC-02 and JC-05 in effect on the plant height, number of new roots and plant diameter of D. officinale were less pronounced after 7 weeks. This result suggests that D. officinale plants might need longer time to acclimatize the infection of fungi.

Although the two Tulasnella isolates can significantly promote the seed germination and plant growth under laboratory culture conditions, it is necessary to assess the interaction between orchids and fungi during different stages in nature. Therefore, further studies are essential to confirm the relationship between the two Tulasnella isolates and D. officinale in situ.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เพื่อนบ้านร่วม phylogenetic tree ภายในทับศัพท์แผ่นรอง (ของ) และ 5.8S rDNA ลำดับสองแยกและอื่น ๆ 13 ลำดับที่รู้จักจาก GenBank ฐานข้อมูลแสดงว่า การ Tulasnella แยก (JC-02 และ JC-05) เกี่ยวข้องกับ D. ไบล์เกิด clade กับเชื้อรา mycorrhizal กล้วยจากกล้วยไม้บนต้นไม้อื่นและกล้วยไม้บกอื่น ๆ (แมคคอร์มิค et al. 2004 นัด et al. 2006 เทย์เลอร์และแมคคอร์มิค , 2008, Nontachaiyapoom et al. 2010 และชุติมา et al. 2010) เชื้อรา Tulasnella เป็นกลุ่มหลักของเชื้อรา mycorrhizal ขึ้นรูปเชื่อมโยงอยู่กับกล้วยไม้ในเขตร้อน (Currah et al. 1997, Ma et al. 2003 และ Pereira et al. 2005) Tulasnella ยังได้รายงานเกิดขึ้นในดิน และเปลือกไม้ (เทย์เลอร์และแมคคอร์มิค 2008) ตามข้อมูลโมเลกุล Shefferson et al. (2005) พบว่า พันธุ์ Tulasnellaceae เป็นกลุ่มเชื้อราที่สำคัญขึ้น mycorrhizas กับ Cypripedium ออกซิเจน โดยตรงปลักของยีนเชื้อราในเนื้อเยื่อรากหลายสอบสวนได้เปิดเผยว่า การติดเชื้อของเชื้อรา mycorrhizal ซึ่งสามารถให้แหล่งคาร์บอน เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการงอกของเมล็ดกล้วยไม้ทั้งหมดในธรรมชาติ (ยำและ Arditti, 2009) โดยสมาคมเชื้อ mycorrhizal เมล็ดกล้วยไม้มีขนาดเล็กไม่สามารถดำเนินการการงอกเนื่องจากอาหารไม่เพียงพอสำรองอยู่ภายในเมล็ด (Dressler, 1990 รัสมุ ส 2002 และ Porras Alfaro และ Bayman, 2007) ดังนั้น มันเป็นสิ่งสำคัญมาก เพื่อประเมินว่าเชื้อราบางอย่างเดียวสามารถกระตุ้นการงอกของเมล็ดกล้วยไม้ในหลอดทดลอง หรือไม่ เพื่อยืนยันความสัมพันธ์อยู่ระหว่างโครงการสอง นอกจากนั้น การงอกอยู่ก็เป็นวิธีที่สะดวก และมีประโยชน์เพื่อเผยแพร่กล้วยไม้ในสภาพการทดลอง ตลอดจนรื้อฟื้นกล้วยไม้ในระบบนิเวศ ในกระดาษนี้ Tulasnella แยก (JC-02 และ JC-05) จากรากของต้นกล้าไบล์ D. พบการงอกของเมล็ดของ D. officinale ผลสำคัญ บวก อัตราการงอกของเมล็ดได้ 98.47 และ 99.05% ตามลำดับ นัยที่ควบคุม (81.05%) เพิ่มอัตราการงอกของเมล็ด โดย 21.49% และ 22.21% ตามลำดับ โดยมีการติดเชื้อของเชื้อราที่แยกเจซี-02 และ JC-05 นอกจากนี้ แยก Tulasnella สองไม่เพียงส่งเสริมการงอกเปอร์เซ็นต์สุดท้ายสูงสุด แต่ยัง ส่งเสริมพัฒนาเมล็ดจนถึงขั้นที่ 5 โดยเชื้อราที่อยู่ asymbiotic รักษาเฉพาะพัฒนาไปขั้น 2Wang et al. (2011) have previously reported symbiotic seed germination of D. officinale in vitro. In their study, seeds of D. officinale were cultured on the oat meal agar (OMA) with an isolate (SHH44) from the roots of wild D. officinale, and the result indicated that germination rate was 33.4%, and only 1.8% higher than asymbiotic group (control). The fungal isolate originating from the roots of wild D. officinale was identified as belonging to Sebacina genus ( Wang et al., 2011), which was known to have a positive effect on seed germination of some orchids (Batty and Dixon, 2001). Interestingly, Tulasnella isolates appear to be more suited at facilitating germination in D. officinale than Sebacina isolates reported previously ( Wang et al., 2011). Porras-Alfaro and Bayman (2007) also observed the same result that the mycorrhizal fungi isolated from Ionopsis utricularioides can improve seed germination of Vanilla better than the isolates form Vanilla itself. This finding is also supported by other studies (e.g., Otero et al., 2004 and McCormick et al., 2004), and may prove useful for future orchid conservation studies that select mycorrhizal fungi for propagation.Moreover, the two Tulasnella isolates had significantly positive effects on plant fresh growth and plant dry weight. This result was morphologic supported by the observation of mycorrhizal fungi colonization. Differences between JC-02 and JC-05 in effect on the plant height, number of new roots and plant diameter of D. officinale were less pronounced after 7 weeks. This result suggests that D. officinale plants might need longer time to acclimatize the infection of fungi.Although the two Tulasnella isolates can significantly promote the seed germination and plant growth under laboratory culture conditions, it is necessary to assess the interaction between orchids and fungi during different stages in nature. Therefore, further studies are essential to confirm the relationship between the two Tulasnella isolates and D. officinale in situ.

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อนบ้านร่วม phylogenetic ต้นไม้ของภายในและ spacer ( ITS ) และ 5.8s ชนิด 2 สายพันธุ์และ 13 อื่นๆ ที่เรียกจากฐานข้อมูล พบว่าลำดับขนาด tulasnella สายพันธุ์ ( และ jc-02 jc-05 ) ที่เกี่ยวข้องกับ D . Nobile รูปแบบที่ clade ด้วยเชื้อราไมโคไรซา กล้วยไม้กล้วยไม้ epiphytic อื่น ๆและกล้วยไม้บก ( McCormick et al . 2004 ซัวเรซ et al . , 2006 , Taylor และ McCormick , 2008 , nontachaiyapoom et al . , 2010 และ ชุติมา et al . , 2010 ) tulasnella เชื้อรากลุ่มหลักของเชื้อราไมโคไรซาเป็นสมาคม symbiotic กับกล้วยไม้ในเขตร้อน ( currah et al . , 1997 , ma et al . , 2003 และ Pereira et al . , 2005 ) tulasnella ยังได้รับการรายงานที่จะเกิดขึ้นในดินและเปลือกไม้ ( Taylor และ McCormick , 2008 ) จากข้อมูลระดับโมเลกุล shefferson et al . ( 2005 ) พบว่า ชนิดของ tulasnellaceae เป็นเชื้อราไมคอร์ไรซ่ากับหลักสร้างกลุ่ม cypripedium spp . โดยการขยาย PCR ของยีนโดยเชื้อราในเนื้อเยื่อรากการตรวจสอบหลาย เปิดเผยว่ามีการติดเชื้อของเชื้อราไมโคไรซา ซึ่งสามารถให้แหล่งคาร์บอนมีความสําคัญในการงอกของกล้วยไม้ในธรรมชาติ ( ยำ และ arditti , 2009 ) โดยสมาคมไมโคไรซารา ขนาดของเมล็ดกล้วยไม้สามารถดําเนินการงอก เนื่องจากอาหารไม่เพียงพอสำรองที่มีอยู่ในเมล็ด ( dressler , 2533 , ราสมุสเซ่น ปี 2002 และ พอร์ราส อัลฟาโร่ และ bayman , 2007 ) ดังนั้น , มันเป็นสิ่งสำคัญมากที่จะประเมินว่าบางเดี่ยวเชื้อราสามารถกระตุ้นการงอกของเมล็ดกล้วยไม้ในสภาพปลอดเชื้อ หรือ ไม่ เพื่อยืนยันความสัมพันธ์ symbiotic ระหว่างสองสิ่งมีชีวิตที่ . โดยอาศัยการงอกยังเป็นวิธีที่มีประโยชน์และสะดวกที่จะขยายพันธุ์กล้วยไม้ในการทดลองเงื่อนไขตลอดจนรื้อฟื้นกล้วยไม้ในระบบนิเวศ ในกระดาษนี้ tulasnella สายพันธุ์ ( และ jc-02 jc-05 ) จากรากของต้นกล้าพบ D . Nobile อย่าง บวกกับการงอกของเมล็ด . พะเยา . อัตราการงอก และ 99.05 รวม % ตามลำดับ สูงกว่า กลุ่มควบคุม ( 81.05 % ) อัตราการงอกของเมล็ดเพิ่มขึ้น โดย 21.49 % และปฏิบัติการตามลำดับกับการติดเชื้อของเชื้อราและเชื้อ jc-02 jc-05 . นอกจากนี้ สอง tulasnella ไอโซเลทไม่เพียง แต่ส่งเสริมการงอกและขั้นสุดท้ายสูงสุด แต่ยังส่งเสริมเมล็ดพัฒนาขึ้นเวที 5 โดยไม่ต้องอาศัยเชื้อรา การรักษา asymbiotic เท่านั้นที่สามารถพัฒนาไปสู่ขั้นที่ 2Wang et al . ( 2554 ) มีรายงานว่า ก่อนหน้านี้อาศัยการงอกของ D . พะเยาในหลอดแก้ว ในการศึกษาของพวกเขา , เมล็ดของ D . พะเยาโดยเลี้ยงบนอาหารวุ้น โอ๊ต ( OMA ) ที่มีการแยก ( shh44 ) จากรากของป่า D . พะเยา และพบว่าอัตราการงอกคือลลา % และมีเพียง 1.8% สูงกว่ากลุ่มควบคุม asymbiotic ) การแยกเชื้อราที่เกิดจากรากของป่า D . พะเยาถูกระบุว่าเป็นของ sebacina สกุล ( Wang et al . , 2011 ) ซึ่งเป็นที่รู้จักกันจะมีผลเป็นบวก อัตราการงอกของกล้วยไม้บาง ( บ้า และ ดิกสัน , 2001 ) น่าสนใจ tulasnella ไอโซเลตที่ปรากฏจะเหมาะในการงอกใน D . พะเยากว่า sebacina จากรายงานก่อนหน้านี้ ( Wang et al . , 2011 ) อัลฟาโร่ และ bayman พอร์ราส ( 2007 ) ยังพบผลลัพธ์เดียวกันที่แยกได้จากเชื้อราไมโคไรซา ionopsis utricularioides สามารถปรับปรุงความงอกของเมล็ดวานิลลาได้ดีกว่าไอโซฟอร์มวานิลลานั่นเอง การค้นพบนี้ได้รับการสนับสนุนโดยการศึกษาอื่น ๆ ( เช่น โอเตโร et al . , 2004 และ McCormick et al . , 2004 ) , และอาจพิสูจน์ประโยชน์สำหรับอนาคตที่เลือกศึกษากล้วยไม้อนุรักษ์เชื้อราไมโคไรซาเพื่อการขยายพันธุ์ .นอกจากนี้ สอง tulasnella แยกได้ผลในเชิงบวกอย่างมีนัยสำคัญในการเจริญเติบโตของพืชสด และน้ำหนักต้นแห้ง ผลที่ได้นี้คือรูปร่างที่ได้รับการสนับสนุน โดยสังเกตจากไมโคไรซา เชื้อรา การเป็นอาณานิคม ความแตกต่างระหว่างและใน jc-02 jc-05 มีผลต่อความสูง จำนวนรากใหม่ และปลูกเส้นผ่านศูนย์กลาง D . พะเยา ได้น้อยกว่าออกเสียงหลังจาก 7 สัปดาห์ ผลที่ได้นี้แสดงให้เห็นว่างพะเยาพืชอาจต้องการเวลาเพื่อปรับตัว การติดเชื้อของเชื้อราแม้ว่าสอง tulasnella เชื้ออย่างมีนัยสำคัญสามารถส่งเสริมการงอกของเมล็ดและการเจริญเติบโตของพืชภายใต้สภาวะห้องปฏิบัติการเพาะเลี้ยง จะต้องมีการประเมินปฏิสัมพันธ์ระหว่างกล้วยไม้ และเชื้อรา ในขั้นตอนที่แตกต่างกันในธรรมชาติ ดังนั้น การศึกษาเพิ่มเติมเป็นสิ่งจำเป็นเพื่อยืนยันความสัมพันธ์ระหว่างสอง tulasnella ไอโซเลทและ D . พะเยาในแหล่งกำเนิด