Quantitative assay for production o

Quantitative assay for production of
L-asparaginase by isolated bacterial cultures:
The quantitative estimation of enzyme
activity was done with selected culture i.e. E. coli
isolates VRY-8, VRY-14 & VRY-15. Asparaginase
activity was measured by method of Mashburn &
Wriston (1963). The rate of hydrolysis of L-asparagine
was determined by measuring the release of ammonia
using Nessler’s reaction. The reaction mixture
contained 0.5 ml of enzyme sample, 0.5 ml of 0.05 M
Tris-HCl buffer (pH 8.6) and 0.5 ml of 0.04 M Lasparagine.
The reaction mixture was incubated at
37°C for 30 min. The enzyme activity was stopped by
the addition of trichloroacetic acid (TCA 10%w/v). The
mixture was then centrifugated at 10,000 rpm for 5
min, and 0.1 ml of the supernatant was taken and to it
3.7 ml of distilled water was added; 0.2 ml of Nessler’s
reagent (Himedia) was added to the reaction tube and
kept at 20°C for 20 min. The absorbance was measured
at 450 nm using spectrophotometer. The amount of
ammonia liberated was calculated using ammonium
standard curve. One unit of L-asparaginase activity is
defined as release of one micromole of ammonia per
hour at 37°C and pH 8.6.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การวิเคราะห์เชิงปริมาณสำหรับการผลิต l
-asparaginase จากวัฒนธรรมของแบคทีเรียที่แยก:
ประมาณค่าเชิงปริมาณของเอนไซม์
กิจกรรมที่ทำด้วย IEE วัฒนธรรมที่เลือก coli
แยก VRY-8, VRY-14 & VRY-15 asparaginase
กิจกรรมวัดโดยวิธี mashburn &
wriston (1963) อัตราการย่อยสลายของ L-asparagine
ถูกกำหนดโดยการวัดการปล่อยของแอมโมเนีย
โดยใช้ปฏิกิริยาของ Nessler ผสมปฏิกิริยา
มี 0.5 มิลลิลิตรของตัวอย่างเอนไซม์, 0.5 มล. 0.05 m
บัฟเฟอร์ tris-hcl (ph 8.6) และ 0.5 มล. 0.04 เมตร lasparagine.
ผสมปฏิกิริยาที่ถูกบ่มที่
37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที เอนไซม์ก็หยุดโดย
นอกจากนี้กรดไตรคลอโร (TCA 10% w / v)
ส่วนผสม centrifugated ถูกแล้วที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาที
และ 01 มิลลิลิตรของสารละลายและถูกนำตัวไป
3.7 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นได้รับการเพิ่ม 0.2 มิลลิลิตร Nessler ของสาร
(himedia) ถูกบันทึกอยู่ในหลอดปฏิกิริยาและ
เก็บไว้ที่ 20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาที การดูดกลืนแสงวัด
ที่ 450 นาโนเมตรโดยใช้ spectrophotometer ที่ ปริมาณการปลดปล่อยแอมโมเนีย
ถูกคำนวณโดยใช้แอมโมเนียม
กราฟมาตรฐาน หน่วยหนึ่งของกิจกรรม L-asparaginase เป็น
หมายถึงการเปิดตัวของหนึ่งในไมโครโมของแอมโมเนียต่อ
ชั่วโมงที่ 37 องศาเซลเซียสและ ph 8.6

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิเคราะห์เชิงปริมาณสำหรับการผลิต
L-asparaginase วัฒนธรรมแยกแบคทีเรีย:
การประเมินเชิงปริมาณของเอนไซม์
ทำกิจกรรมกับเลือกวัฒนธรรมเช่น E. coli
แยก VRY-8, VRY 14 & VRY-15 Asparaginase
กิจกรรมถูกวัด โดยวิธีการ Mashburn &
Wriston (1963) อัตราของไฮโตรไลซ์ L asparagine
ถูกกำหนด โดยขนาดของแอมโมเนีย
โดยใช้ปฏิกิริยาของ Nessler ผสมปฏิกิริยา
อยู่ 0.5 ml ของเอนไซม์อย่าง 0.5 ml ของ 0.05 M
ทริสเรทติ้ง HCl บัฟเฟอร์ (pH 8.6) และ 0.5 ml ของ 0.04 M Lasparagine
ผสมปฏิกิริยาถูก incubated ที่
37° C สำหรับ 30 นาที หยุดกิจกรรมของเอนไซม์โดย
แห่ง trichloroacetic กรด (TCA 10%w/v) ใน
ผสมได้แล้ว centrifugated ที่ 10000 rpm สำหรับ 5
min และ 01 ml ของ supernatant ถูกนำมาและไป
3.7 ml ของน้ำกลั่นเพิ่ม 0.2 ml ของของ Nessler
รีเอเจนต์ (Himedia) ถูกเพิ่มหลอดปฏิกิริยา และ
เก็บที่ 20° C สำหรับ 20 นาที มีวัด absorbance ที่
ที่ 450 nm โดยใช้เครื่องทดสอบกรดด่าง จำนวน
มีคำนวณโดยใช้แอมโมเนียแอมโมเนีย liberated
โค้งมาตรฐาน เป็นหน่วยหนึ่งของกิจกรรม L-asparaginase
กำหนดเป็นของ micromole หนึ่งของแอมโมเนียต่อ
ชั่วโมงที่ 37° C และ pH 8.6

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในเชิงปริมาณสอบสำหรับการผลิต
L - asparaginase โดยแยกเชื้อแบคทีเรียวัฒนธรรม:
ที่เชิงปริมาณของเอนไซม์
ซึ่งจะช่วยประมาณการทำงานก็ทำได้ด้วยที่เลือกทางวัฒนธรรมเช่น E .ผล
แยก vry - 8 , vry & vry - 14 - 15 . กิจกรรม asparaginase
วัดได้โดยใช้วิธีการของ mashburn &
wriston ( 1963 ) อัตราของหลักด้วยของ L - เมื่อได้รับความร้อน
ซึ่งจะช่วยตรวจสอบแล้วว่าเป็นการวัดการปล่อยสารแอมโมเนีย
การใช้การตอบสนองของ nessler การผสมผสานกันระหว่าง
ซึ่งจะช่วยให้การตอบสนองที่อยู่ 0.5 มล.ของเอนไซม์ตัวอย่าง, 0.5 มล.ของบริษัททริสเรทติ้งจำกัด 0.05 ม.
- HCL /บัฟเฟอร์( PH 8.6 )และ 0.5 มล.ของ 0.04 ม. lasparagine .
ที่ตอบสนองการผสมผสานกันระหว่างเป็น incubated ที่
37 ° C สำหรับ 30 นาทีที่เอนไซม์ของกิจกรรมก็หยุดโดย
ของ trichloroacetic กรด( tca 10% w / v )
การผสมผสานกันระหว่างที่อยู่ที่ 10 , 000 รอบต่อนาที centrifugated สำหรับ 5
นาทีและ 0 แล้ว1 มล.ของ supernatant เอาไว้และให้
3.7 มล.น้ำกลั่นในอัตราส่วนเพิ่มเป็น 0.2 มล.ของ' snessler
ซัดยา( himedia )ได้ถูกเพิ่มลงในท่อดูดฝุ่นปฏิกริยาที่และ
อยู่ที่ 20 ° C สำหรับ 20 นาที absorbance วัดได้
ที่ 450 nm โดยใช้ใช้ใน จำนวนของ
แอมโมเนียหลุดพ้นจะคำนวณโดยใช้ความโค้งมน its ammonium
ตามมาตรฐาน หนึ่งชุดของการทำงานของ L - asparaginase คือ
ตามมาตรฐานกำหนดไว้เป็นการวางของหนึ่ง micromole แอมโมเนียต่อ
ชั่วโมงที่ 37 ° C และ pH 8.6