Procedure:A. Bacterial Suspension

Procedure:

A. Bacterial Suspension
1. From an agar slant culture:
a. Suspend a loopful of bacteria in 2 ml distilled water to obtain an opalescent suspension.
b. Allow the suspension to stand undisturbed for 15 to 20 minutes while flagella are regenerated and extended.
B. Slides
1. Select new or unscratched slides.
2. Clean slides with cleaning powder as directed.
3. Flame one of the slides and allow it to cool.
4. Make a heavy wax line on the flamed side along the margin of one end, along both sides to within about one inch of the other end, and across the slide to complete the rectangle. Handle the slide by the unmarked end only. The wax line creates a retaining wall to allow a pool of stain to surround the cells during the 15 to 15 minute staining period.

C. Preparation of smear
1. Handling the suspension carefully remove a large loopful of the suspension and place it at one end of the rectangular area.
2. Tilt the slide to permit the suspension to run down to the other end of the slide. If the drop fails to run, add another drop.
3. Air dry the film. Do not heat.
4. Place the slide on a horizontal staining rack.

D. Staining procedure
1. Add about 1 ml. of the Flagella Stain solution (one dropper full) to the smear and allow to stain for 10-15 minutes. The solution should not be allowed to flow outside the waxed area.
2. Flood off the stain by adding tap water to the slide while it remains on the rack. Do not tip the slide before this is done.
3. Drain and flood the slide with carbol fuchsin for one minute. Rinse by flooding. Drain and air dry. Do not blot.

E. Examination of slide
1. With the naked eye identify the line made by the drop as it ran down the slide.
2. Position the slide so that the edge of the run is under the objective.
3. Focus the edge of the run under low power, as oil, and examine it using the oil immersion objective.
4. Identify cells as distinguished from dye and debris which will adhere to the slide because of the mordant. Cells will be small rods and have regular outlines. They will be more plentiful near the lower end of the run and may look larger than usual because of the mordant.
5. Once cells are identified follow along the edge of the run, examining cells until some are found with flagella attached. Flagella are much longer than the cell and often look like faint hairs.
6. Ideally, cells should be located which are isolated enough to determine unequivocally the arrangement of the flagella and, for the Pseudomonas, the number of flagella per cell.
7. Draw the cells and their flagella.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ขั้นตอน:A. ระงับเชื้อแบคทีเรีย 1. จาก agar เอียงวัฒนธรรม: อ.ระงับ loopful ของแบคทีเรียในน้ำกลั่น 2 ml สามารถระงับการ opalescent b. ให้ระงับยืนอีก 15-20 นาทีขณะที่ flagella จะสร้าง และขยายB. ภาพนิ่ง 1. เลือกภาพนิ่งใหม่ หรือ unscratched 2. ล้างภาพนิ่งกับการทำความสะอาดผงตาม 3. ไฟหนึ่งของภาพนิ่ง และอนุญาตให้เย็น 4. ทำให้เส้นขี้ผึ้งหนักด้าน flamed ตามขอบของปลายหนึ่ง ริมทั้งสองข้างให้ภายในประมาณหนึ่งนิ้ว ของอีกฝ่าย และภาพนิ่งสมบูรณ์สี่เหลี่ยม จัดการภาพนิ่งโดยไม่เท่านั้น เส้นขี้ผึ้งสร้างผนังกันดินให้พูคราบล้อมรอบเซลล์ระหว่าง 15 กับ 15 นาทีระยะเวลาการย้อมสีค.เตรียมการเลอะเปื้อน 1. การจัดการการระงับอย่างระมัดระวังเอา loopful ใหญ่ของการระงับ และวางที่ปลายด้านหนึ่งของพื้นที่สี่เหลี่ยม 2. เอียงยังอนุญาตให้ระงับการรันลงไปท้ายของภาพนิ่ง ถ้าฝากทำงาน เพิ่มหล่นอีก 3. อากาศแห้งฟิล์ม ไม่ต้องร้อน 4. วางภาพนิ่งบนชั้นเก็บสินค้า staining แนวนอนดีขั้นตอนการย้อมสี 1. เพิ่มประมาณ 1 ml. Flagella ติดโซลูชัน (หนึ่งตัวปล่อยเต็ม) เลอะเปื้อน และอนุญาตให้ติด 10-15 นาที ไม่ควรอนุญาตให้โซลูชันเป็นไหลอยู่นอกพื้นที่ waxed 2. น้ำท่วมปิดคราบที่เพิ่มน้ำประปาไปยังภาพนิ่งในขณะที่มันยังคงอยู่บนชั้น ปลายภาพนิ่งก่อนนี้เสร็จ 3. ท่อระบายน้ำ และน้ำท่วมภาพนิ่งกับ carbol fuchsin หนึ่งนาที ล้าง ด้วยน้ำท่วม ท่อระบายน้ำและอากาศแห้ง ไม่ต้องทำลายอีตรวจสอบภาพนิ่ง 1. ด้วยตาเปล่าระบุบรรทัดที่ทำ โดยการปล่อยมันวิ่งลงภาพนิ่ง 2. วางภาพนิ่งที่ขอบของการรันภายใต้วัตถุประสงค์ 3. เน้นขอบของที่รันภายใต้พลังงานต่ำ เป็นน้ำมัน และตรวจสอบโดยใช้วัตถุประสงค์แช่น้ำมัน 4. ระบุเซลล์ as distinguished from ย้อมและเศษซึ่งจะยึดติดกับภาพนิ่งเนื่องจาก mordant เซลล์จะมีขนาดเล็กก้าน และมีเค้าร่างปกติ พวกเขาจะอุดมสมบูรณ์มากใกล้ต่ำสุดของการเรียกใช้ และอาจดูใหญ่กว่าปกติ เพราะการ mordant 5. เมื่อเซลล์จะระบุ ตามขอบของรัน ตรวจสอบเซลล์จนบางพบ มี flagella ที่แนบ Flagella มากยาวกว่าเซลล์ และมักจะมีลักษณะเหมือนเส้นขนอ่อน 6. ดาว ควรจะเซลล์อยู่ซึ่งจะแยกพอเพื่อพิจารณาการจัดเรียง flagella และ ลี จำนวน flagella ต่อเซลล์ unequivocally 7. วาดเซลล์และ flagella ของพวกเขา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ขั้นตอน: เอ การระงับแบคทีเรีย1 จากวัฒนธรรมเอียงวุ้น: ระงับ loopful ของแบคทีเรียใน 2 มิลลิลิตรน้ำกลั่นที่จะได้รับการระงับสีเหลือบ. ข อนุญาตให้ระงับที่จะยืนสงบเป็นเวลา 15 ถึง 20 นาทีในขณะที่กำลังสร้างใหม่ flagella และขยาย. บี ภาพนิ่ง1 เลือกภาพนิ่งใหม่หรือ unscratched. 2 สไลด์สะอาดทำความสะอาดผงเป็นผู้กำกับ. 3 เปลวไฟหนึ่งของภาพนิ่งและอนุญาตให้เย็น. 4 ทำให้เส้นขี้ผึ้งหนักในด้าน flamed ตามขอบของปลายด้านหนึ่งพร้อมทั้งสองฝ่ายภายในเวลาประมาณหนึ่งนิ้วของปลายอีกด้านหนึ่งและทั่วสไลด์ให้เสร็จสมบูรณ์สี่เหลี่ยมผืนผ้า จับภาพนิ่งโดยสิ้นป้ายเท่านั้น บรรทัดขี้ผึ้งสร้างกำแพงเพื่อให้สระว่ายน้ำของคราบที่จะล้อมรอบเซลล์ในช่วง 15-15 นาทีระยะเวลาการย้อมสี. ซี การจัดทำป้าย1 ระงับการจัดการอย่างระมัดระวังลบ loopful ขนาดใหญ่ของการระงับและวางไว้ที่ปลายด้านหนึ่งของพื้นที่สี่เหลี่ยม. 2 เอียงสไลด์จะอนุญาตให้มีการระงับในการทำงานลงไปที่ส่วนอื่น ๆ ของภาพนิ่ง ถ้าลดลงล้มเหลวในการทำงานลดลงเพิ่มอีก. 3 อากาศแห้งภาพยนตร์ ไม่ร้อน. 4 วางภาพนิ่งบนชั้นวางในแนวนอนการย้อมสี. D. ขั้นตอนการย้อมสี1 เพิ่มประมาณ 1 มล. ของการแก้ปัญหาคราบ flagella (หนึ่งหยดเต็ม) เพื่อ smear และอนุญาตให้คราบประมาณ 10-15 นาที การแก้ปัญหาไม่ควรได้รับอนุญาตให้ไหลออกนอกพื้นที่แว็กซ์. 2 น้ำท่วมออกคราบโดยการเพิ่มน้ำประปาไปยังภาพนิ่งในขณะที่มันยังคงอยู่บนชั้น อย่าปลายสไลด์ก่อนหน้านี้จะทำ. 3 ท่อระบายน้ำน้ำท่วมและภาพนิ่งที่มีฟุ carbol เป็นเวลาหนึ่งนาที ล้างออกจากน้ำท่วม ท่อระบายน้ำและอากาศแห้ง อย่าลบ. อี การตรวจสอบของภาพนิ่ง1 ด้วยตาเปล่าระบุสายที่ทำโดยลดลงในขณะที่มันวิ่งลงสไลด์. 2 ตำแหน่งสไลด์เพื่อให้ขอบของการทำงานที่อยู่ภายใต้วัตถุประสงค์. 3 มุ่งเน้นไปที่ขอบของการทำงานภายใต้การใช้พลังงานต่ำเช่นน้ำมันและตรวจสอบได้โดยใช้วัตถุประสงค์แช่น้ำมัน. 4 ระบุเป็นเซลล์ที่แตกต่างจากสีย้อมและเศษซึ่งจะเป็นไปตามสไลด์เพราะประชดประชัน เซลล์จะเป็นแท่งขนาดเล็กและมีโครงร่างปกติ พวกเขาจะอุดมสมบูรณ์มากขึ้นใกล้ระดับล่างสุดของการทำงานและอาจดูมีขนาดใหญ่กว่าปกติเพราะประชดประชันได้. 5 เมื่อเซลล์จะมีการระบุติดตามตามขอบของการดำเนินการตรวจสอบเซลล์จนบางคนจะพบกับ flagella ที่แนบมา flagella มีมากนานกว่าเซลล์และมักจะมีลักษณะเหมือนขนลม. 6 จะเป็นการดีที่เซลล์ควรจะอยู่ที่จะแยกพอที่จะตรวจสอบอย่างแจ่มแจ้งจัด flagella และสำหรับ Pseudomonas จำนวน flagella ต่อเซลล์. 7 วาดเซลล์และ flagella ของพวกเขา