4. DiscussionIn this study, binary

4. Discussion
In this study, binary plasmids pBC-hygro-GFP were transformed into F. oxysporumby the PEG-mediated transformation technique and E. coli-mediated methods succeeded in F.
oxysporum B-resistant transformants.
In the F.oxysporum transformation, the size of prepared protoplast is very important for protoplast transformation, too big or too small cannot reach the transformation requirements.1.2·108 spore/ml is the optimal concentration. The fluorescence expression of transformants, the GFP expression was not detectable in any of the hygromycin resistant pBC-hygro-GFP transformants, despite GFP DNA has been ampli-
fied by PCR. Fluorescence expression in different transformants is inconsistent. With is introducing the exogenous gene GFP, this difference may be due to the GFP insert, and
insert the copy number. In this experiment, it was observed that GFP marked transformants of F. oxysporumline had a very weak fluorescence expression. The conidiums without significant expression was outotheca isolated to detect the fluorescence expression of col- ony growing out of a single conidium. It was discovered that the hyphae of colony grown out of cultured conidium without significant fluorescence expression were able to express fluorescence normally, which was deduced that the weak fluorescence expression of conidium was caused by the small number of protoplasm, as little GFP protein was expressed. What could be known from the literature was that after marking fungus with GFP, there was a difference in GFP for conidium of different fungi. Some might have significant green fluorescence expression such as the conidium of Pyreno Phora triticirepentis and Cochliobolus Sativus(Prayitno et al., 1999). The difference might be due to the different protoplasm and protein contents in the conidium of different fungi, for only the protoplast of higher content and water could enable the stimulated blue light to pass through the conidium easily to get GFP protein of inner expression stimulated. We have also used successful GFP expression in F. oxysporumto extend the range of available promoters for use in fungus transformation, and in doing so we have shown that the gfp gene can express stably in the F.oxysporumstrain. The vector we have developed will facilitate

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

4. สนทนาในการศึกษานี้ pBC plasmids นารี-hygro-GFP ถูกเปลี่ยนเป็นเอฟ oxysporumby PEG mediated แปลงเทคนิคและวิธี mediated E. coli สำเร็จแล้วนี่oxysporum transformants B ทน ในการแปลง F.oxysporum ขนาดของ protoplast เตรียมพร้อมเป็นสิ่งสำคัญมากสำหรับการแปลง protoplast มากเกินไป หรือเล็กเกินไปไม่สามารถเข้าถึงการแปลง requirements.1.2·108 สปอร์/มลมีความเข้มข้นสูงสุดได้ มี GFP นิพจน์นิพจน์ fluorescence ของ transformants ไม่ตรวจใน transformants pBC hygro GFP ทน hygromycin แม้มีดีเอ็นเอ GFP ได้ ampli-ฟอง โดย PCR นิพจน์ fluorescence ใน transformants ต่าง ๆ ไม่สอดคล้องกัน มีแนะนำยีนบ่อย GFP ความแตกต่างนี้อาจเป็น เพราะแทรก GFP และแทรกหมายเลขสำเนา ในการทดลองนี้ มันถูกตรวจสอบว่า เครื่อง transformants ของ F. oxysporumline GFP มีนิพจน์ fluorescence อ่อนมาก Conidiums โดยนิพจน์สำคัญแยกต่างหากเพื่อตรวจสอบนิพจน์ fluorescence คอลัมน์-ony เติบโตจาก conidium เดียว outotheca เป็นการค้นพบว่า hyphae ของอาณานิคมที่เติบโตขึ้นจากอ่าง conidium โดยนิพจน์ fluorescence สำคัญก็สามารถแสดง fluorescence ปกติ ซึ่งมี deduced ว่า นิพจน์ fluorescence อ่อนแอของ conidium ที่เกิดจากโพรโทพลาสซึม จำนวนเล็กน้อย GFP โปรตีนถูกแสดง อะไรไม่ทราบจากวรรณคดีไม่ว่า หลังจากทำเครื่องหมายเห็ดรา มี GFP มีต่าง GFP สำหรับ conidium ของเชื้อราแตกต่างกัน บางคนอาจมี fluorescence สำคัญสีเขียวอย่าง conidium น่า triticirepentis Pyreno Phora Cochliobolus Sativus(Prayitno et al., 1999) ความแตกต่างอาจเป็นโพรโทพลาสซึมที่แตกต่างกันและโปรตีนเนื้อหา conidium ของเชื้อราต่าง ๆ สำหรับเฉพาะ protoplast ของเนื้อหาสูง และน้ำสามารถเปิดใช้งานไฟสีขาวกระตุ้นผ่าน conidium ง่าย ๆ จะได้รับโปรตีน GFP ภายในนิพจน์ขาวกระตุ้น เรายังได้ใช้ประสบความสำเร็จ GFP นิพจน์ใน F. oxysporumto ขยายช่วงของการก่อการพร้อมใช้งานสำหรับใช้ ในแปลงเห็ดรา และทำให้เราได้แสดงให้เห็นว่า ยีน gfp สามารถแสดง stably ใน F.oxysporumstrain เวกเตอร์ที่เราพัฒนาจะอำนวยความสะดวก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

4 . การอภิปราย
ในการศึกษานี้ไบนารี ) PBC hygro GFP ถูกเปลี่ยนเป็น F . oxysporumby หมุดโดยเทคนิคการแปลง และ E . coli โดยวิธีประสบความสำเร็จใน F . oxysporum
b-resistant transformants .
ใน f.oxysporum แปลง ขนาดของโปรโตพลาสต์ที่เตรียมไว้เป็นสิ่งสำคัญมากสำหรับโปรโตพลาสต์ที่การแปลงมีขนาดใหญ่เกินไปหรือเล็กเกินไปไม่สามารถเข้าถึงการเปลี่ยนแปลงความต้องการ 1.2 ด้วย 108 สปอร์ / มิลลิลิตร เป็นปริมาณที่เหมาะสมที่สุด เรืองแสงด้วยการแสดงออกของ GFP พลาสมิด , การแสดงออกที่ไม่พบในใด ๆของยีนต้านยา hygromycin ทน PBC hygro GFP พลาสมิดดีเอ็นเอ แม้จะได้รับ ampli GFP -
fied โดย PCR โดยการแสดงออกในพลาสมิดที่แตกต่างกันจะไม่สอดคล้องกันกับแนะนำยีน GFP ภายนอก ความแตกต่างนี้อาจเกิดจากการ GFP แทรกและ
ใส่คัดลอกหมายเลข ในการทดลองนี้ พบว่าพลาสมิดของ GFP ที่มีเครื่องหมาย F oxysporumline ท่าทางเรืองแสงอ่อนมาก ที่สำคัญ conidiums โดยไม่แสดงออก outotheca แยกการตรวจจับการแสดงออกของคอลัมน์ - ony เติบโตออกของโคนิเดียมเดี่ยวพบว่าเส้นใยของอาณานิคมที่ปลูกจากเลี้ยงโคนิเดียมโดยไม่สำคัญการการแสดงออกสามารถแสดงการเรืองแสงปกติ ซึ่งอนุมานว่าอ่อนแอ การแสดงออกของโคนิเดียมเกิดจากจำนวนเล็ก ๆของโปรโตพลาสซึม เป็นโปรตีน GFP น้อยถูกแสดงออกมา สิ่งที่อาจจะรู้จักจากวรรณกรรม คือ เชื้อราที่มี GFP หลังเครื่องหมาย ,มีความแตกต่างใน GFP สำหรับโคนิเดียมของเชื้อราต่าง ๆ บางคนอาจจะเรืองแสงสีเขียวที่สำคัญการแสดงออกเช่นโคนิเดียมของ pyreno phora และสร้าง triticirepentis cochliobolus ( prayitno et al . , 1999 ) ความแตกต่างอาจเนื่องจากความแตกต่างของปริมาณโปรตีนในเซลล์ของสิ่งมีชีวิต และโคนิเดียมของเชื้อราต่าง ๆเพียงจำนวนของปริมาณน้ำที่สูงขึ้นและจะช่วยให้กระตุ้นสีฟ้าผ่านโคนิเดียมได้อย่างง่ายดายได้รับโปรตีน GFP ในการแสดงออกกระตุ้น นอกจากนี้เรายังได้ใช้ GFP การแสดงออกในความ . oxysporumto ขยายช่วงของโปรโมเตอร์สามารถใช้ในการแปลงเชื้อรา , และในการทำดังนั้นเราแสดงว่ายีน GFP สามารถแสดงอย่างถาวรใน Foxysporumstrain . เวกเตอร์ที่เราได้พัฒนาขึ้นจะช่วย