at which you might consider reading more slowly. I completely
understand why someone might be reluctant to embark on studies
with minimally disturbed synchronous cells if it is believed
that the baby machine device is too complex to construct and
use. In my biased opinion, this notion is inaccurate. The baby
machine process for generating synchronous cells is remarkably
simple to perform.
What is actually needed to get minimally disturbed synchronous
cells? Nothing very special. In fact, if you would like
to try the technique, or perform a few experiments, or test some
cells, it is very easy to construct and operate a minimalistic
but functional baby machine. The primary requirements are the
following:
(1) A 150-mm ID porcelain Buchner funnel.
(2) A 142-mm diameter, 0.22-µm Millipore MF membrane filter,
or equivalent.
(3) A mesh screen to place underneath the membrane filter.
(4) A means to hold the membrane filter in place in the funnel.
Figure 4 shows the basic set-up and procedure using a Buchner
funnel with a 150-mm diameter perforated base plate (Scientific
Equipment of Houston). To prepare the funnel as shown
in Figure 4A, the membrane filter must be sealed to the bottom
plate of the funnel. This is most easily accomplished by first running
a narrow bead of biologically safe silicone sealant (such as
Factor II A-4100 or aquarium-safe silicone) around the bottom
of the funnel just inside the 142-mm circumference of a membrane
filter. Next, place the mesh screen loosely inside the bead. I
recommend using a 120-mm diameter screen cut from a Buchner
polyethylene disc (Avogadro’s Lab Supply, Inc.). Lastly, place the
membrane filter on top of the bead and press down on the edge.
I have used the top portion of 130-mm two-piece polypropylene
Buchner funnel for this purpose (Avogadro’s Lab Supply, Inc.),
but any ring of that approximate diameter should work well.
After curing, this procedure yields a perfect seal, produces a surface
of about 120 mm in diameter for attachment of the cells, and
enables culture medium to flow uniformly across the membrane
after inversion of the apparatus. The seal is easily removed with a
razor blade for the next experiment.
To perform the procedure, a total of 0.5 to 1.0 × 1010 bacteria
growing in 100–200 ml of minimal defined medium are filtered
slowly (1–2 min) under vacuum onto the membrane filter at
the appropriate temperature in a warm room or any convenient
table-top incubator (Figure 4A). The entire filter holder is then
inverted (Figure 4B), culture medium is poured into the top of
the inverted holder (about 300 ml), and tubing from a reservoir
of medium is connected to the stem of the funnel with a stopper.
To produce a sealed system, the tubing should be attached
to a narrow glass or rigid plastic tube installed in a hole bored
through a stopper of appropriate size, as shown. It is helpful to
have most of the stem of the funnel cut off, as indicated in the
figure, to ease pouring of the medium and connection of the stopper.
A peristaltic pump can be used to regulate the rate of medium
flow into the apparatus after inversion. It should be set at about
15 ml/min for a few minutes to flush off weakly attached cells and
then reduced to 2 ml/min thereafter. Alternatively, if you wish to
perform tests before obtaining a pump, a reservoir bottle with
ที่คุณอาจจะพิจารณาการอ่านช้า ฉันสมบูรณ์เข้าใจว่าทำไมบางคนอาจจะลังเลที่จะเริ่มต้นศึกษารบกวนด้วยน้อยที่สุดแบบเซลล์ถ้ามันเชื่อที่เครื่องลูกเครื่องซับซ้อนเกินไปที่จะสร้างและใช้ ในความเห็นของผม มีอคติ ความคิดนี้ไม่ถูกต้อง ทารกกระบวนการเครื่องจักรสำหรับผลิตเซลล์แบบเป็นอย่างน่าทึ่งง่ายที่จะแสดงมีอะไรต้องการให้น้อยที่สุดรบกวนในเวลาเดียวกันเซลล์ ไม่มีอะไรพิเศษมาก ในความเป็นจริง , ถ้าคุณต้องการลองใช้เทคนิค หรือดำเนินการไม่กี่การทดลอง หรือทดสอบเซลล์ , มันเป็นเรื่องง่ายที่จะสร้างและใช้งานเรียบง่ายแต่หน้าที่เด็กเครื่อง ความต้องการหลักคือต่อไปนี้ :( 1 ) 150 mm ID เครื่องเคลือบดินเผากรวยกรองบุชเนอร์ .( 2 ) เส้นผ่าศูนย์กลาง 7 มม. , 0.22 มิลลิ - µ M MF เยื่อกรองหรือเทียบเท่า( 3 ) หน้าจอ ตาข่ายวางใต้ไส้กรองเมมเบรน( 4 ) วิธีการยึดแผ่นกรองในสถานที่ในช่องทางรูปที่ 4 แสดงการตั้งค่าพื้นฐานและขั้นตอนการใช้บุชเนอร์กรวยมีเส้นผ่าศูนย์กลาง 150 มม. จานฐานเจาะรู ( ชื่อวิทยาศาสตร์อุปกรณ์ของ Houston ) เตรียมช่องทางที่แสดงในรูปที่ 4a , ไส้กรองเมมเบรน ต้องถูกผนึกไปด้านล่างจานของกรวย นี้เป็นง่ายที่สุดได้ โดยก่อนวิ่งลูกปัดของกาวซิลิโคนแคบชีวภาพที่ปลอดภัย ( เช่นปัจจัยที่ 2 a-4100 หรือตู้ปลา ซิลิโคน ปลอดภัย ) อยู่ด้านล่างของกรวยใน 142 มม. เส้นรอบวงของเมมเบรนตัวกรอง ต่อไปสถานที่จอประกบหลวมในลูกปัด ฉันแนะนำให้ใช้ 120 มม. เส้นผ่าศูนย์กลางหน้าจอตัดจาก บุชเนอร์แผ่นพลาสติก ( โวกาโดรเป็นแล็บซัพพลาย Inc . ) สุดท้ายที่เยื่อกรองที่ด้านบนของลูกปัดและกดลงบนขอบฉันได้ใช้ส่วนบนของโพรพิลีนทูพีซ 130 มม.กรวยบุชเนอร์เพื่อจุดประสงค์นี้ ( อะโวกาโดรเป็นแล็บซัพพลาย Inc . )แต่แหวนเส้นผ่าศูนย์กลางประมาณว่าน่าจะใช้งานได้ดีหลังจากบ่ม ขั้นตอนนี้สามารถประทับตราสมบูรณ์ คมชัด ผิวของ 120 มม. สำหรับสิ่งที่แนบมาของเซลล์ และช่วยให้วัฒนธรรมกลางไหลอย่างสม่ำเสมอผ่านเมมเบรนหลังจากการผกผันของเครื่อง ผนึกถูกลบออกได้อย่างง่ายดายด้วยใบมีดโกนสำหรับการทดลองต่อไปแสดงขั้นตอนทั้งหมดของ 0.5 ถึง 1.0 × 1010 แบคทีเรียเติบโตใน 100 – 200 มิลลิลิตร ที่กำหนดจะถูกกรองน้อยกลางช้า ( 1 – 2 นาที ) ภายใต้สูญญากาศบนแผ่นกรองที่อุณหภูมิที่เหมาะสมในห้องอุ่นๆ หรือที่สะดวกใด ๆตู้บนโต๊ะ ( รูปที่ 4 ) ผู้ถือกรองทั้งหมดแล้วแบบตัวเลข ( 4B ) อาหารเลี้ยงเชื้อเทลงในด้านบนของรถยึด ( 300 มล. ) และท่อจากอ่างเก็บน้ำกลางที่เชื่อมต่อกับก้านกับกรวยกับกันชนผลิตระบบการปิดผนึกท่อควรจะแนบให้แคบแก้วหรือหลอดพลาสติกแข็งที่ติดตั้งในรูเบื่อผ่านจุกขนาดเหมาะสม ดังรูป เป็นประโยชน์มีมากของก้านกรวยตัด ตามที่ระบุในรูป , บรรเทาเทของสื่อและการเชื่อมต่อของกันชนปั๊ม peristaltic สามารถใช้เพื่อควบคุมอัตรากลางของไหลเข้าไปในเครื่อง หลังจากการกลับกัน มันควรจะตั้งค่าที่เกี่ยวกับ15 มิลลิลิตร / นาทีไม่กี่นาทีล้างออกบ้างนิดๆหน่อยๆ ติดเซลล์และแล้วลดเหลือ 2 มล. / นาที หลังจากนั้น อีกวิธีหนึ่งคือ ถ้าคุณต้องการดำเนินการทดสอบก่อนรับปั๊ม , ขวดที่มีอ่างเก็บน้ำ
การแปล กรุณารอสักครู่..
