Although not otherwise discussed in

Although not otherwise discussed in this guide, one should also be aware that enzymes can denature over time, especially if they are very dilute, and the products of some reactions can inhibit the enzyme. Indeed there are other possible reasons for non-linear behaviour but it is usually relatively easy to find the linear range by trial and error using serial dilutions of the enzyme as described above.
Assay time and temperature
These parameters can also influence the linear range as they affect the rate of substrate conversion. For example, an assay may be linear after 15 min, but at 60 minutes too much substrate may have been consumed. In this situation you would have to reduce the amount of enzyme in order to run your assay for 60 minutes. The same considerations apply to assay temperature as it can also affect the rate of reaction.
Most people adopt an assay time of somewhere between 15 min and 60 min. Very short times (e.g. 2 min) are to be avoided because a slight delay in stopping the reaction will lead to a significant error in calculations of activity. It is important to ensure that reagents stored in a fridge or freezer have equilibrated to the correct temperature before use, and this is especially important if you have a relatively short assay time.
Assay volume/sensitivity
From a practical perspective the assay volume is determined/limited by the consumable item that you use for your assays (e.g. cuvettes, tubes, or microplates). The signal for most enzyme assays is proportional to the assay volume and attempts to miniaturise the

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แม้ว่าจะไม่ กล่าวถึงในคู่มือนี้ หนึ่งยังควรทราบว่า เอนไซม์สามารถ denature ตลอดเวลา โดยเฉพาะอย่างยิ่งถ้าพวกเขาเจือจางมาก และผลิตภัณฑ์ของบางปฏิกิริยาสามารถยับยั้งเอนไซม์นี้ แน่นอนมีเหตุผลพฤติกรรมไม่เชิงเส้นอื่น ๆ ได้ แต่ก็มักจะค่อนข้างง่ายที่จะหาช่วงเชิงเส้น โดยการลองผิดลองถูกโดยใช้เจือจาง serial ของเอนไซม์อธิบายข้างต้นวิเคราะห์เวลาและอุณหภูมิพารามิเตอร์เหล่านี้สามารถยังมีอิทธิพลต่อช่วงเชิงเส้น ตามที่ส่งผลต่ออัตราการแปลงของพื้นผิว เช่น การทดสอบอาจจะเชิงเส้นหลังจาก 15 นาที แต่ที่ 60 นาที พื้นผิวมากเกินไปอาจมีการใช้ไปแล้ว ในสถานการณ์นี้ คุณจะต้องลดปริมาณของเอนไซม์เพื่อเรียกใช้การทดสอบ 60 นาที การพิจารณาเดียวกันกับ assay อุณหภูมิอาจมีผลต่ออัตราของปฏิกิริยาคนส่วนใหญ่ใช้เวลาทดสอบไหนสักแห่งระหว่าง 15 นาทีและ 60 นาทีมาก เวลาสั้น (เช่น 2 นาที) จะหลีกเลี่ยงเนื่องจากความล่าช้าเล็กน้อยในการหยุดปฏิกิริยาจะนำไปสู่ข้อผิดพลาดสำคัญในการคำนวณของกิจกรรม มันเป็นสิ่งสำคัญเพื่อให้แน่ใจว่า มี equilibrated สารรีเอเจนต์ที่เก็บไว้ในตู้เย็นหรือตู้แช่แข็งอุณหภูมิถูกต้องก่อนการใช้ และนี้เป็นสิ่งสำคัญโดยเฉพาะอย่างยิ่งถ้าคุณมีเวลาทดสอบที่ค่อนข้างสั้นวิเคราะห์ปริมาณ/ความไวแสงจากมุมมองจริง ปริมาณ assay เป็นจำกัดกำหนด โดยสินค้าบริโภคที่คุณใช้สำหรับ assays ของคุณ (เช่นคิวเวต หลอด หรือ microplates) สัญญาณสำหรับส่วนใหญ่เอนไซม์ assays เป็นสัดส่วนกับปริมาณทดสอบ และพยายามที่จะ miniaturise การ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แม้ว่าจะไม่ได้กล่าวถึงเป็นอย่างอื่นในคู่มือนี้หนึ่งยังควรทราบว่าเอนไซม์สามารถลบล้างเมื่อเวลาผ่านไปโดยเฉพาะอย่างยิ่งถ้าพวกเขาจะเจือจางมากและผลิตภัณฑ์ของปฏิกิริยาบางอย่างสามารถยับยั้งเอนไซม์ อันที่จริงมีเหตุผลที่เป็นไปได้อื่น ๆ สำหรับพฤติกรรมที่ไม่เป็นเส้นตรง แต่ก็มักจะเป็นเรื่องง่ายที่จะหาช่วงเชิงเส้นโดยการทดลองและข้อผิดพลาดโดยใช้เจือจางอนุกรมของเอนไซม์ที่อธิบายข้างต้น.
เวลา Assay และอุณหภูมิ
พารามิเตอร์เหล่านี้ยังสามารถมีอิทธิพลต่อช่วงเชิงเส้นที่พวกเขา ส่งผลกระทบต่ออัตราการแปลงสารตั้งต้น ยกตัวอย่างเช่นการทดสอบอาจจะเป็นเส้นตรงหลังจาก 15 นาที แต่ใน 60 นาทีพื้นผิวมากเกินไปอาจจะได้รับการบริโภค ในสถานการณ์เช่นนี้คุณจะต้องลดปริมาณของเอนไซม์เพื่อใช้ทดสอบของคุณสำหรับ 60 นาที การพิจารณาเดียวกันนำไปใช้กับการทดสอบอุณหภูมิในขณะที่มันยังสามารถส่งผลกระทบต่ออัตราการเกิดปฏิกิริยา.
คนส่วนใหญ่นำมาใช้เวลาทดสอบของที่ไหนสักแห่งระหว่าง 15 นาทีและ 60 นาที เวลาที่สั้นมาก (เช่น 2 นาที) ที่จะหลีกเลี่ยงเพราะความล่าช้าเล็กน้อยในการหยุดการเกิดปฏิกิริยาจะนำไปสู่ความผิดพลาดอย่างมีนัยสำคัญในการคำนวณของกิจกรรม มันเป็นสิ่งสำคัญเพื่อให้แน่ใจว่าน้ำยาที่เก็บไว้ในตู้เย็นหรือช่องแช่แข็งได้ equilibrated อุณหภูมิที่ถูกต้องก่อนการใช้งานและนี้เป็นสิ่งสำคัญโดยเฉพาะอย่างยิ่งถ้าคุณมีเวลาทดสอบที่ค่อนข้างสั้น.
ปริมาณ Assay / ความไว
จากมุมมองของการปฏิบัติปริมาณการทดสอบจะถูกกำหนด / จำกัด โดยรายการที่สิ้นเปลืองที่คุณใช้สำหรับการวิเคราะห์ของคุณ (เช่น cuvettes หลอดหรือ microplates) สัญญาณสำหรับส่วนมากของเอนไซม์เป็นสัดส่วนกับปริมาณการทดสอบและความพยายามที่จะ miniaturise

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ถึงแม้ว่าไม่หรือกล่าวถึงในคู่มือนี้ หนึ่งควรทราบว่าเอนไซม์สามารถนมตลอดเวลา โดยเฉพาะอย่างยิ่งถ้าพวกเขาจะเจือจางและผลิตภัณฑ์ของปฏิกิริยาสามารถยับยั้งเอนไซม์ แน่นอนมีสาเหตุที่เป็นไปได้อื่น ๆสำหรับพฤติกรรมไม่เชิงเส้นแต่มันมักจะค่อนข้างง่ายที่จะหาช่วงเชิงเส้นโดยการทดลองและข้อผิดพลาดการใช้อนุกรมเจือจางของเอนไซม์ตามที่อธิบายไว้ข้างต้นอุณหภูมิและเวลาการทดสอบพารามิเตอร์เหล่านี้สามารถมีอิทธิพลต่อช่วงเชิงเส้นเช่นที่พวกเขาส่งผลกระทบต่ออัตราการแปลงวัตถุดิบ ตัวอย่างเช่นใช้อาจเป็นเส้นตรงหลังจาก 15 นาที แต่เวลา 60 นาทีใช้มากเกินไปก็อาจได้ใช้ ในสถานการณ์นี้คุณจะต้องลดปริมาณของเอนไซม์เพื่อใช้วิเคราะห์ของคุณเป็นเวลา 60 นาที การพิจารณาเดียวกันใช้เพื่อทดสอบอุณหภูมิมันยังสามารถส่งผลกระทบต่ออัตราของปฏิกิริยาคนส่วนใหญ่ยอมรับใช้เวลาอยู่ระหว่าง 15 นาทีและ 60 นาที เวลาที่สั้นมาก ( เช่น 2 นาที ) จะต้องหลีกเลี่ยงเนื่องจากความล่าช้าเล็กน้อยในการหยุดปฏิกิริยาจะนำไปสู่ข้อผิดพลาดที่สำคัญในการคำนวณของกิจกรรม มันเป็นสิ่งสำคัญเพื่อให้แน่ใจว่าสารเคมีที่ถูกเก็บไว้ในตู้เย็นหรือช่องแช่แข็งมี equilibrated กับอุณหภูมิที่ถูกต้องก่อนใช้งาน และนี้เป็นสิ่งสำคัญโดยเฉพาะอย่างยิ่งถ้าคุณมีเวลาทดสอบที่ค่อนข้างสั้นปริมาณ / ความไวต่อจากมุมมองในทางปฏิบัติ ( ปริมาณจะถูกกำหนด / จำกัด โดยสินค้าวัสดุสิ้นเปลืองที่คุณใช้วิธีของคุณ ( เช่นคิวเวทท์ หลอด หรือ microplates ) สัญญาณการใช้เอนไซม์ส่วนใหญ่จะเป็นสัดส่วนกับปริมาณที่ใช้ และพยายามทำให้เล็กลง