A chitinolytic actinomycete was iso

A chitinolytic actinomycete was isolated from agricultural soil in the centre of Poland. It was identified as Streptomyces rimosus. Identification was based on standard biochemical tests and on 16S rRNA gene sequence analysis. The degradation of chitinous substances (shrimp shell waste, crab chitin powder and chitosan) was examined on the basis of oxygen consumption by applying OxiTop (WTW). The enzyme catalyzed the hydrolysis of the disaccharide 4-MU-(GlcNAc)3 most efficiently and was therefore classified as an endochitinase. The chitinase was purified from culture medium by fractionation with ammonium sulfate and affinity chromatography. The purified proteins were subjected to identification by mass spectrometry. Based on analysis of the resultant fragments of the amino acid sequence of chitinase produced by the examined bacteria, degenerate primers for PCR were designed. The results of our research prove that the substances which are metabolised by S. rimosus the most efficiently are chitosan and the shrimp shell waste. Chitinolytic activity examination showed that shrimp shell waste was the finest inducer of chitinase synthesis. The molecular mass of the purified enzyme was 63 kDa. The highest activity of chitinase was obtained at the temperature of 40°–45 °C. Optimal pH for chitinase activity was 7.0. The activity of the purified chitinase was stabilized by Mg2+ ions. The activity of the enzyme was inhibited by Hg2+ and Pb2+ ions. Chitinase inhibited the growth of the fungal phytopathogens Fusarium solani and Alternaria alternata. The nucleotide sequence of the amplified gene fragment proved to be similar to the sequence of chitinase-encoding genes of the glycoside hydrolases family 18.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Chitinolytic actinomycete ที่แยกจากดินทางการเกษตรในประเทศโปแลนด์ มันก็ระบุไว้เป็น Streptomyces rimosus รหัสถูกใช้ทดสอบมาตรฐานชีวเคมี และยีน 16S rRNA วิเคราะห์ สลายตัวของสาร chitinous (ขยะเปลือกกุ้ง ปูผงไคทิน และไคโตซาน) ถูกตรวจสอบ โดยการใช้ออกซิเจน โดยใช้ OxiTop (WTW) เอนไซม์นี้ catalyzed ไฮโตรไลซ์ของไดแซ็กคาไรด์ 4 -หมู- (GlcNAc) 3 ได้อย่างมีประสิทธิภาพมากที่สุด และถูกจัดประเภทเป็น endochitinase เป็นดังนั้น Chitinase ไม่บริสุทธิ์จากสื่อวัฒนธรรม โดยคุณสมบัติของสารแอมโมเนียซัลเฟตและ chromatography ความสัมพันธ์ โปรตีนบริสุทธิ์อยู่ภายใต้การระบุ โดยรเมท ตามการวิเคราะห์ชิ้นส่วนผลแก่ของลำดับกรดอะมิโนของ chitinase ผลิต โดยแบคทีเรียกล่าวถึง ไพรเมอร์ degenerate สำหรับ PCR ถูกออกแบบมา ผลการวิจัยของเราพิสูจน์ว่า ไคโตซานเป็นสารที่มี metabolised โดย S. rimosus ได้อย่างมีประสิทธิภาพมากที่สุด และเสียเปลือกกุ้ง ตรวจสอบกิจกรรมของ Chitinolytic แสดงให้เห็นว่า ขยะเปลือกกุ้งเป็น inducer ที่ดีที่สุดของการสังเคราะห์ chitinase มวลโมเลกุลของเอนไซม์บริสุทธิ์ 63 kDa กิจกรรมสูงสุดของ chitinase กล่าวที่อุณหภูมิ 40° – 45 องศาเซลเซียส ค่า pH ที่เหมาะสมสำหรับกิจกรรม chitinase ได้ 7.0 กิจกรรมของ chitinase บริสุทธิ์ไม่เสถียร โดย Mg2 + ประจุ กิจกรรมของเอนไซม์ถูกห้าม โดย Hg2 + และ Pb2 + ประจุ Chitinase ห้ามการเจริญเติบโตของ phytopathogens เชื้อรา Fusarium solani Alternaria alternata ลำดับนิวคลีโอไทด์ของส่วนยีนเอาต์พิสูจน์ให้คล้ายกับลำดับของรหัส chitinase ยีนของ glycoside hydrolases 18

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

actinomycete chitinolytic ที่แยกได้จากดินการเกษตรในใจกลางของโปแลนด์ มันถูกระบุว่าเป็น Streptomyces rimosus บัตรประจำตัวอยู่บนพื้นฐานของการทดสอบทางชีวเคมีมาตรฐานและ 16S rRNA ยีนวิเคราะห์ลำดับ การย่อยสลายของสาร chitinous (ที่เสียกุ้งเปลือกปูผงไคตินไคโตซานและ) ได้ตรวจสอบบนพื้นฐานของการใช้ออกซิเจนโดยใช้ OxiTop (WTW) เอนไซม์เป็นตัวเร่งการย่อยสลายของไดแซ็กคาไรด์ 4 MU- นี้ (GlcNAc) 3 มีประสิทธิภาพมากที่สุดและได้รับการจัดจึงเป็น endochitinase ไคติเนสบริสุทธิ์จากอาหารเลี้ยงเชื้อโดยแยกกับแอมโมเนียมซัลเฟตและสารสัมพันธ์ที่ใกล้ชิด โปรตีนบริสุทธิ์ถูกยัดเยียดให้ระบุตัวตนของมวลสาร จากการวิเคราะห์ของชิ้นส่วนผลของลำดับกรดอะมิโนของไคติเนสที่ผลิตโดยเชื้อแบคทีเรียที่ตรวจสอบไพรเมอร์เลวสำหรับ PCR ได้รับการออกแบบ ผลการวิจัยของเราแสดงให้เห็นว่าสารที่มี metabolised โดย S. rimosus มีประสิทธิภาพมากที่สุดที่มีไคโตซานและของเสียเปลือกกุ้ง การตรวจสอบกิจกรรมไคตินแสดงให้เห็นว่าขยะเปลือกกุ้งเป็น inducer ที่ดีที่สุดของการสังเคราะห์ไคติเนส มวลโมเลกุลของเอนไซม์บริสุทธิ์เป็น 63 กิโลดาลตัน กิจกรรมสูงสุดของไคติเนสได้ที่อุณหภูมิ 40 องศา -45 องศาเซลเซียส พีเอชที่เหมาะสมที่สุดสำหรับกิจกรรมไคติเนสเป็น 7.0 กิจกรรมของไคติเนสบริสุทธิ์มีเสถียรภาพโดยไอออน Mg2 + กิจกรรมของเอนไซม์ที่ถูกยับยั้งโดย Hg2 + และ Pb2 + ไอออน ไคติเนสสามารถยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อราที่ phytopathogens Fusarium solani และ Alternaria alternata ลำดับเบสของยีนส่วนขยายพิสูจน์แล้วว่าเป็นคล้ายกับลำดับของยีนไคติเนเข้ารหัสของ glycoside ที่ hydrolases ครอบครัว 18

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เป็นแอคติโนมัยซีท chitinolytic ถูกแยกจากดินเกษตรในศูนย์ของโปแลนด์ มันถูกระบุว่าเป็น rimosus Streptomyces . จำแนกได้ตามมาตรฐานการทดสอบทางชีวเคมีและลำดับเบส 16S rRNA ยีนการวิเคราะห์ การย่อยสลายสาร chitinous ( กุ้ง หอย ปู และ ไคโตซาน ไคตินผงขยะ ) คือการตรวจสอบบนพื้นฐานของการใช้ออกซิเจน โดยการใช้ oxitop ( wtw )เอนไซม์ที่เร่งปฏิกิริยาการย่อยสลายของไดแซ็กคาไรด์ N - ชีวิต 3 มีประสิทธิภาพมากที่สุดและดังนั้นจึงจัดเป็นพบ . เอนไซม์ไคติเนสบริสุทธิ์จากอาหารเลี้ยงเชื้อโดยการแยกด้วยแอมโมเนียมซัลเฟต และ affinity chromatography . โปรตีนบริสุทธิ์ที่ถูกกำหนดโดยแมสสเปกโทรเมตรีตามการวิเคราะห์ของเศษผลของลำดับกรดอะมิโนของยีนไคติเนสที่ผลิตโดยวิธี PCR การตรวจสอบแบคทีเรีย เพื่อทำการออกแบบ ผลของการวิจัยของเราพิสูจน์ว่าสสารที่ถูก metabolised โดย rimosus ได้อย่างมีประสิทธิภาพมากที่สุด คือ ไคโตซานและเปลือกกุ้งเสียการตรวจสอบกิจกรรม chitinolytic พบว่าของเสียจากเปลือกกุ้งเป็นเอนไซม์ที่ดีที่สุดของการสังเคราะห์เอนไซม์ . มวลเชิงโมเลกุลของเอนไซม์คือ 63 กิโลดาลตัน กิจกรรมของเอนไซม์ไคติเนสได้สูงสุดที่อุณหภูมิ 40 องศา °– 45 ที่เหมาะสมสำหรับกิจกรรมของเอนไซม์ pH เป็น 7.0 . กิจกรรมของเอนไซม์ไคติเนสที่ปรับปรุงคุณภาพด้วยไอออนบริสุทธิ์เป็น mg2 .กิจกรรมของเอนไซม์ถูกยับยั้งโดย hg2 แบบเคลื่อนที่และไอออน - ยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อรา Fusarium solani และ phytopathogens = alternata . จากลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีนจำเพาะของพิสูจน์ให้คล้ายคลึงกับลำดับของยีนไคติเนสการเข้ารหัสของไกลโคไซด์ไฮโดรเลสครอบครัว 18