Multicopper oxidases can act on a b

Multicopper oxidases can act on a broad spectrum of phenolic and non-phenolic compounds. These enzymes include laccases, which are widely distributed in plants and fungi, and were more recently identified in bacteria. Here, we present the results of biochemical and mutational studies of small laccase (SLAC), a multicopper oxidase from Streptomyces coelicolor (SCO6712). In addition to typical laccase substrates, SLAC was tested using phenolic compounds that exhibit antioxidant activity. SLAC showed oxidase activity against 12 of 23 substrates tested, including caffeic acid, ferulic acid, resveratrol, quercetin, morin, kaempferol and myricetin. The kinetic parameters of SLAC were determined for 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonic acid), 2,6-dimethoxyphenol, quercetin, morin and myricetin, and maximum reaction rates were observed with myricetin, where kcat and Km values at 60°C were 8.1 (± 0.8) s⁻¹ and 0.9 (± 0.3) mM respectively. SLAC had a broad pH optimum for activity (between pH 4 and 8) and temperature optimum at 60-70°C. It demonstrated remarkable thermostability with a half-life of over 10 h at 80°C and over 7 h at 90°C. Site-directed mutagenesis revealed 17 amino acid residues important for SLAC activity including the 10 His residues involved in copper coordination. Most notably, the Y229A and Y230A mutant proteins showed over 10-fold increase in activity compared with the wild-type SLAC, which was correlated to higher copper incorporation, while kinetic analyses with S929A predicts localization of this residue near the meta-position of aromatic substrates.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Multicopper oxidases สามารถกระทำในสเปกตรัมกว้างของสารฟีนอ และ ฟีนอไม่ เอนไซม์เหล่านี้ได้แก่ laccases ซึ่งกระจายในพืชและเชื้อรา และเมื่อเร็ว ๆ นี้ระบุอยู่ในแบคทีเรีย ที่นี่ เรานำเสนอผลการศึกษาทางชีวเคมี และ mutational ของ laccase เล็ก (SLAC), oxidase multicopper จาก Streptomyces coelicolor (SCO6712) นอกจากพื้นผิวทั่วไป laccase, SLAC ถูกทดสอบใช้สารฟีนอที่แสดงกิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระ SLAC พบกิจกรรม oxidase กับ 12 23 พื้นผิวทดสอบ กรด caffeic กรด ferulic จำนวนมาก resveratrol, quercetin โมริน kaempferol และ myricetin พารามิเตอร์เดิม ๆ ของ SLAC มีกำหนด 2, 2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonic acid), 2,6 dimethoxyphenol, quercetin โมริน และ myricetin และอัตราสูงสุดของปฏิกิริยาได้สังเกต ด้วย myricetin ที่ kcat และ Km ค่าที่ 60 ° C ถูก 0.9 (± 0.3) และ s⁻¹ (± 0.8) 8.1 มม.ตามลำดับ SLAC มีค่า pH ที่กว้างเหมาะสมสำหรับกิจกรรม (ระหว่างค่า pH 4 และ 8) และอุณหภูมิสูงสุดที่ 60-70 องศาเซลเซียส แสดงให้เห็นว่าการ thermostability โดดเด่นกับ half-life ของกว่า 10 h ที่ 80° C และ 7 h ที่ 90 องศาเซลเซียส Mutagenesis โดยตรงเว็บไซต์เปิดเผย 17 สำคัญสำหรับกิจกรรม SLAC รวม 10 เกี่ยวข้องตกเขาในประสานงานทองแดงตกกรดอะมิโน ส่วนใหญ่ยวด Y229A และ Y230A โปรตีนกลายพันธุ์พบกว่า 10-fold เพิ่มกิจกรรมเปรียบเทียบกับ SLAC ป่าชนิด ซึ่งถูก correlated เพื่อประสานทองแดงสูงขึ้น ขณะวิเคราะห์เดิม ๆ กับ S929A ทำนายแปลของสารตกค้างนี้ ใกล้ตำแหน่ง meta ของพื้นผิวหอม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

oxidases Multicopper สามารถทำหน้าที่ในสเปกตรัมของสารประกอบฟีนอลและฟีนอลที่ไม่ได้ เอนไซม์เหล่านี้รวมถึง laccases ซึ่งมีกระจายอยู่ทั่วไปในพืชและเชื้อราและถูกระบุเมื่อเร็ว ๆ นี้ในแบคทีเรีย ที่นี่เรานำเสนอผลของการศึกษาทางชีวเคมีและ mutational ของ laccase ขนาดเล็ก (SLAC) oxidase multicopper จาก Streptomyces coelicolor (SCO6712) นอกเหนือจากพื้นผิว laccase ทั่วไป SLAC ถูกทดสอบโดยใช้สารประกอบฟีนอลที่แสดงฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ SLAC แสดงกิจกรรม oxidase กับ 12 23 พื้นผิวการทดสอบรวม​​ทั้งกรด caffeic กรด ferulic, Resveratrol, quercetin, โม, เฟอรอลและ myricetin พารามิเตอร์การเคลื่อนไหวของ SLAC ได้รับการพิจารณาสำหรับ 2,2'-azino-Bis (กรด 3 ethylbenzthiazoline-6​​-sulphonic), 2,6-dimethoxyphenol, quercetin, โมและ myricetin และอัตราการเกิดปฏิกิริยาสูงสุดพบกับ myricetin ที่ kcat และค่านิยมที่กิโลเมตรที่ 60 องศาเซลเซียสเป็น 8.1 (± 0.8) s⁻¹และ 0.9 (± 0.3) มมตามลำดับ SLAC มีค่า pH ที่เหมาะสมกว้างสำหรับกิจกรรม (ระหว่างพีเอช 4 และ 8) และอุณหภูมิที่เหมาะสม 60-70 องศาเซลเซียส มันแสดงให้เห็นถึงทนร้อนที่โดดเด่นด้วยครึ่งชีวิตนานกว่า 10 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 80 องศาเซลเซียสและในช่วง 7 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 90 ° C ฉับเว็บไซต์กำกับเผย 17 กรดอะมิโนที่สำคัญสำหรับกิจกรรม SLAC รวม 10 ตกค้างของเขามีส่วนร่วมในการประสานงานทองแดง สุดยวด Y229A และ Y230A กลายพันธุ์โปรตีนแสดงให้เห็นการเพิ่มขึ้นกว่า 10 เท่าในกิจกรรมเมื่อเทียบกับป่าประเภท SLAC ซึ่งได้รับการจัดตั้งขึ้นในความสัมพันธ์กับทองแดงที่สูงขึ้นในขณะที่การเคลื่อนไหวที่มีการวิเคราะห์ S929A ทำนายตำแหน่งของสารตกค้างใกล้กับเมตาดาต้าตำแหน่งของหอม พื้นผิว

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

multicopper oxidases สามารถกระทำในสเปกตรัมกว้างของฟีนอลและไม่มีสารประกอบฟีนอล . เอนไซม์เหล่านี้รวมถึง laccases ซึ่งมีกระจายอยู่ทั่วไปในพืชและเชื้อรา และมากขึ้นเมื่อเร็ว ๆนี้พบในแบคทีเรีย ที่นี่เรานำเสนอผลทางชีวเคมีและการศึกษาความสำคัญของแลคเคสเล็ก ( ซเลค ) , ซิเดสจาก Streptomyces multicopper coelicolor ( sco6712 )นอกจากพื้นผิว - ทั่วไป ซแลคถูกทดสอบโดยใช้สารประกอบฟีนอลที่แสดงฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ . ซแลค พบกิจกรรม oxidase กับ 12 23 แผ่นทดสอบ รวมทั้งกรด Caffeic กรด ferulic , resveratrol , quercetin โมริน , , และเคมเฟอรอลไมริซีทิน . ค่าพารามิเตอร์จลน์ของซเลคโดยวิธี 2 , 2 ' - azino ทวิ ( 3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonic acid ) , 26-dimethoxyphenol quercetin โมรินไมริซีทิน , และ อัตราสูงสุด พบว่ามีปฏิกิริยากับไมริซีทินที่ kcat และค่ากิโลเมตรที่ 60 °องศาเซลเซียสเป็น 8.1 ( ±  0.8 และ 0.9 ) ⁻¹ ( ±  0.3 ) มิลลิเมตร ตามลำดับ ซแลคได้กว้าง pH ที่เหมาะสมสำหรับกิจกรรม ( pH  ระหว่าง 4 และ 8 ) และอุณหภูมิที่เหมาะสมอยู่ที่ 60-70 องศามันแสดงให้เห็นถึงทดลโดดเด่นด้วยครึ่งชีวิตกว่า 10   H 80 ° C และมากกว่า 7   H ที่ 90 องศา กับเว็บไซต์การเปิดเผย 17 กรดอะมิโนตกค้างที่สำคัญสำหรับซแลคกิจกรรมรวมทั้ง 10 ของเขามีส่วนร่วมในการประสานงาน และทองแดง ส่วนใหญ่ยวด , y229a และโปรตีนกลายพันธุ์ y230a พบกว่า 10 เท่าเมื่อเทียบกับการเพิ่มขึ้นในกิจกรรมของซเลค ,ซึ่งมีความสัมพันธ์กับบริษัททองแดงสูงขึ้น ในขณะที่การวิเคราะห์จลนศาสตร์กับ s929a คาดการณ์การแปลนี้กากใกล้ Meta ตำแหน่งของพื้นผิวกลิ่นหอม