As shown in รูป 36, parental mouse

As shown in รูป 36, parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies clone 20 12H3, ไคเมริก ฮิวเมน IgG4K แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3, and all six
ฮิวเมไนซ์ IgG4K. แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 recognized full-length
(denoted as `CRD1' คอนสตรัคต์) ฮิวเมน CD134 and truncated ฮิวเมน CD134 variant
that lacked CRD1-CRD2 (denoted as `CRD3' คอนสตรัคต์) on transfected 293-F cells,
whereas parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies clone 12H3, ไคเมริก
25 ฮิวเมน IgG4K. แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3, and all six ฮิวเมไนซ์
IgG4K. แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 showed no binding on mock-
transfected 293-F cells. In contrast, การยึดเกาะของ parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134
antibody clone 12H3, ไคเมริก ฮิวเมน IgG4K แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone
12H3, and all six versions of ฮิวเมไนซ์ IgG4K แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 30 12H3 against truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1-CRD2-truncated
CRD3 Al-module (denoted as `CRD4' คอนสตรัคต์) was very weak หรือ เนกาทีฟ,
whereas parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 20E5 showed strong


binding against this truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1-CRD2-
truncated CRD3 Al-module (denoted as `CRD4' คอนสตรัคต์) on transfected 293-F
cells, which confirmed that these latter 293-F cells expressed this surface truncated CD134 version.
5
As shown in รูป 37, parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies clone 20E5, ไคเมริก ฮิวเมน IgG4K แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 20E5, and ฮิวเมไนซ์ IgG4K แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 20E5 version 20E5_VL1VH1 recognized
full-length (denoted as `CRD1' คอนสตรัคต์) ฮิวเมน CD134, truncated ฮิวเมน CD134 10 variant that lacked CRD1-CRD2 (denoted as `CRD3' คอนสตรัคต์), and truncated
ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 Al-module
(denoted as `CRD4' คอนสตรัคต์) on transfected 293-F cells, whereas parental mouse
แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies clone 20E5, ไคเมริก ฮิวเมน IgG4K แอนติ-ฮิวเมน
CD134 antibody clone 20E5, and ฮิวเมไนซ์ IgG4k แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody 15 clone 20E5 version 20E5_ VL1VH1showed no binding on mock-transfected 293-F
cells.
These results demonstrated that parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134
antibodies clones 12H3 and 20E5, ไคเมริก ฮิวเมน IgG4K. แอนติ-ฮิวเมน CD134
antibody clones 12H3 and 20E5, all six ฮิวเมไนซ์ IgG4k. แอนติ-ฮิวเมน CD134
20 antibody clone 12H3, and ฮิวเมไนซ์ IgG4K แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone
20E5_VL1VH1 specifically recognized ฮิวเมน CD134 (comparison of full-length
ฮิวเมน CD134 transfection vs mock transfection). Furthermore, these results
demonstrated that แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies clones 12H3 and 20E5 seemed to
recognize dissimilar ฮิวเมน CD134 เอพิโทป, which คือ evidenced by respective lack 25 of binding (using clone 12H3) vs strong binding (using clone 20E5) with truncated
ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 Al-module
(denoted as `CRD4' คอนสตรัคต์). These results demonstrated that mouse แอนติ-ฮิวเมน
CD134 antibody clone 12H3, ไคเมริก ฮิวเมน IgG4K. แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody
clone 12H3, and all six ฮิวเมไนซ์ IgG4k แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 30 did not seem to recognize a ฮิวเมน CD134 เอพิโทป in CRD1 and CRD2. Mouse แอนติ-
ฮิวเมน CD134 antibody clone 20E5, ไคเมริก ฮิวเมน IgG4k แอนติ-ฮิวเมน CD134
antibody clone 20E5, and ฮิวเมไนซ์ IgG4k. แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone
20E5 VL1VH1 did not seem to recognize a ฮิวเมน CD134 เอพิโทป in CRD1, CRD2,
and truncated CRD3 Al-module (according to definition of Latza et al. Eur J
Immunol 1994; 24: 677-683). These results demonstrated that mouse แอนติ-ฮิวเมน
CD134 antibody clone 12H3, ไคเมริก ฮิวเมน IgG4K แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody 5 clone 12H3, and all six ฮิวเมไนซ์ IgG4k. แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3
seemed to recognize a linear หรือ non-linear/conformational เอพิโทป in truncated
CRD3 Al-module (according to definition of Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24:
677-683) with amino acid sequence 108-126 (i.e., 19-meric peptide
RCRAGTQPLDSYKPGVDCA; see SEQ ID NO: 34) on ภายนอกเซลล์ ฮิวเมน CD134, 10 หรือ amino acid sequence 108-126 (i.e., 19-meric peptide
RCRAGTQPLDSYKPGVDCA; see SEQ ID NO: 34) formed a part for binding to a non-linear/conformational เอพิโทป in truncated CRD3 Al-module/CRD4 Al-B1-
module (according to definition of Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677-683),
and possibly in the hinge-like structure, with amino acid sequence 108-214 (see 15 SEQ ID NO: 35) on ภายนอกเซลล์ ฮิวเมน CD134. These results demonstrated that
mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 20E5, ไคเมริก ฮิวเมน IgG4k. แอนติ-
ฮิวเมน CD134 antibody clone 20E5, and ฮิวเมไนซ์ IgG4K. แอนติ-ฮิวเมน CD134
antibody clone 20E5 VL1VH1 seemed to recognize a linear หรือ non-
linear/conformational เอพิโทป in CRD4 Al-B1-module (according to definition of 20 Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677-683), and possibly in the hinge-like
structure, with amino acid sequence 127-214 (SEQ ID NO: 92) on ภายนอกเซลล์
ฮิวเมน CD134.


(e). Competition of ฮิวเมไนซ์ IgG4k แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล antibody
25 clone 12H3 with biotinylated parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล
antibody clone 12H3 for binding with surface ฮิวเมน CD134 on stably transfected 293-F cell line clone no. 5 (FACS)
Prior to performing the competition flow cytometric measurements, the
EC5o of biotinylated (using N-hydroxysuccinimido-biotin from Pierce) parental 30 mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล antibody clone 12H3 was determined (see
below for method), and was identified to be about700 ng/mL (see รูป 38, n=2).
Displacement of the biotinylated parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล
antibody clone 12H3 at the identified EC50 concentration by unlabeled parental


mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3, ไคเมริก ฮิวเมน IgG4k แอนติ-
ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3, and six versions of ฮิวเมไนซ์ IgG4k แอนติ-
ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 was subsequently investigated.
Full-length ฮิวเมน CD134 (SEQ ID NO1) was re-cloned in a pcDNA3.1-
5 derived expression plasmid (see Example 11 (c) above). This full-length ฮิวเมน
CD134 plasmid was transfected in FreeStyleTM 293-F cells (Life Technologies)
using the FreeStyleTM 293 Expression System (Life Technologies). Stable ฮิวเมน
full-length CD134-transfected cells (clone no. 5 with high surface CD134 expression
level see รูป 32) were selected using 125 u,g/mL G418 (Gibco), and were
10 harvested and put at 1-2x106 cells/mL in ice-chilled PBS/BSA/NaN3 supplemented
with 501u.g/mL purified ฮิวเมน IgG (Sigma; blocking Fcy รีเซปเตอร์). Cells were
incubated with 0.003 - 50.0 (5-fold dilution steps in PBS/BSA/NaN3) unlabeled
parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3, ไคเมริก ฮิวเมน IgG4k
แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3, and six versions of ฮิวเมไนซ์ IgG4k
15 แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 in combination with 700 ng/mL (EC50)
biotinylated parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล antibody clone 12H3
for 30 minutes at 4°C. After extensive washing in PBS/BSA/NaN3, การยึดเกาะของ
biotinylated parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล antibody clone 12H3
was determined with 1:200 diluted PE-conjugated สเตร็ปทาวิดิน (Jackson
20 ImmunoResearch) for 30 minutes at 4°C. After extensive washing in
PBS/BSA/NaN3, cells were fixed in 2% formaldehyde in PBS/BSA/NaN3 for 30
minutes at 4°C. การยึดเกาะของ biotinylated parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134
โมโนโคลนอล antibody clone 12H3 was measured using โฟลไซโตเมทรี
(FACSCalibur; BD Biosciences).
25 As shown in รูป 39 (n=2), unlabeled parental mouse แอนติ-ฮิวเมน
CD134 antibody clone 12H3 and unlabeled ไคเมริก ฮิวเมน IgG4k แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 demonstrated identical displacement of biotinylated parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล antibody clone 12H3, which
indicated that parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 and
30 ไคเมริก ฮิวเมน IgG4k แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 exhibited an
identical CD134 antigen binding affinity (half-maximum displacement หรือ inhibition (IC50) of biotinylated parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล antibody clone







128
12H3 at 3.51,tg/mL). All six unlabeled ฮิวเมไนซ์ IgG4K แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 versions — 12H3_VL1H1, 12H3_VL1H2, 12H3 VL1H3, 12H3_VL2H1, 12H3_VL2VH2 and 12H3_VL2VH3 — demonstrated identical
displacement of biotinylated parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล
5 antibody clone 12H3, which indicated that all six unlabeled ฮิวเมไนซ์ IgG4K แอนติ-
ฮิวเมน CD134 antibody cl

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ดังแสดงในรูป 36 แอนตี้ CD134 แอนติ-ฮิวเมนเมาส์ปกครองโคลน 20 12 H 3 ไคเมริกฮิวเมน IgG4K แอนติฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลน 12H 6 3 และทั้งหมด ฮิวเมไนซ์ IgG4K แอนติ-ฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลน 12H 3 รู้จักจัด (ตาม 'CRD1' คอนสตรัคต์) ฮิวเมน CD134 และฮิวเมนตัดตัวแปร CD134 ที่ขาด CRD1 CRD2 (ตาม 'CRD3' คอนสตรัคต์) ในเซลล์ 293-F transfected ในขณะที่แอนตี้ CD134 แอนติ-ฮิวเมนเมาส์ปกครองโคลน 12H 3 ไคเมริก 25 ฮิวเมน IgG4K แอนติ-ฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลน 12H 3 และทั้งหมดหกฮิวเมไนซ์ IgG4K แอนติ-ฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลน 12H 3 เห็นไม่ผูกใน mock- เซลล์ 293-F transfected ในทางตรงข้าม ผู้ปกครองการยึดเกาะของเมาส์ CD134 แอนติ-ฮิวเมน 12H 3 ไคเมริกฮิวเมน IgG4K แอนติฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลนโคลนแอนติบอดี รุ่น 12H 3 และทั้งหมดหกฮิวเมไนซ์ IgG4K แอนติบอดีแอนติ-ฮิวเมน CD134 โคลน 30 12H 3 กับตัดทอนตัวแปร CD134 ฮิวเมนที่ CRD1-CRD2-ตัดขาด CRD3 อัลโมดูล (ตาม 'CRD4' คอนสตรัคต์) ได้ที่เนกาทีฟหรืออ่อนมาก ในขณะที่เมาส์ปกครองแอนติ-ฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลน 20E5 ที่แสดงให้เห็นว่าแข็งแรงผูกกับตัวแปร CD134 นี้ตัดฮิวเมนที่ขาด CRD1-CRD2 -ตัด CRD3 อัลโมดูล (ตาม 'CRD4' คอนสตรัคต์) ใน transfected 293 Fเซลล์ ซึ่งยืนยันว่า เซลล์เหล่านี้ 293 F หลังแสดงพื้นผิวนี้ ตัดรุ่น CD1345ดังแสดงในรูปที่ 37 แอนตี้ CD134 แอนติ-ฮิวเมนเมาส์ปกครองโคลน 20E5 ไคเมริกฮิวเมน IgG4K แอนติฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลน 20E5 และฮิวเมไนซ์ IgG4K แอนติฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลน 20E5 รุ่น 20E5_VL1VH1 รู้จัด (ตาม 'CRD1' คอนสตรัคต์) ฮิวเมน CD134 ตัดตัวแปร CD134 10 ฮิวเมนที่ขาด CRD1 CRD2 (ตาม 'CRD3' คอนสตรัคต์), และตัด ตัวแปร CD134 ฮิวเมนที่ขาด CRD1-CRD2-ตัด CRD3 อัลโมดูล (ตาม 'CRD4' คอนสตรัคต์) ในเซลล์ 293-F transfected ในขณะที่เมาส์โดยผู้ปกครอง แอนตี้ CD134 แอนติ-ฮิวเมนโคลน 20E5 ไคเมริกฮิวเมน IgG4K แอนติ-ฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลน 20E5 และฮิวเมไนซ์ IgG4k แอนติฮิวเมน CD134 แอนติบอดี 15 โคลน 20E5_ 20E5 รุ่น VL1VH1showed ไม่มีผลผูกพันกับ mock transfected 293-F cells.These results demonstrated that parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134antibodies clones 12H3 and 20E5, ไคเมริก ฮิวเมน IgG4K. แอนติ-ฮิวเมน CD134antibody clones 12H3 and 20E5, all six ฮิวเมไนซ์ IgG4k. แอนติ-ฮิวเมน CD13420 antibody clone 12H3, and ฮิวเมไนซ์ IgG4K แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone20E5_VL1VH1 specifically recognized ฮิวเมน CD134 (comparison of full-lengthฮิวเมน CD134 transfection vs mock transfection). Furthermore, these resultsdemonstrated that แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies clones 12H3 and 20E5 seemed to recognize dissimilar ฮิวเมน CD134 เอพิโทป, which คือ evidenced by respective lack 25 of binding (using clone 12H3) vs strong binding (using clone 20E5) with truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 Al-module (denoted as `CRD4' คอนสตรัคต์). These results demonstrated that mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3, ไคเมริก ฮิวเมน IgG4K. แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3, and all six ฮิวเมไนซ์ IgG4k แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 30 did not seem to recognize a ฮิวเมน CD134 เอพิโทป in CRD1 and CRD2. Mouse แอนติ- ฮิวเมน CD134 antibody clone 20E5, ไคเมริก ฮิวเมน IgG4k แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 20E5, and ฮิวเมไนซ์ IgG4k. แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone20E5 VL1VH1 did not seem to recognize a ฮิวเมน CD134 เอพิโทป in CRD1, CRD2, and truncated CRD3 Al-module (according to definition of Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677-683). These results demonstrated that mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3, ไคเมริก ฮิวเมน IgG4K แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody 5 clone 12H3, and all six ฮิวเมไนซ์ IgG4k. แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 seemed to recognize a linear หรือ non-linear/conformational เอพิโทป in truncated CRD3 Al-module (according to definition of Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677-683) with amino acid sequence 108-126 (i.e., 19-meric peptide RCRAGTQPLDSYKPGVDCA; see SEQ ID NO: 34) on ภายนอกเซลล์ ฮิวเมน CD134, 10 หรือ amino acid sequence 108-126 (i.e., 19-meric peptideRCRAGTQPLDSYKPGVDCA; see SEQ ID NO: 34) formed a part for binding to a non-linear/conformational เอพิโทป in truncated CRD3 Al-module/CRD4 Al-B1-module (according to definition of Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677-683),and possibly in the hinge-like structure, with amino acid sequence 108-214 (see 15 SEQ ID NO: 35) on ภายนอกเซลล์ ฮิวเมน CD134. These results demonstrated that mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 20E5, ไคเมริก ฮิวเมน IgG4k. แอนติ- ฮิวเมน CD134 antibody clone 20E5, and ฮิวเมไนซ์ IgG4K. แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 20E5 VL1VH1 seemed to recognize a linear หรือ non- linear/conformational เอพิโทป in CRD4 Al-B1-module (according to definition of 20 Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677-683), and possibly in the hinge-like structure, with amino acid sequence 127-214 (SEQ ID NO: 92) on ภายนอกเซลล์ ฮิวเมน CD134.(e). Competition of ฮิวเมไนซ์ IgG4k แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล antibody25 clone 12H3 with biotinylated parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอลantibody clone 12H3 for binding with surface ฮิวเมน CD134 on stably transfected 293-F cell line clone no. 5 (FACS)Prior to performing the competition flow cytometric measurements, the EC5o of biotinylated (using N-hydroxysuccinimido-biotin from Pierce) parental 30 mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล antibody clone 12H3 was determined (see below for method), and was identified to be about700 ng/mL (see รูป 38, n=2). Displacement of the biotinylated parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล antibody clone 12H3 at the identified EC50 concentration by unlabeled parentalmouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3, ไคเมริก ฮิวเมน IgG4k แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3, and six versions of ฮิวเมไนซ์ IgG4k แอนติ- ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 was subsequently investigated. Full-length ฮิวเมน CD134 (SEQ ID NO1) was re-cloned in a pcDNA3.1-5 derived expression plasmid (see Example 11 (c) above). This full-length ฮิวเมนCD134 plasmid was transfected in FreeStyleTM 293-F cells (Life Technologies)using the FreeStyleTM 293 Expression System (Life Technologies). Stable ฮิวเมนfull-length CD134-transfected cells (clone no. 5 with high surface CD134 expression level see รูป 32) were selected using 125 u,g/mL G418 (Gibco), and were 10 harvested and put at 1-2x106 cells/mL in ice-chilled PBS/BSA/NaN3 supplemented with 501u.g/mL purified ฮิวเมน IgG (Sigma; blocking Fcy รีเซปเตอร์). Cells were incubated with 0.003 - 50.0 (5-fold dilution steps in PBS/BSA/NaN3) unlabeled parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3, ไคเมริก ฮิวเมน IgG4k แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3, and six versions of ฮิวเมไนซ์ IgG4k
15 แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 in combination with 700 ng/mL (EC50)
biotinylated parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล antibody clone 12H3
for 30 minutes at 4°C. After extensive washing in PBS/BSA/NaN3, การยึดเกาะของ
biotinylated parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล antibody clone 12H3
was determined with 1:200 diluted PE-conjugated สเตร็ปทาวิดิน (Jackson
20 ImmunoResearch) for 30 minutes at 4°C. After extensive washing in
PBS/BSA/NaN3, cells were fixed in 2% formaldehyde in PBS/BSA/NaN3 for 30
minutes at 4°C. การยึดเกาะของ biotinylated parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134
โมโนโคลนอล antibody clone 12H3 was measured using โฟลไซโตเมทรี
(FACSCalibur; BD Biosciences).
25 As shown in รูป 39 (n=2), unlabeled parental mouse แอนติ-ฮิวเมน
CD134 antibody clone 12H3 and unlabeled ไคเมริก ฮิวเมน IgG4k แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 demonstrated identical displacement of biotinylated parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล antibody clone 12H3, which
indicated that parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 and
30 ไคเมริก ฮิวเมน IgG4k แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 exhibited an
identical CD134 antigen binding affinity (half-maximum displacement หรือ inhibition (IC50) of biotinylated parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล antibody clone







128
12H3 at 3.51,tg/mL). All six unlabeled ฮิวเมไนซ์ IgG4K แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 versions — 12H3_VL1H1, 12H3_VL1H2, 12H3 VL1H3, 12H3_VL2H1, 12H3_VL2VH2 and 12H3_VL2VH3 — demonstrated identical
displacement of biotinylated parental mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล
5 antibody clone 12H3, which indicated that all six unlabeled ฮิวเมไนซ์ IgG4K แอนติ-
ฮิวเมน CD134 antibody cl

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ดังแสดงในรูปที่ 36 เมาส์ของผู้ปกครองแอนติ - ฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลน 20 12H3, ไคเมริกฮิวเมน IgG4K แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 12H3
และทั้งหกฮิวเมไนซ์IgG4K แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 12H3 ได้รับการยอมรับยาวเต็มรูปแบบ
(แสดงเป็น `CRD1 'คอนสตรัคต์) ฮิวเมน CD134 และตัดฮิวเมนตัวแปร CD134
ที่ขาด CRD1-CRD2 (แสดงเป็น` CRD3' คอน สตรัคต์) ในเซลล์ transfected 293-F,
ในขณะที่ผู้ปกครองเมาส์แอนติ - ฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลน 12H3, ไคเมริก
25 ฮิวเมน IgG4K แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดี CD134 โคลน 12H3 และทั้งหกฮิวเมไนซ์
IgG4K แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 12H3 พบว่าไม่มีผลผูกพันกับ mock-
transfected เซลล์ 293-F ในทางตรงกันข้ามการยึดเกาะของเมาส์ของผู้ปกครองแอนติ - ฮิวเมน CD134
แอนติบอดีโคลน 12H3, ไคเมริกฮิวเมน IgG4K แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134
12H3 และทั้งหกรุ่นฮิวเมไนซ์ IgG4K แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 30 12H3 กับตัดทอนฮิวเมนตัวแปร CD134 ที่ขาด CRD1-CRD2-ตัด
CRD3 อัลโมดูล (แสดงเป็น `CRD4 'คอนสตรัคต์) เป็นอ่อนแอมากหรือเนกาทีฟ,
ในขณะที่ เมาส์ผู้ปกครองแอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 20E5 ที่แข็งแกร่งแสดงให้เห็นว่ามีผลผูกพันต่อนี้ถูกตัดทอนฮิวเมนCD134 ตัวแปรที่ขาด CRD1-CRD2- ตัด CRD3 อัลโมดูล (แสดงเป็น `CRD4 'คอนสตรัคต์) บน transfected 293 -F เซลล์ซึ่งได้รับการยืนยันว่าสิ่งเหล่านี้หลังเซลล์ 293-F แสดงพื้นผิวรุ่นนี้ CD134 ตัดทอน. 5 ดังแสดงในรูปที่ 37 โดยผู้ปกครองเมาส์แอนติ - ฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลน 20E5, ไคเมริกฮิวเมน IgG4K แอน ติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 20E5 และฮิวเมไนซ์ IgG4K แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 รุ่น 20E5 20E5_VL1VH1 ได้รับการยอมรับยาวเต็มรูปแบบ(แสดงเป็น `CRD1 'คอนสตรัคต์) ฮิวเมน CD134 , ตัดฮิวเมน CD134 10 ตัวแปรที่ขาด CRD1-CRD2 (แสดงเป็น `CRD3 'คอนสตรัคต์) และตัดฮิวเมนตัวแปรCD134 ที่ขาด CRD1-CRD2-ตัด CRD3 อัลโมดูล(แสดงเป็น` CRD4' คอนสตรัคต์) บน transfected เซลล์ 293-F ขณะที่เมาส์ของผู้ปกครองแอนติ- ฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลน 20E5, ไคเมริกฮิวเมน IgG4K แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลนCD134 20E5 และฮิว เมไนซ์ IgG4k แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดี CD134 15 โคลน 20E5 รุ่น 20E5_ VL1VH1showed ไม่มีผลผูกพันกับจำลอง transfected 293-F เซลล์. ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าเมาส์ของผู้ปกครองแอนติ - ฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลน 12H3 และ 20E5, ไคเมริกฮิวเมน IgG4K แอนติ - ฮิวเมน CD134 โคลนแอนติบอดี 12H3 และ 20E5 ทั้งหกฮิวเมไนซ์ IgG4k แอนติ - ฮิวเมน CD134 20 แอนติบอดีโคลน 12H3 และฮิวเมไนซ์ IgG4K แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 20E5_VL1VH1 ได้รับการยอมรับโดยเฉพาะฮิวเมน CD134 (เปรียบเทียบยาวเต็มรูปแบบฮิวเมนtransfection CD134 เทียบจำลอง transfection) นอกจากนี้ผลเหล่านี้แสดงให้เห็นว่าแอนติ - ฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลน 12H3 และ 20E5 ดูเหมือนจะรับรู้ที่แตกต่างกันฮิวเมนCD134 เอพิโทปซึ่งคือหลักฐานจากการขาดตามลำดับ 25 ของการผูก (โดยใช้การโคลนนิ่ง 12H3) เทียบกับที่แข็งแกร่งผูกพัน ( โดยใช้โคลน 20E5) ที่มีการตัดทอนฮิวเมนCD134 ตัวแปรที่ขาด CRD1-CRD2-ตัด CRD3 อัลโมดูล(แสดงเป็น `CRD4 'คอนสตรัคต์) ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าเมาส์แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีCD134 โคลน 12H3, ไคเมริกฮิวเมน IgG4K แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดี CD134 โคลน 12H3 และทั้งหกฮิวเมไนซ์ IgG4k แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 12H3 30 ไม่ได้ดูเหมือนจะรู้จักฮิวเมน CD134 เอพิโทปใน CRD1 และ CRD2 เมาส์แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 20E5, ไคเมริกฮิวเมน IgG4k แอนติ - ฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลน 20E5 และฮิวเมไนซ์ IgG4k แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 20E5 VL1VH1 ไม่ได้ดูเหมือนจะรู้จักฮิวเมน CD134 เอพิโทปใน CRD1, CRD2, และตัดทอน CRD3 อัลโมดูล (ตามคำนิยามของ Latza et al, Eur J. Immunol 1994 ; 24: 677-683) ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าเมาส์แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีCD134 โคลน 12H3, ไคเมริกฮิวเมน IgG4K แอนติ - ฮิวเมน CD134 แอนติบอดี 5 โคลน 12H3 และทั้งหกฮิวเมไนซ์ IgG4k แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 12H3 ดูเหมือนจะรับรู้เชิงเส้นหรือไม่เชิงเส้น / โครงสร้างเอพิโทปในการตัดทอน. CRD3 อัลโมดูล (ตามคำนิยามของ Latza et al, Eur J Immunol 1994; 24: 677- 683) ที่มีลำดับกรดอะมิโน 108-126 (เช่น 19 Meric เปปไทด์RCRAGTQPLDSYKPGVDCA ดู SEQ ID NO: 34) บนภายนอกเซลล์ฮิวเมน CD134 10 หรือกรดอะมิโนลำดับที่ 108-126 (เช่นเปปไทด์ 19 Meric RCRAGTQPLDSYKPGVDCA; เห็น SEQ ID NO: 34) กลายเป็นส่วนหนึ่งในการเชื่อมโยงไปยังที่ไม่ใช่เชิงเส้น / โครงสร้างเอพิโทปที่ถูกตัดทอนใน CRD3 อัลโมดูล / CRD4 Al-B1- โมดูล (ตามคำนิยามของ Latza et al, Eur J Immunol 1994. 24: 677-683) และอาจจะอยู่ในโครงสร้างบานพับเหมือนที่มีกรดอะมิโนลำดับที่ 108-214 (ดู 15 SEQ ID NO: 35) บนภายนอกเซลล์ฮิวเมน CD134 ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าเมาส์แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 20E5, ไคเมริกฮิวเมน IgG4k แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 20E5 และฮิวเมไนซ์ IgG4K แอนติ - ฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลน 20E5 VL1VH1 ดูเหมือนจะรับรู้เชิงเส้นหรือไม่. เชิงเส้น / โครงสร้างเอพิโทปใน CRD4 Al-B1 โมดูล (ตามคำนิยามของ 20 Latza et al, Eur J Immunol 1994; 24 : 677-683) และอาจบานพับเหมือนโครงสร้างที่มีลำดับกรดอะมิโน127-214 (SEQ ID NO: 92) บนภายนอกเซลล์. ฮิวเมน CD134 (จ) การแข่งขันของฮิวเมไนซ์ IgG4k แอนติ - ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่25 โคลน 12H3 ด้วยเมาส์ของผู้ปกครอง biotinylated แอนติ - ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอลแอนติบอดีโคลน12H3 ผูกพันที่มีพื้นผิวฮิวเมน CD134 ใน transfected เสถียร 293-F เซลล์โคลนเส้น 5 (FACS) ก่อนที่จะมีการดำเนินการการวัดการไหลของการแข่งขัน cytometric ที่EC5o ของไบโอติน (ใช้ N-hydroxysuccinimido-ไบโอตินจากเพียร์ซ) ผู้ปกครอง 30 เมาส์แอนติ - ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอลแอนติบอดีโคลน 12H3 ถูกกำหนด (ดูด้านล่างสำหรับวิธีการ) และถูกระบุว่าจะเป็น about700 นาโนกรัม / มิลลิลิตร (ดูรูป 38, n = 2). การกำจัดของเมาส์ของผู้ปกครอง biotinylated แอนติ - ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล12H3 โคลนแอนติบอดีที่ความเข้มข้น EC50 ระบุ ไม่มีป้ายกำกับผู้ปกครองเมาส์แอนติ- ฮิวเมนแอนติบอดี CD134 โคลน 12H3, ไคเมริกฮิวเมน IgG4k แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 12H3 หกรุ่นฮิวเมไนซ์ IgG4k แอนติ - ฮิว เมน CD134 แอนติบอดีโคลน 12H3 ถูกตรวจสอบในภายหลัง. ยาวเต็มรูปแบบฮิวเมน CD134 (SEQ ID NO1) เป็นอีกครั้งที่โคลนใน pcDNA3.1- 5 พลาสมิดแสดงออกมา (ดูตัวอย่าง 11 (ค) ข้างต้น) นี้ยาวเต็มรูปแบบฮิวเมนCD134 พลาสมิดที่ถูก transfected ใน FreeStyleTM เซลล์ 293-F (เทคโนโลยีชีวิต) โดยใช้ FreeStyleTM 293 ระบบการแสดงออก (เทคโนโลยีชีวิต) Stable ฮิวเมนยาวเต็มรูปแบบเซลล์CD134-transfected (โคลน no. 5 ที่มีพื้นผิวสูงแสดงออก CD134 ระดับเห็นรูป 32) ได้รับการคัดเลือกโดยใช้ 125 มึงกรัม / มิลลิลิตร G418 (Gibco) และ10 เก็บเกี่ยวและใส่ที่ 1-2x106 เซลล์ / มิลลิลิตรในพีบีเอสน้ำแข็งแช่เย็น / บีเอสเอ / NaN3 เสริมกับ501u.g / mL บริสุทธิ์ฮิวเมน IgG (ซิกม่า; ปิดกั้น FCY รีเซปเตอร์) เซลล์ที่ถูกบ่มกับ 0.003-50.0 (5 เท่าขั้นตอนการลดสัดส่วนในพีบีเอส / บีเอสเอ / NaN3) ไม่มีป้ายกำกับเมาส์ของผู้ปกครองแอนติ- ฮิวเมนแอนติบอดี CD134 โคลน 12H3, ไคเมริกฮิวเมน IgG4k แอนติ - ฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลน 12H3 หกรุ่นฮิวเมไนซ์ IgG4k 15 แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 12H3 ร่วมกับ 700 นาโนกรัม / มิลลิลิตร (EC50) เมาส์ biotinylated ผู้ปกครองแอนติ - ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอ แอนติบอดีโคลน 12H3 ลเป็นเวลา30 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส หลังจากที่กว้างขวางซักผ้าในพีบีเอส / บีเอสเอ / NaN3, การยึดเกาะของbiotinylated เมาส์ของผู้ปกครองแอนติ - ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอลแอนติบอดีโคลน 12H3 ถูกกำหนด 1: 200 ปรับลด PE-ผันสเตร็ปทาวิดิน ( แจ็คสัน20 ImmunoResearch) เป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส หลังจากที่กว้างขวางในการซักผ้าพีบีเอส / บีเอสเอ / NaN3 เซลล์ได้รับการแก้ไขในไฮด์ 2% ในพีบีเอส / บีเอสเอ / NaN3 30 นาทีที่ 4 ° C การยึดเกาะของ biotinylated เมาส์ของผู้ปกครองแอนติ - ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอลแอนติบอดีโคลน 12H3 ถูกวัดโดยใช้โฟลไซโตเมทรี. (FACSCalibur; BD ชีววิทยาศาสตร์) 25 ดังแสดงในรูปที่ 39 (n = 2) เมาส์ที่ไม่มีป้ายกำกับผู้ปกครองแอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีCD134 โคลน 12H3 และไม่มีป้ายกำกับไคเมริกฮิวเมน IgG4k แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 12H3 แสดงให้เห็นถึงการเคลื่อนที่เหมือนเมาส์ของผู้ปกครอง biotinylated แอนติ - ฮิวเมน CD134 โมโน โคลนอลแอนติบอดีโคลน 12H3 ซึ่งชี้ให้เห็นว่าเมาส์ของผู้ปกครองแอนติ- ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 12H3 และ30 ไคเมริกฮิวเมน IgG4k แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 12H3 แสดงความแอนติเจนCD134 เหมือนผูกพันความสัมพันธ์ (ครึ่งสูงสุดกำจัดหรือยับยั้ง (IC50) เมาส์ของผู้ปกครอง biotinylated แอนติ - ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอลแอนติบอดีโคลน128 12H3 ที่ 3.51, TG / มิลลิลิตร) ทั้งหกที่ไม่มีป้ายกำกับฮิวเมไนซ์ IgG4K แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 12H3 รุ่น - 12H3_VL1H1, 12H3_VL1H2, 12H3 VL1H3, 12H3_VL2H1, 12H3_VL2VH2 และ 12H3_VL2VH3 - แสดงให้เห็นเหมือนกันการเคลื่อนที่ของเมาส์ของผู้ปกครองbiotinylated แอนติ - ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล5 แอนติบอดีโคลน 12H3 ซึ่งชี้ให้เห็นว่าทั้งหกที่ไม่มีป้ายกำกับฮิวเมไนซ์ IgG4K แอนติ - ฮิวเมน CD134 CL แอนติบอดี

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ดังแสดงในรูป 36 ของเมาส์แอนติ - ฮิวเมน cd134 แอนติบอดีโคลน 12h3 ไคเมริก 20 , ฮิวเมน igg4k แอนติ - ฮิวเมน cd134 แอนติบอดีโคลน 12h3 และหก
ฮิวเมไนซ์ igg4k . แอนติ - ฮิวเมน cd134 แอนติบอดีโคลน 12h3 ยอมรับเต็มตัว
( กล่าวคือเป็น ` crd1 ' คอนสตรัคต์ ) ฮิวเมน cd134 ข้างตัด cd134
ฮิวเมนแปรที่ขาด crd1-crd2 ( กล่าวคือเป็น ` crd3 ' คอนสตรัคต์ ) transfected 293-f เซลล์
ส่วนผู้ปกครองเมาส์แอนติ - ฮิวเมน cd134 แอนติบอดีโคลน 12h3 ไคเมริก
25 , ฮิวเมน igg4k . แอนติ - ฮิวเมน cd134 แอนติบอดีโคลน 12h3 และทุกหกฮิวเมไนซ์
igg4k . แอนติ - ฮิวเมน cd134 แอนติบอดีโคลน 12h3 ไม่มีผลผูกพันกับเยาะเย้ย -
transfected 293-f เซลล์ ในทางตรงกันข้าม การยึดเกาะของผู้ปกครองเมาส์แอนติ - ฮิวเมน cd134
แอนติบอดีโคลน 12h3 ไคเมริกฮิวเมน , igg4k แอนติ - ฮิวเมน cd134
12h3 แอนติบอดีโคลน ,