Specificity of detection: Specifici

Specificity of detection: Specificity was assessed by carrying out assays with purified DNA from 2 non target bacterial species, including Staphylococcus aureus (ATCC6538) and Salmonella enteritidis (ATCC13076). Genomic DNA was extracted from pure cultures of each bacteria. The real-time PCR reaction system and reaction conditions were the same as described above.• Sensitivity of detection: The real-time PCR assay established in this study should have high sensitivity, when the sample concentration of the Vibrio parahaemolyticus was low, they could also be accurately detected.To determine the sensitivity of the PCR assay for pure cultures, V. parahaemolyticus cultures were 10- fold serially diluted to the range from 107 to 101 CFU/mL and estimated by plate-counting method. A sample of each diluted specimen was added to 4 mL nutrient broth and cultured at 37°C for 12 h. Subsequently, 1 mL aliquot of the culture and each serial dilution were used to prepare DNA template by DNA extraction kit as described above.To determine the minimum detection level of purified V. parahaemolyticus DNA, serial dilutions of genomic DNA (ranging from 1 pg to 100 ng) from V. parahaemolyticus were prepared. Aliquots of each 10- fold serial dilution were used as templates for real-time PCR detection.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ความจำเพาะของการตรวจจับ: ประเมินความจำเพาะโดยการตรวจวิเคราะห์ด้วย DNA บริสุทธิ์จากแบคทีเรียที่ไม่ใช่เป้าหมาย 2 สายพันธุ์ รวมถึง Staphylococcus aureus (ATCC6538) และ Salmonella enteritidis (ATCC13076) จีโนมดีเอ็นเอถูกสกัดจากการเพาะเลี้ยงบริสุทธิ์ของแบคทีเรียแต่ละชนิด ระบบปฏิกิริยา PCR แบบเรียลไทม์และเงื่อนไขของปฏิกิริยาเหมือนกับที่อธิบายไว้ข้างต้น• ความไวของการตรวจจับ: การทดสอบ PCR แบบเรียลไทม์ที่สร้างขึ้นในการศึกษานี้ควรมีความไวสูง เมื่อความเข้มข้นของตัวอย่างของ Vibrio parahaemolyticus ต่ำ ก็สามารถตรวจจับได้อย่างแม่นยำเช่นกันเพื่อกำหนดความไวของการทดสอบ PCR สำหรับการเพาะเชื้อบริสุทธิ์ การเพาะเชื้อ V. พาราฮีโมไลติคัสถูกเจือจางแบบอนุกรม 10 เท่าจนถึงช่วงตั้งแต่ 107 ถึง 101 CFU/มล. และประมาณโดยวิธีการนับจาน ตัวอย่างของตัวอย่างที่เจือจางแต่ละชิ้นถูกเติมลงในน้ำซุปสารอาหาร 4 มล. และเพาะเลี้ยงที่ 37°C เป็นเวลา 12 ชั่วโมง ต่อจากนั้น ส่วนที่เพาะเลี้ยง 1 มิลลิลิตรและการเจือจางแบบอนุกรมแต่ละครั้งถูกใช้เพื่อเตรียมแม่แบบ DNA โดยชุดสกัด DNA ตามที่อธิบายไว้ข้างต้นเพื่อกำหนดระดับการตรวจจับขั้นต่ำของ V. parahaemolyticus DNA บริสุทธิ์ ได้มีการเตรียมการเจือจางลำดับของ DNA ของจีโนม (ตั้งแต่ 1 pg ถึง 100 ng) จาก V. parahaemolyticus ส่วนลงตัวของการเจือจางแบบอนุกรม 10 เท่าแต่ละครั้งถูกใช้เป็นเทมเพลตสำหรับการตรวจจับ PCR แบบเรียลไทม์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ความจำเพาะของการทดสอบ: การประเมินความจำเพาะโดยการวิเคราะห์ดีเอ็นเอบริสุทธิ์ของแบคทีเรียที่ไม่ใช่เป้าหมาย 2 ชนิด ได้แก่ Staphylococcus aureus (ATCC6538) และ Salmonella enteritis (ATCC13076) การสกัดดีเอ็นเอจีโนมจากวัฒนธรรมบริสุทธิ์ของแบคทีเรียแต่ละชนิด ระบบการตอบสนอง PCR แบบเรียลไทม์และเงื่อนไขการตอบสนองจะเหมือนกับที่กล่าวมาข้างต้น
•ความไวในการตรวจจับ: การทดสอบ PCR แบบเรียลไทม์ที่จัดตั้งขึ้นในการศึกษานี้ควรมีความไวสูงและยังสามารถตรวจจับได้อย่างแม่นยำเมื่อความเข้มข้นของตัวอย่างของ Vibrio parahemolytic อยู่ในระดับต่ำ
เพื่อตรวจสอบความไวในการตรวจจับ PCR กับวัฒนธรรมบริสุทธิ์วัฒนธรรม Vibrio parahemolytic จะเจือจางอย่างต่อเนื่อง 10 ครั้งถึง 107-101CFU / ml และประมาณการโดยวิธีการนับแผ่น ตัวอย่างของแต่ละตัวอย่างที่เจือจางจะถูกเพิ่มลงในน้ำซุปที่มีคุณค่าทางโภชนาการ 4 มิลลิลิตรและเพาะเลี้ยงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 12 ชั่วโมง หลังจากนั้นเทมเพลตดีเอ็นเอจะถูกจัดทำขึ้นโดยการสกัดดีเอ็นเอโดยใช้วัฒนธรรมที่เท่ากัน 1 มิลลิลิตรและสารเจือจางแต่ละชุด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ความจําเพาะของการทดสอบ:ความจําเพาะได้รับการประเมินโดยการวิเคราะห์ด้วยดีเอ็นเอบริสุทธิ์จากสายพันธุ์แบคทีเรียที่ไม่ใช่เป้าหมาย2ชนิดได้แก่staphylococcus aureus ( ATCC 6538 )และsalmonella enteritis ( ATCC 13076 ) ดีเอ็นเอจีโนมถูกสกัดจากวัฒนธรรมบริสุทธิ์ของแบคทีเรียแต่ละชนิด ระบบปฏิกิริยาPCRแบบเรียลไทม์และสภาวะการเกิดปฏิกิริยาเช่นเดียวกับข้างต้น
ความไวในการตรวจจับ:การตรวจหาPCRแบบเรียลไทม์ที่จัดตั้งขึ้นในการศึกษานี้ควรมีความไวสูงและสามารถตรวจจับได้อย่างแม่นยําเมื่อความเข้มข้นของVibrio parhemolyticusอยู่ในระดับต่ํา
เพื่อตรวจสอบความไวของการทดสอบPCRต่อวัฒนธรรมบริสุทธิ์วัฒนธรรมVibrio parhemolyticถูกเจือจางอย่างต่อเนื่องเป็น10เท่าถึง107ถึง101 CFU/mlและได้รับการประเมินโดยการนับแผ่น ตัวอย่างของตัวอย่างที่เจือจางแต่ละตัวถูกเพิ่มลงในซุปโภชนาการ4มิลลิลิตรและเลี้ยงที่อุณหภูมิ37°Cเป็นเวลา12ชั่วโมง ต่อจากนั้นเทมเพลตดีเอ็นเอถูกจัดทําขึ้นโดยใช้ตัวเร่งปฏิกิริยาการสกัดดีเอ็นเอ1มิลลิลิตรและตัวเจือจางต่อเนื่องแต่ละตัว
เพื่อตรวจสอบระดับต่ําสุดของการตรวจหาเชื้อVibrio parhemolytic DNAบริสุทธิ์ได้มีการเตรียมสารเจือจางของดีเอ็นเอจีโนมของVibrio parhemolytic (ช่วงตั้งแต่1 pgถึง100 ng) ตัวอย่างที่เท่ากันของการเจือจาง10ครั้งแต่ละชุดใช้เป็นแม่แบบสําหรับการตรวจหาPCRแบบเรียลไทม์