In vitro dermal exposure experiment

In vitro dermal exposure experiments were performed along the
principles of good laboratory practice and in compliance with the
OECD guidelines for in vitro dermal absorption testing (OECD, 2004).
The handling instructions and performance characteristics of EPISKIN™
3D-human skin equivalent (3D-HSE) model were also taken into
consideration. The study protocol received the required ethical approval
(# ERN_12-1502) from the University of Birmingham's Medical,
Engineering and Mathematics Ethical Review Committee.
2.1. Chemicals and standards
All solvents and reagents used for preparation, extraction, clean-up
and instrumental analysis of samples were of HPLC grade and were
obtained from Fisher Scientific (Loughborough, UK). Neat standards
(purity N 98%) of tris (2-chloroethyl) phosphate (TCEP), tris (2-
chloroisopropyl) phosphate (TCPP), tris (1,3-dichloro-2-propyl) phosphate
(TDCIPP), were purchased from Sigma-Aldrich (Gillingham,
Dorset, UK). Isotopically labelled d15-triphenyl phosphate (d15-TPhP)
and d27-tri-n-butyl phosphate (d27-TnBP) (50 μg/mL in toluene,
purity N 99%) were obtained from Wellington Laboratories (Guelph,
ON, Canada). Florisil® SPE cartridges were purchased from Supelco™
(Bellefonte, Pennsylvania, USA). All culture medium components
(Table SI-1) were purchased from Sigma-Aldrich UK (Gillingham,
Dorset, UK).
2.2. Test matrices
2.2.1. Human skin. Freshly excised, healthy human upper breast skin
was obtained via Caltag Medsystems Ltd. (Buckingham, UK) from
three consented female adults (aged 35, 37 and 34 years) following
plastic surgery. Selection criteria included: Caucasian, no stretchmarks,
no scars, no hair and full thickness skin without adipose tissue. Skin
was kept on ice for no longer than 4 h prior to the onset of the ex vivo
skin absorption studies. Upon receipt, the ex vivo skin samples were
equilibrated for 1 h with 3 mL of DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's
Medium)-based (Sigma-Aldrich, UK) culture medium (Table SI-1) at
5% CO2 and 37 °C before use in permeation experiments.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ดำเนินการทดลองในหลอดทดลองสัมผัสที่ผิวหนังตามหลักการ ของการปฏิบัติในห้องปฏิบัติการที่ดี และสอดคล้องกับการการแนวทาง OECD การดูดซึมในหลอดทดลองแท้ทดสอบ (OECD, 2004)คำแนะนำการจัดการและลักษณะการทำงานของ EPISKIN™ผิวหนังมนุษย์ 3D (3D-HSE) ที่เทียบเท่ากับรุ่นได้ถูกนำมาพิจารณา โพรโทคอลการศึกษาได้รับการอนุมัติจริยธรรมที่จำเป็น(# ERN_12-1502) จากมหาวิทยาลัย Birmingham ทางการแพทย์วิศวกรรมศาสตร์ และคณะกรรมการจริยธรรมของคณิตศาสตร์2.1. เคมีและมาตรฐานทุกตัวทำละลายและสารรีเอเจนต์ที่ใช้สำหรับเตรียม ดูด การล้างและตัวอย่างเครื่องมือวิเคราะห์ HPLC เกรด และมีได้รับจากวิทยาศาสตร์ฟิชเชอร์ (อันดับด้วย UK) มาตรฐานเรียบร้อย(ความบริสุทธิ์ N 98%) ของฟอสเฟตทริส (2-chloroethyl) (TCEP), ทริส (2-ทริส (1, 3-dichloro-2-โพรพิล) ฟอสเฟต ฟอสเฟต chloroisopropyl) (TCPP)(TDCIPP), ซื้อจาก Sigma Aldrich (Gillinghamดอร์เซ็ท สหราชอาณาจักร) ติดป้าย isotopically d15-triphenyl ฟอสเฟต (d15-TPhP)และ d27-ไตรเอ็นบิวทิลฟอสเฟต (d27-TnBP) (50 μ/mL ในโทลูอีนความบริสุทธิ์ N 99%) ได้รับจากห้องปฏิบัติการ (กวัฟล เวลลิงตันON แคนาดา) ตลับ Florisil® SPE ซื้อจาก Supelco™(Bellefonte เพนซิลวาเนีย สหรัฐอเมริกา) ส่วนประกอบของสารทั้งหมด(ตาราง SI 1) ซื้อจาก Sigma Aldrich UK (Gillinghamดอร์เซ็ท สหราชอาณาจักร)2.2. ทดสอบเมทริกซ์2.2.1. มนุษย์ผิว ผิวสรรพสามิตสด มีสุขภาพดีบนเต้านมของมนุษย์มาจากทาง จำกัด Medsystems Caltag (บัคกิ้งแฮม สหราชอาณาจักร)สามยินยอมผู้ใหญ่หญิง (อายุ 35, 37 และ 34 ปี) ต่อไปนี้การทำศัลยกรรมพลาสติก เงื่อนไขการเลือกรวม: ผิวขาว ไม่บ่อยแค่ไม่มีรอยแผลเป็น ไม่มีผมและความหนาเต็มผิวหนังไม่ มีเนื้อเยื่อไขมัน ผิวถูกเก็บไว้บนน้ำแข็งไม่เกิน 4 ชั่วโมงก่อนการโจมตีของ ex vivoศึกษาการดูดซึมของผิว เมื่อได้รับ ex vivo ผิวการเก็บตัวอย่างequilibrated สำหรับ h 1 กับ 3 mL ของ DMEM (ของ Dulbecco ปรับอีเกิ้ลกลาง-ขึ้นปานกลาง (Sigma Aldrich, UK) วัฒนธรรม (ตารางศรี-1)5% CO2 และ 37 ° C ก่อนที่จะใช้ในการทดลองการซึมผ่าน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อผิวหนังทดลองการสัมผัสได้ดำเนินการตาม
หลักการของการปฏิบัติในห้องปฏิบัติการที่ดีและสอดคล้องกับ
แนวทางของ OECD สำหรับในหลอดทดลองทดสอบการดูดซึมทางผิวหนัง (OECD, 2004).
คำแนะนำการจัดการและลักษณะการทำงานของ EPISKIN ™
3D มนุษย์เทียบเท่าผิว (3D- HSE) รูปแบบนอกจากนี้ยังได้นำเข้าสู่การ
พิจารณา โปรโตคอลการศึกษาที่ได้รับการอนุมัติจริยธรรมที่จำเป็น
(# ERN_12-1502) จากมหาวิทยาลัยเบอร์มิงแฮมแพทย์,
วิศวกรรมและคณิตศาสตร์คณะกรรมการตรวจสอบจริยธรรม.
2.1 สารเคมีและมาตรฐาน
ตัวทำละลายและสารเคมีทั้งหมดที่ใช้สำหรับการเตรียมการสกัดการทำความสะอาด
และการวิเคราะห์ด้วยเครื่องมือของกลุ่มตัวอย่างเป็นของเกรด HPLC และ
ได้รับจากฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ (Loughborough สหราชอาณาจักร) มาตรฐานเรียบร้อย
(ความบริสุทธิ์ N 98%) ของ บริษัท ทริส (2 chloroethyl) ฟอสเฟต (TCEP) ทริส (2-
chloroisopropyl) ฟอสเฟต (TCPP) ทริสเรทติ้ง (1,3-dichloro-2-propyl) ฟอสเฟต
(TDCIPP) กำลังซื้อ จาก Sigma-Aldrich (จิลลิ่ง,
ดอร์เซตสหราชอาณาจักร) ที่มีป้ายกำกับ isotopically D15-triphenyl ฟอสเฟต (D15-TPhP)
และ D27 Tri-n-butyl ฟอสเฟต (D27-TnBP) (50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรในโทลูอีน
บริสุทธิ์ N 99%) ที่ได้รับจากเวลลิงตันห้องปฏิบัติการ (กู
ON, Canada) . ตลับFlorisil® SPE ที่ซื้อมาจาก Supelco ™
(เบลลาฟอน, Pennsylvania, USA) ทุกองค์ประกอบกลางวัฒนธรรม
(ตารางที่ SI-1) ที่ซื้อมาจาก Sigma-Aldrich สหราชอาณาจักร (จิลลิ่ง,
ดอร์เซตสหราชอาณาจักร).
2.2 การฝึกอบรมการทดสอบ
2.2.1 ผิวหนังของมนุษย์ สดตัดผิวหนังเต้านมบนมนุษย์มีสุขภาพดี
ที่ได้รับผ่านทาง Caltag Medsystems จำกัด (บักกิ้งแฮม, สหราชอาณาจักร) จาก
สามยินยอมผู้ใหญ่เพศหญิง (อายุ 35, 37 และ 34 ปี) ต่อไปนี้
การทำศัลยกรรมพลาสติก เกณฑ์การคัดเลือกรวม: คนผิวขาวไม่ stretchmarks,
ไม่มีรอยแผลเป็นไม่มีผมและผิวหนาเต็มโดยไม่ต้องเนื้อเยื่อไขมัน ผิวหนัง
ถูกเก็บไว้บนน้ำแข็งไม่เกิน 4 ชั่วโมงก่อนที่จะเริ่มมีอาการของอดีตร่างกาย
การศึกษาการซึมผ่านผิวหนัง เมื่อได้รับการ ex vivo ตัวอย่างผิวถูก
equilibrated เป็นเวลา 1 ชั่วโมงมี 3 มล DMEM (Dulbecco ของ Modified นกอินทรี
ขนาดกลาง) -based (Sigma-Aldrich สหราชอาณาจักร) กลางวัฒนธรรม (ตารางที่ SI-1) ที่
5% CO2 และ 37 องศาเซลเซียสก่อน ใช้ในการทดลองการซึมผ่าน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในหลอดทดลองตามเนื้อสัมผัสหลักปฏิบัติที่ดีในห้องปฏิบัติการและในสอดคล้องกับโออีซีดีแนวทางในการทดสอบการดูดซึมทางผิวหนัง ( OECD , 2004 )การจัดการคำสั่งและลักษณะงานของ episkin ™3 มิติของมนุษย์ผิวเทียบเท่า ( 3d-hse ) รุ่นยังามาการพิจารณา การศึกษาขั้นตอนได้รับอนุมัติเป็นจริยธรรม( # ern_12-1502 ) จากมหาวิทยาลัยเบอร์มิงแฮมของแพทย์คณิตศาสตร์และวิศวกรรมจริยธรรมคณะกรรมการตรวจสอบ .2.1 . สารเคมี และ มาตรฐานตัวทำละลายและสารเคมีที่ใช้ในการเตรียม , การสกัด , ทำความสะอาดและการวิเคราะห์ของเครื่องมือ HPLC และจำนวนของนักเรียนชั้นประถมศึกษาปีที่ที่ได้รับจากฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ ( Loughborough , UK ) มาตรฐานเรียบร้อย( ความบริสุทธิ์ ( 98% ) ของบริษัท ( 2-chloroethyl ) ฟอสเฟต ( เกี่ยวกับ ) , ทริส ( 2chloroisopropyl ) ฟอสเฟต ( tcpp ) , ทริส ( 1,3-dichloro-2-propyl ) ฟอสเฟต( tdcipp ) ซื้อมาจากซิกม่า Aldrich ( Gillingham ,เดวอน สหราชอาณาจักร ) isotopically labelled d15 ไตรฟีนิลฟอสเฟต ( d15 tphp )และ d27-tri-n-butyl ฟอสเฟต ( d27 tnbp ) ( 50 μ g / ml ในโทลูอีนความบริสุทธิ์ ( 99% ) ที่ได้รับจากห้องปฏิบัติการ ( Guelph , เวลลิงตันในแคนาดา ) florisil ®ตลับเอสพี ซื้อมาจาก supelco ™( bellefonte , Pennsylvania , สหรัฐอเมริกา ) ทั้งหมดส่วนประกอบของอาหารเลี้ยงเชื้อ( โต๊ะ si-1 ) ซื้อจาก ซิกม่า Aldrich ( Gillingham , สหราชอาณาจักรเดวอน สหราชอาณาจักร )2.2 . ทดสอบเมทริกซ์2.2.1 . ผิวหนังของมนุษย์ ตัดสด ๆบนผิวหนังมนุษย์สุขภาพเต้านม ,ได้ผ่าน caltag medsystems จำกัด ( Buckingham , สหราชอาณาจักร ) จากสามยินยอมผู้ใหญ่เพศหญิง ( อายุ 35 , 37 และ 34 ปี ) ต่อไปศัลยกรรมพลาสติก เกณฑ์การคัดเลือกรวม : ผิวขาว ไม่มี stretchmarks ,ไม่มีแผลเป็น ไม่มีขนและผิวหนังหนาเต็มโดยไม่ต้องไขมันเนื้อเยื่อ ผิวถูกเก็บไว้ในที่เย็นไม่เกิน 4 ชั่วโมง ก่อนที่จะเริ่มมีอาการของร่างกาย แฟนเก่าการศึกษาการดูดซึมของผิวหนัง เมื่อได้รับอาหารผิวตัวอย่างแฟนเก่าequilibrated เป็นเวลา 1 ชั่วโมง กับ 3 มล. ของ dmem ( ดัลเบโค่ก็ดัดแปลงของนกอินทรีขนาดกลาง ) - based ( ซิกม่า Aldrich UK ) อาหารเลี้ยงเชื้อ ( ตาราง si-1 )5% CO2 และ 37 ° C ก่อนที่จะใช้ในการศึกษาทดลอง