Investigation on Large Molecule Per

Investigation on Large Molecule Permeation through Liposome Lipid Bilayer Induced by Microplasma Irradiation
Gene transfection
Gene transfection

Application area
Gene therapy
Regenerative medicine
Drug discovery
Plant breeding
Problems for conventional methods
Lipofection (chemical method)
High cost for reagent Toxicity of reagent
Electroporation (physical metod)
Cell viability
Vitral vector (biological method)
Pathogenicity expression Neoplastic transformation
Microplasma irradiation ethod
Fluorescent dye(YoYo-1, -1.3 kDa)
Plasmid (pCX-EGFP encoding, -3.6 MDa)

Objective and experiment
Assumed process during transfection
Effective factors generated in the microplasma


Electrical factors E field, current, charge Chemical factors Radicals, RONS
Process on cell membrane
Electrical process Charge compensation Poration (current, shock wave)
Biological process Cell activation Endocytosis
Chemical process Poration (oxidation)

Objective of the present study
-Toclarify the key factors and processes for plasma gee transfection
-Liposome is employed to eliminate the biological process
Preparation of liposome
Natural swelling method
Lipid
1,2-Dioleoyl-snglycero-3-Phosphatidycholine
Experiment 1:
Verification of membrane poration
Experiment 2:
Verification of charge accumulation
Plasma irradiation to liposome suspension (1 mM,4μl/well)
Liposome suspension (30 μl,2 mM) was poured to electrophoresis chamber diluted with DI water (170 μl)
Observatio of electrophoresis
Voltage 20 V
Duration 15 s

Results and discussion
Result 1 : Verification of membrane poration
Single irradiation (0.05-20 ms)
Multiple irradiation (5 ms*n)
Monotonic decrease in fluorescence and liposome size by plasma irradiation time
Large molecule transfer by membrane poration was verified
Multiple irradiation (5 ms*n) showed less decrease in fluorescence and liposome size than one time irradiation (5n ms)
Repair of the poration between each irradiation was suggested
Result 2 : Verification of charge accumulation
Single irradiation (0.05-20 ms)
Multiple irradiation (5 ms*n)
Neutralization of negative charge on the membrane was observed
>> 0.1 ms irradiation is enough for neutralization of 102 liposomes
>> Enhancement of contact probability between cells and DNAs in the plasma gene
transfection process was suggested

Conclusion
As key processes for plasma gene transfection, the following processes were suggested
- Membrane poration (repaired after 5 ms irradiation)
– Enhancement of contact probability between cells and DNAs by charge neutralization

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การตรวจสอบในการซึมผ่านโมเลกุลขนาดใหญ่ผ่าน Liposome ไขมัน bilayer เกิดจาก Microplasma
ฉายรังสียีนtransfection
ยีน transfection พื้นที่การประยุกต์ใช้ยีนบำบัดฟื้นฟูยาการค้นพบยาเสพติดการปรับปรุงพันธุ์พืชปัญหาสำหรับวิธีการเดิมLipofection (วิธีเคมี) ค่าใช้จ่ายสูงสำหรับสารพิษของสารElectroporation (metod ทางกายภาพ) มีชีวิตเซลล์Vitral เวกเตอร์ (วิธีทางชีวภาพ) การเปลี่ยนแปลงการแสดงออกของการเกิดโรคเนื้องอกฉายรังสี Microplasma ethod ย้อมสีเรืองแสง (YoYo-1 -1.3 กิโลดาลตัน) พลาสมิด (การเข้ารหัส PCX-EGFP, -3.6 MDA) วัตถุประสงค์และการทดสอบขั้นตอนการสันนิษฐานในช่วง transfection ปัจจัยที่มีผลบังคับใช้สร้างขึ้นใน microplasma ปัจจัยไฟฟ้า สนามอีในปัจจุบันคิดค่าบริการอนุมูลปัจจัยเคมี Rons กระบวนการในเยื่อหุ้มเซลล์กระบวนการไฟฟ้าค่าชดเชย Poration (ปัจจุบันคลื่นช็อก) กระบวนการทางชีวภาพยืนยันการใช้งานโทรศัพท์มือ endocytosis กระบวนการทางเคมี Poration (ซิเดชั่น) วัตถุประสงค์ของการศึกษาในปัจจุบัน-Toclarify ปัจจัยสำคัญและกระบวนการสำหรับ พลาสม่า gee transfection -Liposome เป็นลูกจ้างที่จะกำจัดกระบวนการทางชีวภาพเตรียมลิโปโซมวิธีการบวมธรรมชาติไขมัน1,2-Dioleoyl-snglycero-3-Phosphatidycholine การทดลองที่ 1: การตรวจสอบของเมมเบรน poration การทดลองที่ 2: การตรวจสอบค่าใช้จ่ายของการสะสมการฉายรังสีพลาสม่าที่จะระงับลิโปโซม ( 1 มิลลิ, 4μl / ดี) ระงับไลโปโซม (30 ไมโครลิตร 2 มิลลิ) ถูกเทไปยังห้องอิเจือจางด้วยน้ำ DI (170 ไมโครลิตร) Observatio ของอิเล็กแรงดันไฟฟ้า20 V ระยะเวลา 15 วินาทีผลและการอภิปรายผลที่1: การตรวจสอบของเมมเบรน poration ฉายเดี่ยว (0.05-20 มิลลิวินาที) การฉายรังสีหลาย (5 ms * n) ลดลงต่อเนื่องในการเรืองแสงและขนาด liposome ตามเวลาการฉายรังสีพลาสม่าโอนโมเลกุลขนาดใหญ่โดยเมมเบรนporation ถูกตรวจสอบการฉายรังสีหลาย(5 ms * n) พบว่าลดลงน้อยกว่าในขนาดที่เรืองแสงและไลโปโซมกว่า การฉายรังสีครั้งหนึ่ง (5n มิลลิวินาที) ซ่อมแซม poration ระหว่างแต่ละฉายรังสีได้รับการแนะนำผล2: ตรวจสอบค่าใช้จ่ายของการสะสมฉายเดี่ยว(0.05-20 มิลลิวินาที) การฉายรังสีหลาย (5 ms * n) การวางตัวเป็นกลางของประจุลบในเมมเบรนได้สังเกต>> 0.1 มิลลิวินาทีการฉายรังสีก็เพียงพอสำหรับการวางตัวเป็นกลางของไลโปโซม 102 >> การเพิ่มประสิทธิภาพของความน่าจะติดต่อระหว่างเซลล์และดีเอ็นเอในยีนพลาสมากระบวนการtransfection ก็ชี้ให้เห็นข้อสรุปในฐานะที่เป็นกระบวนการที่สำคัญสำหรับtransfection ยีนพลาสม่ากระบวนการต่อไปนี้ได้รับการแนะนำ- poration เมมเบรน (ซ่อมแซมหลังจาก 5 มิลลิวินาที การฉายรังสี) - การเพิ่มประสิทธิภาพของความน่าจะติดต่อระหว่างเซลล์และดีเอ็นเอโดยการวางตัวเป็นกลางค่าใช้จ่าย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การตรวจสอบโมเลกุลใหญ่ซึมผ่านไลโปโซม bilayer ไขมันที่เกิดจากการฉายรังสีสำหรับยีนยีนโรค




สำหรับพื้นที่การใช้งานยีนบำบัดเวชศาสตร์



การค้นพบยาพันธุ์ปัญหาวิธีปกติ
ไลโปเฟคชั่น ( วิธีทางเคมี )
ค่าใช้จ่ายสูงสำหรับสารเคมีพิษของสารเคมี
electroporation ( metod ทางกายภาพ )

เซลล์เวกเตอร์ vitral ( วิธีการทางชีวภาพ ) การเปลี่ยนแปลงการแสดงออกของโรคเนื้องอก


ethod รังสีเรืองแสงย้อม ( yoyo-1 , - 1.3 กิโลดาลตัน )
พลาสมิด ( PCX egfp เข้ารหัส , - 3.6 MDA )


ถือว่าวัตถุประสงค์และกระบวนการในระหว่างการทดลอง transfection
มีประสิทธิภาพปัจจัยที่สร้างขึ้นในความเศร้าโศก


ไฟฟ้าปัจจัย E ฟิลด์ปัจจุบัน ประจุ ปัจจัยทางเคมีสารรอน
,กระบวนการบนเยื่อหุ้มเซลล์
กระบวนการชดเชย poration ประจุไฟฟ้า ( คลื่นช็อกปัจจุบัน ) poration กระตุ้นเซลล์เอนโดไซโทซิส

ขั้นตอนกระบวนการทางเคมีชีวภาพ ( ออกซิเดชัน )

วัตถุประสงค์ของการวิจัย
- ถึงปัจจัยและกระบวนการพลาสมา Gee ค
- ไลโปโซมมาใช้เพื่อลดกระบวนการทางชีวภาพ

ธรรมชาติ การเตรียมไลโปโซม บวมไขมันวิธี

1การทดลองที่ 1 :

2-dioleoyl-snglycero-3-phosphatidycholine การตรวจสอบของเยื่อ poration
การทดลองที่ 2 :
ตรวจสอบค่าใช้จ่ายสะสม
พลาสมารังสีกับไลโปโซมระงับ ( 1 มม. 4 μ L / )
ไลโปโซมระงับ ( 30 μ l , 2 มม. ) เป็นเทอเรส ห้องเจือจางด้วยน้ำ DI ( 170 μ L )
observatio ของอิเลคโตรโฟเรซีส
v
แรงดัน 20 ระยะเวลา 15 s


ผลและการอภิปรายผล 1การตรวจสอบของเยื่อ poration
การฉายเดี่ยว ( 0.05-20 MS )
หลายการฉายรังสี ( 5 ms * N )
เนื่องในการลดขนาด และไลโพโซม โดยการฉายรังสีพลาสม่าขนาดใหญ่เวลา
โมเลกุลโอนโดยเยื่อ poration ตรวจสอบการฉายรังสี ( 5 ms หลาย
* n ) พบน้อยในการลดขนาดและไลโปโซม กว่าเวลาการฉายรังสี ( 5N นางสาว )
ซ่อมของแต่ละ poration ระหว่างการฉายรังสีแนะนำ
ผล 2 : ตรวจสอบค่าใช้จ่ายสะสม
เดียวฉายรังสี ( 0.05-20 MS หลายการฉายรังสี ( 5 ms )
* n )
การวางตัวเป็นกลางของประจุลบบนเยื่อหุ้มพบ
> > 0.1 ms การฉายรังสีเพียงพอสำหรับการวางตัวเป็นกลางของ 102 โซม
> > ความน่าจะเป็น ระหว่างการติดต่อ เซลล์และยีนจำเพาะในพลาสมา
ได้เสนอกระบวนการค


( สรุปเป็นคีย์สำหรับนักลงทุนจีน พลาสม่า , กระบวนการต่อไปนี้แนะนำ
- เยื่อ poration ( ซ่อมแซมหลังการฉายรังสี 5 ms )
) การติดต่อระหว่างเซลล์ โดยคิดค่าความน่าจะเป็นและการวางตัวเป็นกลาง
แถบ