4. Plant–microbe interactionsGage e

4. Plant–microbe interactions
Gage et al. (1996) labelled Rhizobium meliloti MB5OI with the gfp marker via the broad-host-range plasmid, pTB93F. The heterologous gfp was expressed constitutively in this microorganism. Visualization of the R. meliloti cells during infection of the root and subsequent nodulation was observed. The gfp system has also been used to visualize bacterial distributions on root surfaces (Fig. 1d). Bloemberg et al. (1997) constructed a gfp plasmid (pGBS) which was maintained in Pseudornonas fluorescens WC5365 cells for 7 days without antibiotic selective pressure. The gfp was constitutively expressed in the cells without nutrients being supplied. Under laboratory conditions, the gfp-labelled WCS36S cells were observed to form microcolonies at the borders of adjacent epithelial cells on the root surface of tomato seedlings. Pseudomonas fluorescens A506 has been marked chromosomally with a red-shift gfp variant (Tombolini et al., 1997). Because of the improved fluorescent intensity of the red-shift gfp and a strong constitutive promoter (PpsbA from Amaranthus hybridus), individual cells were visualized on the root surface of Lotus japonicus plants using epifluorescent confocal laser scanning microscopy.








5. Biofilms
The gfp system is ideal for studying multiplespecies bacterial communities in biofilms and adhesion of bacteria to flocs in activated sludge. Mo¨ller et al. (1998) demonstrated that gfp-labelled Pseudomonas putida RI tended to colonize the outermost layer of a mixed-species biofilm while an Acinetobacter sp. strain C6 primarily attached to the substratum of the biofilm. Skillman et al. (1998) visualized bacterial distribution in dual-species biofilms using a gfp-labelled Enterobacter. agglomerans strain and an unlabelled Kiebsiella pneumoniae strain. Sixteen-hour biofilms were stained using propidium iodide (P1) (did not mask the GFP), which enabled the reseachers to visualize the spatial distribution of the gfp-labelled cells in green or yellow, and the P1 stained cells as red using a violet-blue excitation filter (395–446 nm) on a microscope.

The two bacteria were often closely associated in microcolonies, and the reseachers concluded that surface-associated macromolecules form the basis of these interactions. They suggested that this convenient technique enabled them to observe these unique interactions between the bacteria and to determine the true properties of the resultant biofilm.
A gfp-labelled Pseudomonas putida has been used to study bacterial survival in activated sludge (Eberl et al., 1997). Free swimming cells were observed between sludge flocs immediately after their introduction and after 2 mm, protozoan grazing on the labelled cells was observed. After 3 days incubation, few fluorescent cells were detectable, but most of these cells were incorporated into the sludge flocs suggesting a protective role of the floc from predatory protozoa. The association between the GFP9 marked cells and flocs was visualized using epifluorescent microscopy. Using gfp-labelled E. coli and Serratia marcescens strains, Olofsson et al. (1998) determined that cell surface hydrophobicity degradwas an important factor in bacterial adhesion to flocs. Epifluorescent microscopy enabled the visualization and enumeration of free GFP marked cells which could be distinguished in the activated sludge. Confocal laser scanning microscopy (CLSM) of the gfp-
labelled bacteria enabled a 3-dimensional profile to be produced which showed that the two bacteria had very different attachment patterns in the flocs, and that cells can penetrate the flocs through channels and pores. The authors suggested the combination of epifluorescent and confocal laser scanning microscopy to visualize GFP-marked cells offers great potential for further investigations. Their approach resulted in a better understanding of bacterial adhesion mechanisms and may assist in improving the effectiveness of wastewater treatment.





6. Biodegradation
In many biodegradation studies in the laboratory, bacterial cells which are metabolically capable of degrading or mineralizing a pollutant are added to contaminated environmental samples to determine biodegradation
of target compound(s) in the environment. Cell counts, survival, metabolic activity, spatial location and degradative capability are all important factors that provide valuable information to advance our understanding of the processes occur ring. The use of the GFP as a marker has allowed researchers to detect the added cells, and determine more precise data about cell counts, survival and spatial location than has previously been possible. In our laboratory, the GFP marker was employed to study the survival of a p-nitrophenol
(PNP)-degrading Moraxella strain in soil. The chromosomally gfp-labelled Moraxella sp. strain G21 had been constructed using a mini-Tn5-gfp suicidal plasmid (see Fig. 2) (Tresse et al., 1998). The labeled bacteria degraded up to 1440 pM PNP, both in broth and soil, to the same extent as the parent strain. Survival studies indicated that individual green fluorescent colonies of G21 were detected up to 2 weeks after inoculation in soil samples. It is noteworthy that although only 0.1% of the original inoculum was detected by plating, 58% of the radiolabelled PNP was mineralized. This suggests that not all cells were culturable, or that there may have been an indigenous population of PNP-degrading microorganisms present in the soil. Errampalli et al. (1998) detected GFP-marked Pseudomonas sp. UGI4Gr up to 13 months after inoculation into creosote contaminated soil. By inserting the mini Tn5-gfp into the chromosome of a phenanthrenedegrading bacterium, a green fluorescent mutant, Pseudomonas sp. UGI4Gr, was obtained. The gfp was stable in UGi4Gr and did not affect mineralization of C-labelled phenanthrene which verified the gfp insertion had not interfered with phenan threne-degradation genes. Colony forming units were used to enumerate GFP-marked cells from soil samples and UG14Gr colonies on solid agar plates were detected using a hand-held UV lamp. Detection of GFP-marked cells for more than a year after inoculation into soil microcosms demonstrated the GFP marker can be useful for long-term bacterial survival in soil biodegradation or studies.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

4 ปฏิสัมพันธ์ระหว่างพืชจุลินทรีย์-
Gage et al, (1996) ระบุว่าไรโซเบียม meliloti mb5oi ด้วยเครื่องหมาย GFP ผ่านทางกว้างเป็นเจ้าภาพช่วงพลาสมิด ptb93f GFP heterologous แสดงออก constitutively ในจุลินทรีย์นี้ การสร้างภาพของ r เซลล์ meliloti ระหว่างการติดเชื้อจากเกิดปมรากและต่อมาก็สังเกตเห็นระบบ GFP ได้ถูกนำมาใช้เพื่อให้มองเห็นการกระจายของแบคทีเรียบนพื้นผิวราก (รูปที่ 1D) อัล bloemberg et (1997) สร้าง GFP พลาสมิด (pgbs) ซึ่งได้รับการเก็บรักษาไว้ใน pseudornonas fluorescens wc5365 เซลล์เป็นเวลา 7 วันโดยไม่ต้องดันเลือกยาปฏิชีวนะ GFP แสดงออก constitutively ในเซลล์โดยไม่ต้องสารอาหารที่ถูกจัดจำหน่าย ภายใต้เงื่อนไขการทดลองในห้องปฏิบัติการGFP ติดฉลากเซลล์ wcs36s ถูกตั้งข้อสังเกตถึงรูปแบบ microcolonies ที่ชายแดนของเซลล์เยื่อบุผิวที่อยู่ติดกันบนพื้นผิวรากของต้นกล้ามะเขือเทศ Pseudomonas fluorescens a506 ถูกทำเครื่องหมาย chromosomally กับสีแดงกะตัวแปร GFP (tombolini et al. 1997)เพราะของความเข้มแสงที่ดีขึ้นของสีแดง GFP-shift และผู้ก่อการที่เป็นส่วนประกอบที่แข็งแกร่ง (ppsba จาก Amaranthus ไฮบริด), แต่ละเซลล์เป็นรูปธรรมบนพื้นผิวรากของบัว japonicus พืชโดยใช้เลเซอร์ confocal epifluorescent กล้องจุลทรรศน์.








5 ไบโอฟิล์ม
ระบบ GFP เหมาะสำหรับการศึกษาชุมชนแบคทีเรีย multiplespecies ในไบโอฟิล์มและการยึดเกาะของแบคทีเรียกลุ่มแบคทีเรียในตะกอน โม¨ ller เอตอัล (1998) แสดงให้เห็นว่า GFP-labeled ri Pseudomonas putida มีแนวโน้มที่จะอพยพไปอยู่ชั้นนอกสุดของไบโอฟิล์มผสมสายพันธุ์ในขณะที่ SP Acinetobacter สายพันธุ์ c6 แนบเนื่องกับรากฐานของไบโอฟิล์ม อัล Skillman et(1998) มองเห็นการกระจายของแบคทีเรียในแผ่นชีวะที่สองสายพันธุ์ที่ใช้ GFP-labeled Enterobacter สายพันธุ์ agglomerans และป้ายกำกับความเครียด pneumoniae kiebsiella ไบโอฟิล์มสิบหกชั่วโมงมีการย้อมโดยใช้ไอโอไดด์ propidium (p1) (ไม่ได้หน้ากาก GFP) ซึ่งเปิดการใช้งาน Reseachers เห็นภาพการกระจายของเซลล์ GFP ติดฉลากสีเขียวหรือสีเหลือง,และเซลล์สี p1 เป็นสีแดงโดยใช้ตัวกรองการกระตุ้นสีม่วงสีฟ้า (395-446 นาโนเมตร) ในกล้องจุลทรรศน์

สองเชื้อแบคทีเรียที่มักจะถูกที่เกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดใน microcolonies และ Reseachers สรุปว่าโมเลกุลพื้นผิวที่เกี่ยวข้องเป็นพื้นฐานของการมีปฏิสัมพันธ์เหล่านี้พวกเขาชี้ให้เห็นว่าเทคนิคนี้ช่วยให้พวกเขาสะดวกที่จะสังเกตไม่ซ้ำกันเหล่านี้มีปฏิสัมพันธ์ระหว่างเชื้อแบคทีเรียและกำหนดคุณสมบัติที่แท้จริงของฟิล์มผลลัพธ์.
GFP-labeled Pseudomonas putida ถูกนำมาใช้เพื่อศึกษาความอยู่รอดของแบคทีเรียในตะกอน (Eberl et al. 1997)เซลล์ที่ว่ายน้ำได้รับการตั้งข้อสังเกตระหว่างกลุ่มแบคทีเรียตะกอนทันทีหลังจากการแนะนำของพวกเขาและหลังจาก 2 มม. เลี้ยงโปรโตซัวในเซลล์ที่ติดฉลากก็สังเกตเห็น หลังจาก 3 วันของระยะฟักตัวเซลล์เรืองแสงที่ตรวจพบไม่กี่คน แต่ส่วนมากของเซลล์เหล่านี้ถูกรวมเข้าไว้ในกลุ่มแบคทีเรียตะกอนบอกบทบาทป้องกันการลอยตัวจากโปรโตซัวล่าความสัมพันธ์ระหว่าง gfp9 เซลล์ที่ทำเครื่องหมายไว้และกลุ่มแบคทีเรียที่ได้รับการมองเห็นโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ epifluorescent โดยใช้ e-GFP ที่ติดฉลาก coli และ Serratia marcescens สายพันธุ์, et al, โอลอฟ (1998) ระบุว่าไม่ชอบน้ำของเซลล์ผิว degradwas เป็นปัจจัยสำคัญในการยึดเกาะของเชื้อแบคทีเรียที่กลุ่มแบคทีเรียกล้องจุลทรรศน์ epifluorescent เปิดการใช้งานการสร้างภาพและการแจงนับจาก GFP เครื่องหมายเซลล์ซึ่งอาจจะแตกต่างไปในตะกอน เลเซอร์สแกนกล้องจุลทรรศน์ confocal (CLSM) ของ GFP-
แบคทีเรียที่ติดฉลากรายละเอียดการใช้งาน 3 มิติที่จะผลิตซึ่งแสดงให้เห็นว่าทั้งสองเชื้อแบคทีเรียที่มีรูปแบบสิ่งที่แนบมาที่แตกต่างกันมากในกลุ่มแบคทีเรีย,และเซลล์ที่สามารถเจาะกลุ่มแบคทีเรียผ่านช่องทางและรูขุมขน ผู้เขียนชี้ให้เห็นการรวมกันของการใช้กล้องจุลทรรศน์ confocal epifluorescent และเลเซอร์สแกนเพื่อให้มองเห็นเซลล์ GFP เครื่องหมายบริการที่มีศักยภาพที่ดีสำหรับการสืบสวนต่อไป วิธีการของพวกเขาส่งผลให้เกิดความเข้าใจที่ดีของกลไกการยึดเกาะของเชื้อแบคทีเรียและอาจช่วยในการปรับปรุงประสิทธิภาพของระบบบำบัดน้ำเสีย.





6
ย่อยสลายในการศึกษาการย่อยสลายมากมายในห้องปฏิบัติการเซลล์แบคทีเรียที่มีความสามารถในการเมตาบอลิมลสารย่อยสลายหรือ mineralizing มีการเพิ่มตัวอย่างสิ่งแวดล้อมที่ปนเปื้อนในการตรวจสอบการย่อยสลายของสารประกอบ
เป้าหมาย (s) ในสภาพแวดล้อม จำนวนเซลล์รอดกิจกรรมการเผาผลาญสถานที่เชิงพื้นที่และความสามารถในการย่อยสลายเป็นปัจจัยที่สำคัญทั้งหมดที่ให้ข้อมูลที่มีคุณค่าเพื่อความก้าวหน้าของความเข้าใจของเรากระบวนการที่เกิดขึ้นแหวน การใช้งานของ GFP เป็นเครื่องหมายได้อนุญาตให้นักวิจัยเพื่อตรวจหาเซลล์เพิ่มและกำหนดข้อมูลที่แม่นยำมากขึ้นเกี่ยวกับจำนวนเซลล์มีชีวิตอยู่รอดและสถานที่เชิงพื้นที่กว่าได้รับก่อนหน้านี้ที่เป็นไปได้ ในห้องปฏิบัติการของเรา,เครื่องหมาย GFP ถูกจ้างมาเพื่อศึกษาความอยู่รอดของ p-nitrophenol
(PNP) ความเครียด Moraxella-ย่อยสลายในดิน chromosomally GFP-labeled Moraxella SP สายพันธุ์ G21 ได้รับการสร้างขึ้นโดยใช้มินิ TN5-GFP ฆ่าตัวตายพลาสมิด (ดูรูปที่ 2.) (tresse et al. 1998) แบคทีเรียที่มีข้อความเสื่อมโทรมถึง 1440 PM PNP ทั้งในน้ำซุปและดินในระดับเดียวกับเป็นสายพันธุ์พ่อแม่การศึกษาชี้ให้เห็นว่าการอยู่รอดแต่ละโคโลนีสีเขียวเรืองของ G21 ถูกตรวจพบได้ถึง 2 สัปดาห์หลังจากการฉีดวัคซีนในตัวอย่างดิน มันเป็นที่น่าสังเกตว่าแม้เพียง 0.1% ของเชื้อเดิมที่ถูกตรวจพบโดยการชุบ, 58% ของ radiolabelled PNP ถูก mineralized นี้แสดงให้เห็นว่าไม่ทุกเซลล์เป็น culturable,หรือว่าอาจจะมีคนในท้องถิ่นประชากรของจุลินทรีย์ PNP-ย่อยสลายนำเสนอในดิน อัล errampalli et (1998) พบ GFP เครื่องหมาย SP Pseudomonas ugi4gr ถึง 13 เดือนหลังจากการฉีดวัคซีนลงไปในดินที่ปนเปื้อนสีน้ำตาล โดยการใส่มินิ TN5 GFP ลงในโครโมโซมของแบคทีเรีย phenanthrenedegrading, เรืองแสงสีเขียวกลายพันธุ์ Pseudomonas SP ugi4gr, ได้รับGFP มีเสถียรภาพใน ugi4gr และไม่ส่งผลกระทบต่อแร่ของฟีแนนทรีคติดฉลากซึ่งการตรวจสอบการแทรก GFP ไม่ได้แทรกแซง phenan ยีน threne การย่อยสลาย หน่วยการสร้างอาณานิคมถูกนำมาใช้เพื่อระบุเซลล์ GFP เครื่องหมายจากตัวอย่างดินและอาณานิคม ug14gr บนจานอาหารเลี้ยงเชื้อที่เป็นของแข็งถูกตรวจพบการใช้มือถือหลอดไฟยูวีการตรวจจับของเซลล์ GFP เครื่องหมายนานกว่าหนึ่งปีหลังจากการฉีดวัคซีนเป็นไยดินแสดงให้เห็นถึงเครื่องหมาย GFP สามารถเป็นประโยชน์เพื่อความอยู่รอดของแบคทีเรียในระยะยาวในการย่อยสลายในดินหรือการศึกษา.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

4. Plant–microbe โต้
เกจและ al. (1996) labelled ไรโซเบียม meliloti MB5OI มีเครื่องหมาย gfp ผ่าน plasmid ช่วงกว้างโฮสต์ pTB93F Heterologous gfp ได้แสดง constitutively ในจุลินทรีย์นี้ ภาพแสดงเซลล์ R. meliloti ในระหว่างการติดเชื้อในรากและ nodulation ต่อมาถูกตรวจสอบ ยังมีการใช้ระบบ gfp เห็นภาพการกระจายเชื้อแบคทีเรียบนพื้นผิวของราก (Fig. 1 d) Bloemberg et al. (1997) สร้าง plasmid gfp (pGBS) ซึ่งรักษาใน fluorescens Pseudornonas WC5365 เซลล์ 7 วันโดยไม่มีความดันใช้ยาปฏิชีวนะ Constitutively gfp ถูกแสดงในเซลล์ โดยการให้สารอาหาร ภายใต้สภาพห้องปฏิบัติการ เซลล์ WCS36S gfp labelled สุภัคการ microcolonies แบบฟอร์มที่เส้นขอบของเซลล์ epithelial ติดบนผิวรากของกล้าไม้มะเขือเทศ Pseudomonas fluorescens A506 ได้รับเครื่อง chromosomally กับตัวแปรสีแดงกะ gfp (Tombolini และ al., 1997) เพราะความที่ปรับปรุงเรืองแสงเข้ม gfp กะสีแดงและแข็งแกร่งขึ้นโปรโมเตอร์ (PpsbA จาก hybridus ผักโขม), เซลล์แต่ละเซลล์มี visualized บนผิวรากพืช japonicus โลตัสใช้ epifluorescent เลเซอร์ confocal สแกน microscopy การ


5 Biofilms
ระบบ gfp เหมาะสำหรับการศึกษาชุมชนแบคทีเรีย multiplespecies ใน biofilms และการยึดเกาะของแบคทีเรียการ flocs ในเปิดใช้งาน Mo¨ller et al. (1998) แสดงว่า gfp labelled Pseudomonas putida RI มีแนวโน้มการ colonize ชั้นนอกสุดของ biofilm ผสมพันธุ์ในขณะที่ต้องใช้ sp. Acinetobacter เป็น C6 เป็นหลักกับฐานของ biofilm Skillman et al (1998) visualized แบคทีเรียกระจายใน biofilms สองสายพันธุ์ใช้เป็น Enterobacter gfp labelled ต้องใช้ agglomerans และการต้องใช้ pneumoniae Kiebsiella unlabelled หกชั่วโมง biofilms ถูกสี propidium ไอโอไดด์ (P1) โดยใช้ (ไม่ได้ไม่หน้ากาก GFP), ซึ่งเปิด reseachers เห็นภาพการกระจายของเซลล์ gfp labelled ในสีเขียวหรือสีเหลือง และ P1 สีเซลล์เป็นสีแดงที่ใช้ตัวกรองสีน้ำเงินม่วงในการกระตุ้น (395–446 nm) ในกล้องจุลทรรศน์

แบคทีเรียสองได้ใกล้ชิดมักจะเกี่ยวข้องใน microcolonies และ reseachers ที่สรุปว่า ผิวเกี่ยวข้อง macromolecules เป็นพื้นฐานของการโต้ตอบเหล่านี้ พวกเขาแนะนำว่า เทคนิคนี้จึงเปิดให้โต้ตอบเหล่านี้ไม่ซ้ำกันระหว่างแบคทีเรียที่สังเกต และกำหนดคุณสมบัติแท้จริงของผลแก่ biofilm
ใช้ Pseudomonas putida gfp labelled ศึกษาแบคทีเรียอยู่รอดในตะกอนเปิด (Eberl และ al., 1997) ว่ายน้ำฟรีเซลล์สุภัคระหว่างตะกอน flocs ทันทีหลัง จากการแนะนำของพวกเขา และหลัง จาก 2 มม. สังเกต protozoan grazing บนเซลล์มันถูก หลังจากฟักตัว 3 วัน เซลล์เรืองแสงน้อยก็สามารถตรวจสอบได้ แต่ส่วนใหญ่เซลล์เหล่านี้ถูกรวมใน flocs ตะกอนแนะนำบทบาทป้องกันของ floc จากโพรโทซัวที่มหาศาล ความสัมพันธ์ระหว่างเซลล์ GFP9 ทำเครื่องหมายและ flocs มี visualized ใช้ epifluorescent microscopy ใช้สาย gfp labelled E. coli และ Serratia marcescens พันธุ์ Olofsson และ al. (1998) ขึ้นที่เซลล์ผิว hydrophobicity degradwas เป็นปัจจัยที่สำคัญในแบคทีเรียยึดเกาะ flocs Epifluorescent microscopy เปิดใช้งานการแสดงภาพประกอบเพลง และการแจงนับของฟรี GFP ทำเครื่องหมายไว้เซลล์ซึ่งอาจแตกต่างไปในตะกอนเปิด เลเซอร์ confocal สแกน microscopy (CLSM) ของ gfp-
แบคทีเรียมันใช้โพรไฟล์ 3 มิติที่จะผลิตซึ่งแสดงให้เห็นว่า แบคทีเรียสองมีรูปแบบแตกต่างกันมากแนบใน flocs และที่เซลล์สามารถเจาะ flocs ผ่านช่องและรูขุมขน ผู้เขียนแนะนำ epifluorescent และเลเซอร์ confocal microscopy GFP ทำเครื่องหมายเซลล์มีศักยภาพที่ดีสำหรับการสอบสวนเพิ่มเติมเห็นภาพสแกน วิธีการทำให้เกิดความเข้าใจกลไกการยึดเกาะของเชื้อแบคทีเรีย และอาจช่วยในการเพิ่มประสิทธิภาพการบำบัดน้ำเสีย





6. Biodegradation
ใน biodegradation มากศึกษาในห้องปฏิบัติการ เซลล์แบคทีเรียที่ metabolically สามารถลด หรือ mineralizing มลพิษถูกเพิ่มเข้าไปอย่างปนเปื้อนสิ่งแวดล้อมเพื่อกำหนด biodegradation
ของเป้าหมาย compound(s) ในสภาพแวดล้อม จำนวนเซลล์ รอดตาย กิจกรรมเผาผลาญ ที่ตั้งพื้นที่และความสามารถในการ degradative มีความสำคัญทั้งปัจจัยที่ให้ข้อมูลล่วงหน้าเราเข้าใจกระบวนเกิดวงแหวน ใช้ GFP ที่เป็นเครื่องหมายได้อนุญาตให้นักวิจัยตรวจพบเซลล์เพิ่ม และกำหนดข้อมูลชัดเจนยิ่งขึ้นเกี่ยวกับการตรวจนับเซลล์ อยู่รอด และที่ตั้งพื้นที่กว่าก่อนหน้านี้แล้วเป็นไปได้ ในห้องปฏิบัติการของเรา หมาย GFP ถูกจ้างศึกษาความอยู่รอดของ p-nitrophenol
(PNP) -ลดสายพันธุ์ Moraxella ในดิน มีการสร้าง chromosomally gfp labelled Moraxella sp.พันธุ์ G21 ใช้ plasmid เป็นคล้ายมินิ Tn5 gfp (ดู Fig. 2) (Tresse และ al., 1998) แบคทีเรียป้ายเสื่อมโทรมถึง 1440 น. PNP ทั้งดิน ขอบเขตเดียวกันเป็นพันธุ์หลักและซุป ศึกษาอยู่รอดระบุว่า แต่ละสีเขียวเรืองแสงอาณานิคมของ G21 พบขึ้นไป 2 สัปดาห์หลังจาก inoculation ในตัวอย่างดิน เป็นที่น่าสังเกตว่า แม้เพียง 0.1% ของ inoculum เดิมพบชุบ 58% ของ radiolabelled PNP ถูก mineralized นี้ชี้ให้เห็นว่า เซลล์ทั้งหมดไม่ถูก culturable หรือว่า อาจมีประชากรเป็นชน PNP ลดจุลินทรีย์ในดิน Errampalli et al. (1998) พบเครื่องหมาย GFP Pseudomonas sp. UGI4Gr ค่า 13 เดือนหลังจาก inoculation เป็น creosote ปนเปื้อนดิน ใส่มินิ Tn5 gfp ในโครโมโซมของแบคทีเรีย phenanthrenedegrading, sp เป็นสีเขียวเรืองแสงเต่า Pseudomonas. UGI4Gr ได้รับการ Gfp มีเสถียรภาพใน UGi4Gr และไม่มีผลต่อการ mineralization ของฟีแนนทรี C labelled นซึ่งตรวจสอบแทรก gfp ได้ไม่ติด phenan threne ย่อยสลายยีน หน่วยโคโลนีขึ้นรูปใช้ในการระบุเครื่องหมาย GFP เซลล์จากตัวอย่างดิน และตรวจพบ UG14Gr อาณานิคมบนแผ่นแข็ง agar ใช้หลอด UV มือถือ ตรวจเครื่อง GFP เซลล์มากกว่าหนึ่งปีหลังจาก inoculation เป็นดิน microcosms แสดงให้เห็นว่าเครื่องหมายการ GFP สามารถเป็นประโยชน์เพื่อความอยู่รอดระยะยาวที่แบคทีเรียในดิน biodegradation หรือศึกษาได้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

4 . การติดต่อสื่อสารพืช - สัตว์เล็กๆ
เก et al . ( 1996 )มีป้าย OI rhizobium meliloti MB 5 พร้อมด้วยเครื่องหมาย gfp ผ่าน plasmid กว้าง - โฮสต์ - ช่วง ptb .93 F . gfp heterologous อยู่ได้แสดงออกมายกย่องเป็นคุณค่าในจุลชีพแห่งนี้ การแสดง ภาพ ของเซลล์ meliloti R .ในระหว่างการติดเชื้อของรากและ nodulation ต่อมาพบว่าระบบ gfp ที่ถูกใช้เพื่อแสดง ภาพ การเผยแพร่เชื้อแบคทีเรียบนพื้นผิวราก(รูปยัง 1 D ) bloemberg et al . ( 1997 )สร้างขึ้น gfp plasmid ( pgbs )ซึ่งเป็นการดูแลรักษาเป็นอย่างดี ใน 5365 เซลล์ pseudornonas fluorescens ห้องสุขาสำหรับ 7 วันโดยไม่ต้องออกแรงกดเลือกปฏิชีวนะ. gfp ได้กล่าวยกย่องเป็นคุณค่าในเซลล์ที่ไม่มีธาตุอาหารที่ให้มา ภายใต้ เงื่อนไขในห้องปฏิบัติการWCS gfp - มีป้ายที่ 36 เซลล์ s เป็นไปที่แบบฟอร์ม microcolonies ชายแดนของเซลล์ epithelial อยู่ใกล้กันบนพื้นผิวรากของต้นไม้แคระมะเขือเทศ. pseudomonas fluorescens 506 ที่ได้รับการทำเครื่องหมาย chromosomally พร้อมด้วยสีแดง - Shift gfp สาร( tombolini et al . 1997 )เพราะของความเข้มแสงฟลูออเรสเซนต์ขึ้นของ gfp สีแดง - SHIFT และแนะนำจากแพทย์จัดตั้ง Strong ( ppsba จาก hybridus ผัก)แต่ละเซลล์มีเคียงข้างบนพื้นผิวรากของต้นไม้ japonicus Lotus ใช้เลเซอร์ confocal epifluorescent การสแกนการตรวจวิเคราะห์สารเคมี.








5 biofilms
ตามมาตรฐานระบบ gfp ที่ดีเยี่ยมสำหรับการศึกษาชุมชนเกิดจากเชื้อแบคทีเรีย multiplespecies ใน ภาค ยานุวัติและ biofilms ของแบคทีเรียในการ flocs ในตะกอนเปิดใช้งาน หมอสามก๊ก ller et al . ( 1998 )แสดงให้เห็นว่า gfp - ป้าย pseudomonas putida , RI ,มีแนวโน้มที่จะเอาเป็นเมืองขึ้นที่ชั้นนอกชั้นในที่แบบผสมสายพันธุ์ biofilm ในขณะที่ที่ acinetobacter c 6 สีความเมื่อยล้าเป็นต่ออยู่กับดินชั้นล่างของที่ biofilm . skillman et al .( 1998 )การกระจายเกิดจากเชื้อแบคทีเรียเคียงข้างใน biofilms dual - สายพันธุ์โดยใช้ความเมื่อยล้า gfp - ปิดป้าย enterobacter . agglomerans และความเมื่อยล้า pneumoniae kiebsiella unlabelled ที่. biofilms สิบหกชั่วโมงมีแต้มสีโดยใช้ propidium สารประกอบไอ - โอะไดด( P 1 )(ไม่ได้ปิดบัง gfp )ที่เปิดใช้งาน reseachers เพื่อแสดง ภาพ การกระจายของเซลล์เทศ gfp - ปิดป้ายในสีเขียวหรือสีเหลือง1 เซลล์และแต้มสี p ที่เป็นสีแดงโดยใช้สีม่วง - สีน้ำเงินไดนาโม)ด้วยไฟฟ้าแผ่นกรอง( 395-446 nm )ในกล้องจุลทรรศน์.

สองเชื้อแบคทีเรียที่เป็นอย่างใกล้ชิดที่เกี่ยวข้องใน microcolonies reseachers บ่อยครั้งและจะสรุปว่าชนิดเทอร์โมพลาสติกบนพื้นผิวที่เกี่ยวข้องแบบพื้นฐานของการโต้ตอบเหล่านี้เขาแนะนำว่าโรงแรมแห่งนี้สะดวกสบายเทคนิคเปิดใช้งานให้ปฏิบัติตามนี้ที่โดดเด่นการโต้ตอบกันระหว่างที่แบคทีเรียและในการกำหนดคุณสมบัติของทรูมูฟที่ซึ่งเป็นผลของ biofilm .
ที่ gfp - ป้าย pseudomonas putida ได้ถูกนำมาใช้เพื่อการศึกษาเกิดจากเชื้อแบคทีเรียการอยู่รอดในตะกอนเปิดใช้งาน( eberl et al ., 1997 )เซลล์แบบไม่เสียค่าบริการสระว่ายน้ำเป็นระหว่าง flocs ตะกอนในทันทีหลังจากที่ได้แนะนำตัวของตนและหลังจาก 2 ม.ม.กินหญ้า protozoan บนเซลล์มีป้ายที่พบว่า หลังจากผ่านไป 3 วันอบเซลล์แสงฟลูออเรสเซนต์ได้ก็มีอยู่ไม่กี่โค้งงอได้แต่เซลล์เหล่านี้ส่วนใหญ่เป็นคนนำมารวมใน flocs ตะกอนที่แนะนำบทบาทป้องกันของ floc จาก protozoa ปล้นการเชื่อมโยงระหว่าง gfp 9 ที่ทำเครื่องหมาย flocs เซลล์และเป็นการใช้การตรวจวิเคราะห์สารเคมีเคียงข้าง epifluorescent การใช้ผล gfp - ปิดป้ายและพันธุ์ serratia marcescens olofsson et al . ( 1998 )ระบุว่า hydrophobicity พื้นผิวเซลล์ degradwas ปัจจัยสำคัญใน ภาค ยานุวัติเกิดจากเชื้อแบคทีเรียใน flocsการตรวจวิเคราะห์สารเคมี epifluorescent สลักหลังเปิดใช้งานและการทำงานเกี่ยวกับ ภาพ ของ gfp แบบไม่เสียค่าบริการถูกทำเครื่องหมายเซลล์ซึ่งจะเป็นความโดดเด่นในตะกอนที่เปิดใช้งาน การสแกนเลเซอร์ confocal การตรวจวิเคราะห์สารเคมี( clsm )ของแบคทีเรีย gfp -
มีป้ายที่เปิดใช้งานโปรไฟล์ 3 - สามมิติที่จะผลิตซึ่งแสดงให้เห็นว่ามีเชื้อแบคทีเรียที่สองที่มีรูปแบบแตกต่างกันอย่างมากในเอกสารแนบ flocs ได้และที่เซลล์จะสามารถเจาะเข้าสู่ flocs ผ่านช่องทางและรูขุมขน. ผู้เขียนแนะนำการรวมกันของ epifluorescent confocal เลเซอร์และการตรวจวิเคราะห์สารเคมีการสแกนเพื่อแสดง ภาพ เซลล์ gfp - ทำเครื่องหมายจัดให้บริการที่มี ศักยภาพ สูงในการสอบสวนต่อไป การส่งผลให้อยู่ในความเข้าใจที่ดีกว่าของกลไก ภาค ยานุวัติเกิดจากเชื้อแบคทีเรียและอาจจะช่วยในการเพิ่ม ประสิทธิภาพ ให้กับการบำบัดน้ำเสีย.





6 . biodegradation
ซึ่งจะช่วยในการศึกษา biodegradation จำนวนมากในห้องทดลองที่เกิดจากเชื้อแบคทีเรียซึ่งเป็นเซลล์ metabolically มีความสามารถหรือย่ำยีศักดิ์ศรี mineralizing ที่ก่อมลพิษหลักๆลงจะถูกเพิ่มลงในตัวอย่างด้านสิ่งแวดล้อมการปนเปื้อนในการกำหนด biodegradation
ของผสมเป้าหมาย( S )ใน สภาพแวดล้อม นับถอยหลังการทำงานของเซลล์การอยู่รอดกว้างขวางมีที่ตั้งที่มีมิติและความสามารถ degradative เป็นปัจจัยที่สำคัญทั้งหมดที่ให้ข้อมูลที่เป็นประโยชน์ในการทำความเข้าใจของเราของกระบวนการที่เกิดขึ้นเสียงเรียกเข้า การใช้ gfp ที่เป็นเครื่องหมายที่ได้รับอนุญาตให้นักวิจัยสามารถตรวจหาเซลล์เพิ่มและกำหนดข้อมูลเพิ่มเติมได้อย่างแม่นยำเกี่ยวกับนับถอยหลังเซลล์ที่ตั้งที่มีมิติและความอยู่รอดมากกว่าที่เคยเป็นไปได้ก่อนหน้านี้ ในห้องปฏิบัติการของเราทำเครื่องหมาย gfp ที่ถูกนำมาใช้เพื่อการศึกษาความอยู่รอดของความเมื่อยล้า P - nitrophenol
( PnP ) - ย่ำยีศักดิ์ศรี moraxella ในดิน ความเมื่อยล้า chromosomally gfp - ป้าย moraxella sp .ที่ G 21 ได้รับการก่อสร้างด้วยการใช้มินิ - TN 5 - gfp ผู้ฆ่าตัวตาย plasmid (ดูรูปที่ 2 )( tresse et al . 1998 ). แบคทีเรียมีข้อความที่ถูกปรับระดับลงได้ถึง 1440 PnP Cap ทุ่มทั้งในดินและน้ำซุปในกรณีเดียวกันกับที่เป็นสายพันธุ์ของพ่อแม่ได้.การศึกษาความอยู่รอดระบุว่าอาณาจักรฟลูออเรสเซนต์สีเขียวของ G 21 ถูกตรวจพบได้ถึง 2 สัปดาห์หลังจากปลูกฝีในตัวอย่างดิน เป็นที่น่าสังเกตว่าแม้เพียง 0.1% ของ inoculum เดิมที่มีการตรวจพบโดยหล่อ 58% ของ PnP Cap radiolabelled นั้น mineralized โรงแรมแห่งนี้ชี้ให้เห็นว่าไม่ใช่ทั้งหมดเป็นเซลล์ culturableหรือว่าอาจมีประชากรพื้นเมืองของจุลชีพ PnP Cap - ย่ำยีศักดิ์ศรีอยู่ในดินได้. errampalli et al . ( 1998 )พบ pseudomonas gfp - ทำเครื่องหมาย SP . ugi 4 กรัมได้ถึง 13 เดือนหลังจากฉีด(วัคซีน)เข้ากับธาตุครี - โอะโซทการปนเปื้อนดิน. โดยการแทรกมินิ TN 5 - gfp เข้ากับโครโมโซมของแบคทีเรีย phenanthrenedegrading ที่ฟลูออเรสเซนต์สีเขียว mutant pseudomonas sp . ugi 4 กรัมได้.gfp ที่มีความมั่นคงใน ugi 4 กรัมและไม่มีผลกระทบต่อ mineralization ของ phenanthrene c - มีป้ายที่ได้รับการรับรองการใส่ gfp ไม่ได้ส่งผลกระทบกระเทือนกับยีน phenan threne - การเสื่อม สภาพ . ชุดสร้างอาณานิคมได้ถูกใช้เพื่อระบุเซลล์ gfp - ทำเครื่องหมายจากดินและตัวอย่าง UG 14 กรัมอาณานิคมบนแผ่นสาหร่ายทะเลเนื้อแข็งถูกตรวจพบการใช้หลอดไฟ UV แบบมือถือได้การตรวจจับของเซลล์ gfp - ทำเครื่องหมายสำหรับมากกว่าหนึ่งปีหลังจากปลูกฝีลงในดิน microcosms แสดงให้เห็นเครื่องหมาย gfp ที่สามารถเป็นประโยชน์สำหรับการอยู่รอดเกิดจากเชื้อแบคทีเรียระยะยาวในการศึกษาหรือ biodegradation ดิน.