2. Material and methods2.1. Materia

2. Material and methods
2.1. Materials
The rice protein isolate (Oryza sativa L.) was obtained from EnerGenetics International, Inc. (Keokuk, IA). Protease Validase FP concentrate and Alkaline Protease concentrate was kindly provided by Valley Research Corporate (South Bend, IN). Neutral Protease (NP) was provided by Bio-CAT Inc (Troy, VA). Val is a fungal peptidase complex produced by submerged fermentation of a selected strain of A. oryzae and contains both endoprotease and exopeptidase activities. The AP is a serine alkaline protease prepared from B. licheniformis which possesses endopeptidase activity. The NP is an extracellular endopeptidase produced from B. subtilis. These enzymes are active in the neutral pH range. These proteases were selected because they have been commonly used in industrial processes with high-quality thermostability. Fluorescein, 6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid (Trolox ), and DPPH were purchased from SigmaeAldrich Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). 2,20-azobis(2-amino-propane) dihydrochloride (AAPH) and 2,20-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt was purchased from Wako Chemicals (Richmond, VA). All other chemicals and solvents were of analytical or HPLC-grade. The ultrafiltration system (Model No. 8050) and cellulosemembranes for the preparation of protein hydrolysates were purchased from Millipore Co. (Billerica, MA).
2.2. Preparation of rice protein hydrolysates
Three microbial proteases, Val, AP, and NP, were used to hydrolyse the rice protein isolate according to the peptide guidelines from the manufacturer with slight modification. The protein was first suspended and homogenized in water at 50 g/500 g and then hydrolysed by the individual proteases at a concentration of 1 g/50 g (enzyme/substrate). The enzymatic hydrolysis was conducted for 6 h in a water bath at 55 C under shaking. For Val and NP, the reaction mixturewas adjusted to pH 7.0 using 0.5 mol equi/L NaOH or 0.6 mol equi/L HCl during hydrolysis. For AP, the solution was adjusted to the optimum pH 10. The enzymatic reactions were terminated by boiling the mixtures for 5 min. Each mixture was centrifuged at 15,000 g and the soluble fraction was then filtered using filtration paper (Whatman 4) for further fractionation.
2.3. Determination of the degree of hydrolysis (DH)
The DH of rice protein by the three proteases was determined via the trinitrobenzenesulfonic acid (TNBS) reaction according to a previously established protocol (Zhang, Li, & Zhou, 2010).
2.4. Fractionation of protein hydrolysates by ultrafiltration
The collected protein hydrolysates were ultra-filtered sequentially using a Millipore 8050 ultrafiltration unit through cellulose membranes with different molecular weight (MW) limits. The hydrolysates were diluted with water and ultra-filtered through a membrane with 10 k Dalton (kDa) molecular weight-cut-off (MWCO) under 276 kPa nitrogen gas to afford two fractions: retentate (fraction 1, F1, represented hydrolysates >10 kDa) and permeate (MW < 10 kDa). The permeate was further ultra-filtered through a 3 kDa MWCO membrane to obtain the second retentate (fraction 2, F2, represented hydrolysates between 3 and 10 kDa) and permeate. The permeate was further ultra-filtered through a 1 kDa MWCO membrane to yield the third retentate (fraction 3, F3, represented hydrolysates between 1 and 3 kDa) and permeate (fraction 4, F4, represented hydrolysates

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. วัสดุ ข้าวโปรตีน (Oryza ซา L.) ได้รับจาก EnerGenetics International, Inc. (Keokuk, IA) ข้น Validase FP รติเอสและรติเอสด่างเข้มข้นได้กรุณาโดยวัลวิจัยองค์กร (เซาท์เบนด์ IN) กลางรติเอส (NP) ได้รับจาก CAT ชีวภาพ Inc (Troy, VA) ค่าเป็นการเชื้อรา peptidase ซับซ้อนผลิต โดยหมักน้ำท่วมต้องใช้เลือกของแห้งระดับต่าง ๆ อ. และประกอบด้วย endoprotease และ exopeptidase AP เป็นแถด่างรติเอสเตรียมจาก licheniformis เกิดซึ่งมีกิจกรรม endopeptidase NP เป็น endopeptidase การ extracellular ผลิตจาก subtilis เกิด เอนไซม์เหล่านี้อยู่ในช่วงค่า pH ที่เป็นกลาง Proteases เหล่านี้ถูกเลือกเนื่องจากโดยทั่วไปใช้ในกระบวนการอุตสาหกรรม ด้วยคุณภาพสูง thermostability Fluorescein กรด 6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic (Trolox), และ DPPH ได้ซื้อจาก บริษัทเคมี SigmaeAldrich (St. Louis, MO สหรัฐอเมริกา) 2,20-azobis(2-amino-propane) dihydrochloride (AAPH) และเกลือ diammonium 2,20-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) ได้ซื้อสารเคมี Wako (ริชมอนด์ VA) ทั้งหมดเคมีภัณฑ์และหรือสารทำละลายอื่น ๆ ได้การวิเคราะห์ HPLC เกรดหรือการ ระบบ ultrafiltration (รูปหมายเลข 8050) และ cellulosemembranes สำหรับการจัดเตรียมโปรตีน hydrolysates ที่ซื้อจาก บริษัทมาก (Billerica, MA) 2.2 การเตรียมข้าวโปรตีน hydrolysates สาม proteases จุลินทรีย์ วาล AP และ NP ก็จะ hydrolyse ข้าวโปรตีนตามแนวทางของเพปไทด์จากผู้ผลิตมีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย โปรตีนถูกหยุดชั่วคราวก่อน และ homogenized เป็นกลุ่มน้ำที่ 50 g/500 g ก hydrolysed แล้ว โดย proteases แต่ละที่ความเข้มข้นของ 1 g/50 g (เอนไซม์/พื้นผิว) ไฮโตรไลซ์เอนไซม์ในระบบได้ดำเนินการใน 6 h ในอ่างน้ำที่ 55 C ภายใต้สั่น วินเทอร์และ NP, mixturewas ปฏิกิริยาปรับให้ค่า pH 7.0 ใช้ 0.5 โมล equi/L NaOH หรือ 0.6 โมล equi/L HCl ไฮโตรไลซ์ สำหรับ AP โซลูชั่นถูกปรับให้ pH เหมาะสม 10 ปฏิกิริยาเอนไซม์ในระบบถูกยกเลิก โดยการต้มส่วนผสมสำหรับ 5 นาที ส่วนผสมแต่ละถูก centrifuged ที่ 15000 g และเศษส่วนละลายน้ำแล้วถูกกรองโดยใช้กระดาษกรอง (Whatman 4) สำหรับแยกส่วนเพิ่มเติม2.3 การกำหนดระดับของไฮโตรไลซ์ (DH) DH ของโปรตีนข้าวโดย proteases สามถูกกำหนดผ่านปฏิกิริยากรด (TNBS) trinitrobenzenesulfonic ตามโพรโทคอลที่สร้างขึ้นก่อนหน้านี้ (จาง หลี่ & โจว 2010) 2.4 การแยกส่วนของโปรตีน hydrolysates โดย ultrafiltration Hydrolysates รวบรวมโปรตีนถูกอัลตร้ากรองตามลำดับโดยใช้หน่วย ultrafiltration มาก 8050 ผ่านสารเซลลูโลส มีวงเงินแตกต่างน้ำหนักโมเลกุล (MW) Hydrolysates ถูกทำให้เจือจาง ด้วยน้ำ และอัลตร้ากรองผ่านเมมเบรนกับ 10 k ดาลตัน (kDa) น้ำหนักโมเลกุลตัดออก (MWCO) ภายใต้ก๊าซไนโตรเจน kPa 276 จะจ่ายส่วนที่สอง: retentate (เศษ 1, F1 แสดง hydrolysates > 10 kDa) และ permeate (kDa < 10 MW) Permeate ถูกเพิ่มเติมเป็นพิเศษกรองผ่านเยื่อ MWCO kDa ที่ 3 การรับ retentate สอง (เศษ 2, F2 แสดง hydrolysates ระหว่าง 3 และ 10 kDa) และ permeate Permeate ถูกเพิ่มเติมเป็นพิเศษกรองผ่านเยื่อ MWCO kDa ที่ 1 ให้ผลผลิต retentate ที่สาม (hydrolysates เศษ 3, F3 แสดงระหว่าง 1 และ 3 kDa) และ permeate (เศษ 4, F4 แสดง hydrolysates < 1 kDa) Retentates ทั้งหมด และบริเวณห่างออกไป lyophilized และเก็บไว้ที่ 20 C เป็นต้นไปวิเคราะห์2.5 การวัดออกซิเจนกำลังรุนแรง absorbance (ORAC) มีดำเนินการทดสอบ ORAC kinetically วัด peroxylradical scavenging กิจกรรมของเปปไทด์กับ Trolox เป็นสารต้านอนุมูลอิสระมาตรฐาน (Hogan จาง หลี่ วัง และ โจว 2009) ใช้ fluorescein เป็นโพรบเรืองแสง และ peroxyl อนุมูลที่เกิดจาก AAPH ใน 75 mmol/L ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.4) ค่า ORAC ถูกแสดงใน micromoles ของเทียบเท่า Trolox ต่อกรัมน้ำหนักแห้ง hydrolysates (mmoles TE/g)2.6 การวัดของ DPPH scavenging กิจกรรม วิเคราะห์ได้ดำเนินการตามขั้นตอนก่อนหน้านี้รายงานโดยใช้ DPPH มั่นคง (โจว ยิน & Yu, 2005) มีเตรียมส่วนผสมปฏิกิริยาประกอบด้วย 100 mL ของแต่ละอย่างและ 100 mL ของโซลูชัน DPPH mmol/L 0.2 วัด absorbance ที่ 517 nmwas กับว่างน้ำ deionized ที่ 40 นาที และ 50 กรดแอสคอร์บิค mmol/L และบาทใช้สำหรับเปรียบเทียบ2.7 การวัดþรเรียน scavenging กิจกรรม การทดสอบที่ดำเนินการตามที่รายงานไปก่อนหน้านี้โพรโทคอล (โจว Laux, & Yu, 2004) Þรเรียนที่เตรียม โดยการรับอิเล็กตรอนเป็น 5 mmol/L ละลายของรเรียน ด้วยแมงกานีสไดออกไซด์ที่อุณหภูมิสำหรับ 30 นาที ส่วนผสมของปฏิกิริยาอยู่ 1.0 mL ของþรเรียนด้วย absorbance ที่เริ่มต้นรอบ 0.7 ที่ 734 nm และ 80 mL hydrolysates โปรตีนหรือ Trolox เป็นสารต้านมาตรฐาน Absorbance ที่ 734 nm ที่วัด 1 นาทีของปฏิกิริยาต่อไปนี้ และเทียบเท่า Trolox ถูกคำนวณโดยใช้เส้นโค้งมาตรฐาน Trolox เตรียมการ2.8 การกำหนดผลของ hydrolysates โปรตีนเลือกการเกิดออกซิเดชันของไขมันเนื้อสัตว์ เศษส่วนเหมาะกับแรง ORAC หรือ DPPH scavenging กิจกรรมถูกเลือก และเพิ่มเติม ประเมินกิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระต่อต้านการเกิดออกซิเดชันของไขมันในเนื้อดิน Trims เนื้อสดได้รับจากร้านค้าท้องถิ่น และดินผ่านจาน ตัวอย่างเนื้อ (250 กรัม) ถูกเพิ่มเติม homogenized เป็นกลุ่ม หรือ ไม่ hydrolysates โปรตีน โดยเครื่องกำเนิดไฟฟ้าโค ultrafine อยู่ในท่อเครื่องหมุนเหวี่ยง 50 mL น้ำหนัก และ centrifuged เอาอากาศติดอยู่ด้วย เพื่อส่งเสริมการเกิดออกซิเดชันของไขมัน น้ำยาผสมเนื้อไม่สุกที่อุณหภูมิภายในของ 71 C ในห้องน้ำ อุณหภูมิภายในถูกตรวจสอบ โดย thermocouple needlesize ที่แทรกกลางความร้อนของหลอดระหว่างการทำอาหาร หลังจากทำความเย็นอุณหภูมิห้อง ตัวอย่างเนื้อสุก และ homogenized เป็นกลุ่มวางในถาด ปกคลุม ด้วยฟิล์ม PVC และเก็บไว้ที่ค. 4 ขอบเขตการเกิดออกซิเดชันของไขมันในแต่ละตัวอย่างเนื้อถูกกำหนด โดยปฏิกิริยากรด thiobarbituric assay สาร (TBARS) ในอาหาร (Hogan et al., 2009) ลงวันที่ 1, 8 และ 15 Valuewas TBARS ขั้นสุดท้ายคำนวณเส้นโค้งมาตรฐาน และแสดงเป็นมิลลิกรัมของ malondialdehyde (MDA) เทียบเท่าต่อกิโลกรัมของตัวอย่าง (mg MDA ที่เทียบเท่ากับกิโลกรัม)2.9. สถิติวิเคราะห์ ค่าเฉลี่ยในแต่ละการทดสอบถูกเปรียบเทียบโดยใช้ t-ทดสอบ twosample ข้อมูลจะแสดงเป็นหมายถึง SD (ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน) ความแตกต่างได้เป็นอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติเมื่อค่า P < 0.05 (มหาสำหรับโปรแกรม Windows รุ่น 10.0.5., 1999) ทดสอบความสัมพันธ์การเพียร์สองด้านได้ดำเนินการกำหนดความสัมพันธ์ระหว่างวิธี

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 วัสดุ
โปรตีนข้าว (Oryza sativa L. ) ที่ได้รับจาก EnerGenetics International, Inc. (เคีย IA) สมาธิ protease Validase FP และสมาธิอัลคาไลน์โปรติเอสได้ให้ความกรุณาโดยวัลเลย์วิจัย (Corporate South Bend, IN) โปรติเอสที่เป็นกลาง (NP) ได้รับจาก Bio-CAT Inc (ทรอย VA) Val มีความซับซ้อน peptidase เชื้อราที่ผลิตโดยการหมักจมอยู่ใต้น้ำของสายพันธุ์ที่เลือกของ A. oryzae และมีทั้ง endoprotease และกิจกรรม exopeptidase AP คืออัลคาไลน์โปรติเอสซีรีนที่เตรียมจาก B. licheniformis ซึ่งมีกิจกรรม endopeptidase NP เป็น endopeptidase สารที่ผลิตจาก B. subtilis เอนไซม์เหล่านี้มีการใช้งานในช่วง pH เป็นกลาง โปรตีเอสเหล่านี้ได้รับการคัดเลือกเพราะพวกเขาได้ถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในกระบวนการผลิตของอุตสาหกรรมที่มีคุณภาพสูงทนร้อน Fluorescein 6 hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic กรด (Trolox) และ DPPH ที่ซื้อมาจาก SigmaeAldrich เคมี จำกัด (St. Louis, MO, USA) 2,20-azobis (2 อะมิโนโพรเพน) dihydrochloride (AAPH) และ 2,20-azino ทวิ (กรด 3 ethylbenzothiazoline-6-sulfonic) เกลือ Diammonium ซื้อมาจาก Wako เคมีภัณฑ์ (ริชมอนด์) สารเคมีอื่น ๆ ทั้งหมดและตัวทำละลายเป็นของการวิเคราะห์หรือ HPLC เกรด ระบบการกรอง (หมายเลขรุ่น 8050) และ cellulosemembranes ในการจัดทำและโปรตีนที่ซื้อมาจากค จำกัด (บิลเลริกา, MA).
2.2 การเตรียมไฮโดรไลเซโปรตีนข้าว
สามโปรตีเอสจุลินทรีย์ Val, AP และ NP ถูกนำมาใช้ในการสลายโปรตีนข้าวแยกตามแนวทางเปปไทด์จากผู้ผลิตที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย โปรตีนที่ถูกระงับแรกและหดหายไปในน้ำที่ 50 กรัม / 500 กรัมและย่อยได้แล้วโดยโปรตีเอสของแต่ละบุคคลที่มีความเข้มข้นของ 1 กรัม / 50 กรัม (เอนไซม์ / สารตั้งต้น) ย่อยโปรตีนได้ดำเนินการเป็นเวลา 6 ชั่วโมงในอ่างน้ำที่ 55 C ภายใต้การสั่น สำหรับ Val และ NP ปฏิกิริยา mixturewas ปรับให้ค่า pH 7.0 โดยใช้ 0.5 mol Equi / L หรือ NaOH 0.6 mol Equi / L HCl ในระหว่างการย่อยสลาย สำหรับ AP, การแก้ปัญหาที่ถูกปรับให้มีค่า pH ที่เหมาะสม 10. ปฏิกิริยาของเอนไซม์ถูกยกเลิกโดยการต้มผสมเป็นเวลา 5 นาที ส่วนผสมแต่ละคนได้หมุนเหวี่ยงที่ 15,000 กรัมและส่วนที่ละลายน้ำได้ถูกกรองแล้วใช้กระดาษกรอง (Whatman 4) สำหรับแยกต่อไป.
2.3 การกำหนดระดับของการย่อยสลาย (DH)
DH ของโปรตีนข้าวโดยสามโปรตีเอสถูกกำหนดผ่านกรด trinitrobenzenesulfonic (TNBS) ปฏิกิริยาตามโปรโตคอลที่จัดตั้งขึ้นก่อนหน้านี้ (จางหลี่และโจว, 2010).
2.4 แยกของไฮโดรไลเซโปรตีนโดยกรอง
ไฮโดรไลเซโปรตีนที่เก็บรวบรวมเป็นพิเศษกรองตามลำดับโดยใช้หน่วยกรองค 8050 ผ่านเยื่อเซลลูโลสมีน้ำหนักโมเลกุลที่แตกต่างกัน (MW) ข้อ จำกัด ไฮโดรไลเซถูกเจือจางด้วยน้ำและอัลตร้ากรองผ่านเยื่อหุ้มเซลล์มี 10 k ดาลตัน (กิโลดาลตัน) โมเลกุลน้ำหนัก cut-off (MWCO) ภายใต้ 276 ก๊าซไนโตรเจนปาสคาลที่จะจ่ายสองเศษส่วน: กัก (ส่วนที่ 1, F1, ไฮโดรไลเซตัวแทน> 10 กิโลดาลตัน) และซึม (MW <10 กิโลดาลตัน) การซึมผ่านเป็นพิเศษต่อไปกรองผ่าน 3 กิโลดาลตัน MWCO เมมเบรนที่จะได้รับกักวินาที (ส่วนที่ 2, F2, ไฮโดรไลเซแสดงระหว่างวันที่ 3 และ 10 กิโลดาลตัน) และซึม การซึมผ่านเป็นพิเศษต่อไปกรองผ่าน 1 กิโลดาลตัน MWCO เมมเบรนเพื่อให้กักสาม (ส่วนที่ 3, F3, ไฮโดรไลเซแสดงระหว่างวันที่ 1 และ 3 กิโลดาลตัน) และซึม (ส่วนที่ 4, F4, ไฮโดรไลเซตัวแทน <1 กิโลดาลตัน) retentates และแทรกซึมถูกแห้งและเก็บไว้ที่ 20 C จนกระทั่งต่อ
การวิเคราะห์.
2.5 การวัดความจุของออกซิเจนดูดกลืนแสงที่รุนแรง (ORAC)
ทดสอบค่า ORAC ได้รับการดำเนินการเพื่อ kinetically วัดต้าน peroxylradical ของเปปไทด์ที่มี Trolox เป็นมาตรฐานสารต้านอนุมูลอิสระ (โฮแกนจางหลี่วังและโจว 2009) Fluorescein ถูกใช้เป็นหัววัดเรืองแสงและอนุมูล peroxyl ถูกสร้างขึ้นจาก AAPH ใน 75 mmol / L ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.4) ค่า ORAC ได้แสดงออกใน micromoles เทียบเท่า Trolox ต่อกรัมน้ำหนักแห้งไฮโดรไลเซ (mmoles TE / กรัม).
2.6 วัดของกิจกรรม DPPH ใน
การทดสอบได้ดำเนินการตามขั้นตอนการรายงานก่อนหน้านี้ใช้ DPPH มั่นคง (โจวหยินและยู 2005) ผสมปฏิกิริยาที่มีขนาด 100 มิลลิลิตรของแต่ละตัวอย่างและ 100 มิลลิลิตร 0.2 mmol / L การแก้ปัญหา DPPH ได้จัดทำ ดูดกลืนแสงที่ 517 nmwas วัดกับว่างเปล่าของน้ำกลั่นปราศจากไอออนที่ 40 นาทีและ 50 mmol / L วิตามินซีและ BHT ถูกนำมาใช้สำหรับการเปรียบเทียบ.
2.7 วัด ABTS þต้าน
ทดสอบได้ดำเนินการตามที่ได้รายงานไปแล้วโปรโตคอล (โจว Laux และยู 2004) ABTS þได้รับการจัดทำขึ้นโดยออกซิไดซ์ 5 mmol / L สารละลายของ ABTS กับแมงกานีสไดออกไซด์ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที ผสมปฏิกิริยาที่มีอยู่ 1.0 มิลลิลิตรของ ABTS þกับการดูดกลืนแสงเริ่มต้นรอบ 0.7 ที่ 734 นาโนเมตรและ 80 มิลลิลิตรไฮโดรไลเซโปรตีนหรือ Trolox เป็นมาตรฐานสารต้านอนุมูลอิสระ ดูดกลืนแสงที่ 734 นาโนเมตรวัดดังต่อไปนี้ 1 นาทีของการเกิดปฏิกิริยาและเทียบเท่า Trolox ที่คำนวณโดยใช้เส้นโค้งมาตรฐานจัดทำขึ้นด้วย Trolox.
2.8 การกำหนดผลของการไฮโดรไลเซโปรตีนที่เลือกบนออกซิเดชันเนื้อไขมัน
ไฮโดรไลเศษส่วนที่มีค่า ORAC ที่แข็งแกร่งหรือกิจกรรม DPPH ในได้รับการคัดเลือกและประเมินผลต่อไปสำหรับฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของพวกเขากับออกซิเดชันของไขมันในเนื้อดิน จดจ้องเนื้อสดที่ได้รับจากร้านขายของชำในท้องถิ่นและพื้นดินผ่านแผ่น ตัวอย่างเนื้อ (250 กรัม) ได้รับการหดหายต่อไปโดยมีหรือไม่มีไฮโดรไลเซโปรตีนโดยกำเนิดมหภาค ultrafine และวางลงในหลอดขนาด 50 มล centrifuge ชั่งน้ำหนักและหมุนเหวี่ยงเพื่อเอาอากาศติด เพื่อส่งเสริมการออกซิเดชันของไขมันที่ผสมเนื้อได้รับการปรุงให้อุณหภูมิภายในของ 71 C ในอ่างน้ำ อุณหภูมิภายในได้รับการตรวจสอบโดยทน needlesize แทรกเข้าไปในศูนย์ความร้อนของท่อในระหว่างการปรุงอาหาร หลังจากที่ระบายความร้อนที่อุณหภูมิห้อง, หดหายและสุกตัวอย่างเนื้อถูกวางไว้ในถาดปกคลุมด้วยฟิล์มพีวีซีและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสขอบเขตของการเกิดออกซิเดชันของไขมันในแต่ละตัวอย่างเนื้อถูกกำหนดโดยกรดด่างทั้งหมดที่ระเหยสารปฏิกิริยา (TBARS) การทดสอบบน วันที่ 1, 8, และการปรุงอาหารโพสต์ 15 (โฮแกน et al., 2009) สุดท้าย valuewas TBARS คำนวณด้วยเส้นโค้งมาตรฐานและแสดงเป็นมิลลิกรัม Malondialdehyde (MDA) เทียบเท่ากิโลกรัมละของตัวอย่าง (มิลลิกรัมเทียบเท่าภาคตะวันออกเฉียงเหนือ / กก.)
2.9 การวิเคราะห์ทางสถิติ
ค่าเฉลี่ยภายในการทดสอบแต่ละถูกนำมาเปรียบเทียบโดยใช้ twosample t-test ข้อมูลนี้จะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย SD (ความเบี่ยงเบนมาตรฐาน) ได้รับการพิจารณาความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติเมื่อค่า P เป็น <0.05 (โปรแกรม SPSS for Windows รุ่น 10.0.5., 1999) สองด้านการทดสอบความสัมพันธ์เพียร์สันได้ดำเนินการเพื่อตรวจสอบความสัมพันธ์ระหว่างวิธีการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . วัสดุ
โปรตีนข้าว ( Oryza sativa L . ) ที่แยกได้จาก energenetics International , Inc ( คีโอคุก , IA ) โปร validase FP มีสมาธิและการผลิตอัลคาไลน์โปรติเอสสมาธิก็กรุณาให้หุบเขาวิจัยองค์กร ( ใต้โค้งใน ) โปรติเอสเป็นกลาง ( NP ) โดยไบโอแมว INC ( ทรอย , VA )วาล เป็นเชื้อราที่ผลิตโดยการหมักในลูกเต้าของสายพันธุ์ A . oryzae และมีทั้ง endoprotease โซเพปทิเดสและกิจกรรม AP เป็นเอนไซม์อัลคาไลน์โปรติเอสเตรียมจาก B . licheniformis ซึ่งครอบครองกิจกรรมโดเพปทิเดส . โดย np เป็นสำคัญ โดเพปทิเดสผลิตจาก B . subtilis . เอนไซม์เหล่านี้มีการใช้งานในช่วง pH ที่เป็นกลางเพื่อเหล่านี้ถูกเลือกเพราะพวกเขามีการใช้บ่อยในกระบวนการอุตสาหกรรมกับทดล ที่มีคุณภาพสูง ี่ 6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic , กรด ( สาร ) และ dpph ซื้อมาจาก sigmaealdrich Chemical Co . ( St . Louis , MO , USA ) 2,20-azobis ( 2-amino-propane ) : ( aaph ) และ 220 azino ทวิ ( 3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid ) diammonium เกลือถูกซื้อจาก Wako สารเคมี ( Richmond , VA ) สารเคมีอื่น ๆทั้งหมดและตัวทำละลาย HPLC วิเคราะห์หรือเกรด ระบบกรอง ( แบบไม่ 8050 ) และ cellulosemembranes สำหรับการเตรียมของโปรตีน คือ ซื้อจากบริษัท มิลลิ ( โตเกียวมา )
2.2 . การเตรียมโปรตีนข้าวของ
สามทางจุลินทรีย์ วาล , AP , และ NP , ใช้สุดข้าวโปรตีนเปปไทด์แยกตามแนวทางจากผู้ผลิตที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย โปรตีนเป็นครั้งแรกและถูกบดในน้ำ 50 กรัม / 500 กรัม และโดยทางที่บุคคลที่ความเข้มข้น 1 กรัม / 50 กรัม ( เอนไซม์ / แผ่น )เอนไซม์เอนไซม์จำนวน 6 H ในอ่างน้ำที่ 55 C ภายใต้สั่น สำหรับวาลและ NP , ปฏิกิริยา mixturewas ปรับ pH 7.0 ใช้ 0.5 ลิตรโมล NaOH เท่ากันหรือ 0.6 โมล / ลิตร hcl ในระหว่างการย่อยสลายเท่ากัน . สำหรับ การแก้ปัญหาคือการปรับให้พีเอชที่เหมาะสม 10 . ปฏิกิริยาของเอนไซม์ถูกยกเลิกโดยต้มผสม 5 นาที ส่วนผสมแต่ละ คือ ที่ระดับ 15 ,000 กรัม และส่วนที่ละลายน้ำแล้วกรองใช้กรองกระดาษ ( whatman 4 ) สำหรับส่วนเพิ่มเติม .
2.3 การกำหนดระดับของการย่อยสลาย ( DH )
DH ของโปรตีนข้าว โดยทั้งสามถูกกำหนดผ่านทางกรด trinitrobenzenesulfonic ( tnbs ) ปฏิกิริยาจากการก่อตั้งขึ้นก่อนหน้านี้โปรโตคอล ( Zhang Li &โจว , 2010 )
2.4 .การผสมของโปรตีนโปรตีนเป็นอัลตร้า
รวบรวมของกรองใช้กรองหน่วยเป็นมิลลิ 8050 ผ่านเซลลูโลสเมมเบรนที่มีน้ำหนักโมเลกุลแตกต่างกัน ( มหาชน ) จำกัดส่วนของถูกเจือจางด้วยน้ำและ Ultra กรองผ่านเยื่อด้วย 10 K ดาลตัน ( kDa ) น้ำหนักโมเลกุลตัดออก ( mwco 276 กิโลปาสคาล ) ภายใต้ก๊าซไนโตรเจนที่จะจ่ายสองเศษส่วน : รีเทนเทท ( เศษ 1 , F1 , เป็นตัวแทนของ 10 kDa ) และซึม ( MW < 10 กิโล ) การแผ่ซ่าน ลดลง 3 กิโล mwco เป็นพิเศษ กรองผ่านเมมเบรนเพื่อขอรับรีเทนเททวินาที ( เศษ 2 , F2 ,เป็นตัวแทนของระหว่าง 3 และ 10 kDa ) และเพอ . การแผ่ซ่านเพิ่มเติมพิเศษกรองผ่านเมมเบรน 1 กิโล mwco ให้ผลรีเทนเททที่สาม ( ส่วน 3 F3 แทนของระหว่าง 1 และ 3 กิโลดาลตัน ) และซึม ( เศษ 4 , F4 , เป็นตัวแทนของ < 1 กิโล ) retentates และแทรกซึมอยู่แห้งที่เก็บรักษาที่อุณหภูมิ 20 C จนถึงการวิเคราะห์ต่อไป
.
2.5การวัดความจุของออกซิเจน Radical Absorbance ( ORAC )
( ORAC ศึกษาจลนศาสตร์ วัด peroxylradical การกิจกรรมของเปปไทด์ที่มีสารต้านอนุมูลอิสระเป็นมาตรฐาน ( Hogan , จาง , หลี่ หวัง &โจว , 2009 ) ี่ใช้เป็นโพรบเรืองแสงและ peroxyl อนุมูลอิสระถูกสร้างขึ้นจาก aaph 75 มิลลิโมล / ลิตรฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.4 )ค่า ORAC คือแสดงออกในไมโครโมของสารที่มีต่อกรัมน้ำหนักแห้งของ ( mmoles te / g )
2.6 การวัดผลของการจัดกิจกรรม dpph
( ดำเนินการตามรายงานก่อนหน้านี้ ขั้นตอนการใช้ dpph มั่นคง ( Zhou Yin & , ยู , 2005 ) ปฏิกิริยาที่ผสมบรรจุ 100 ml ของแต่ละตัวอย่างและ 100 มล. 0.2 มิลลิโมล / ลิตร dpph แก้ไขเตรียมไว้แล้วนในตอนนี้ nmwas วัดกับเปล่าคล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำ 40 นาทีและ 50 มิลลิโมล / ลิตรและกรดแอสคอร์บิกบาทใช้สำหรับการเปรียบเทียบ
2.7 . การวัดผลของการจัดกิจกรรมþ Abbr
( การปฏิบัติตามการรายงานก่อนหน้านี้โปรโตคอล ( โจว , ล็อกส์& , ยู , 2004 )Abbr þเตรียมออกซิไดซ์ 5 mmol / L สารละลายของ Abbr ด้วยแมงกานีสไดออกไซด์ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที ปฏิกิริยาผสมที่มีอยู่ 1.0 มล. Abbr þที่มีค่าเริ่มต้นที่คุณประมาณ 0.7 nm และ 80 มิลลิลิตร หรือสารโปรตีนที่เป็นมาตรฐานของสารต้านอนุมูลอิสระ นที่คุณ nm วัดต่อไปนี้ 1 นาทีของปฏิกิริยาและสารเทียบเท่าคำนวณได้โดยใช้มาตรฐานโค้งเตรียมสาร .
2.8 . ศึกษาผลของโปรตีนในเนื้อสัตว์ที่เลือกของการออกซิเดชันของไขมัน
จากเศษส่วนที่มี ORAC แข็งแรงหรือ dpph การคัดเลือกและประเมินการจัดกิจกรรมเพิ่มเติมสำหรับต้านอนุมูลอิสระต้านการออกซิเดชันของไขมันในเนื้อดินเนื้อวัวสดจดจ้องที่ได้รับจากร้านขายของชำท้องถิ่นและพื้นดินผ่านจาน เนื้อคน ( 250 กรัม ) ต่อโฮโมมีหรือไม่มีโปรตีนสดโดยแมโครของเครื่องกำเนิดไฟฟ้าและวางลงใน 50 ml ขายขาด , ชั่งน้ำหนัก และไฟฟ้าเพื่อเอาอากาศเอาไว้ เพื่อส่งเสริมลิปิดออกซิเดชันเนื้อผสมสุกที่อุณหภูมิภายในของ 71 C ในการอาบน้ำ อุณหภูมิภายในถูกตรวจสอบโดย needlesize thermocouple แทรกเข้าไปในศูนย์ความร้อนของหลอด ในการปรุงอาหาร หลังจากเย็นเพื่ออุณหภูมิห้อง , บดและปรุงสุกเนื้อจำนวนวางไว้ในถาด , ปกคลุมด้วยฟิล์มพีวีซี และเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสขอบเขตของการออกซิเดชันของไขมันในเนื้อแต่ละตัวอย่างถูกกำหนดโดยเท่ากับกรดปฏิกิริยาสาร ( ปกติ ) ในวันที่ 1 , 8 และ 15 โพสต์อาหาร ( โฮแกน et al . , 2009 ) สุดท้ายกันได้กับเส้นโค้งปกติมาตรฐานและแสดงเป็นมิลลิกรัมของมาลอนไดอัลดีไฮด์ ( MDA ) เทียบเท่าต่อกิโลกรัมของตัวอย่าง ( มก. ( เทียบเท่า / กก. ) .
2.9 .
สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลค่าเฉลี่ยของค่าในแต่ละการทดสอบเปรียบเทียบโดยใช้ t-test twosample . ข้อมูลจะถูกนำเสนอเป็นค่าเฉลี่ย SD ( ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน ) ความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ เมื่อค่า P คือ < 0.05 ( SPSS for Windows Version 10.0.5 . , 1999 ) สองหาง หาค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์แบบเพียร์สัน ทดสอบ มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาความสัมพันธ์ระหว่าง หมายถึง