2. Materials and methodsFresh Washi

2. Materials and methods
Fresh Washington Navel oranges were purchased from the local market. The peel (white mesocarp and orange–yellow exocarp), remained after the extraction of the juice, was sliced into small pieces and grounded with an electric mill (Braun 4240, Germany).

2.1. Compositional analysis
Orange peel moisture content was determined by gravimetric analysis after drying at 105 °C to constant weight. Key nutrients in the different fractions of OP were quantified as described by Mantzouridou and Paraskevopoulou [8].

2.2. Yeast strain and inoculum preparation
A commercial wine yeast strain, Vitilevure MT (S .cerevisiae) that expresses and enhances varietal aromas very well was employed in this study. The selected yeast was provided in dry form by a Greek wine industry (Tsantalis S.A., Chalkidiki, Greece). Cells were activated by adding the appropriate quantity of distilled water (1:10, w/v), followed by periodical stirring inside a water bath (35–37 °C) for 15–20 min. For inoculum preparation 2 mL of the cell suspension were transferred in 100 mL of a synthetic medium with the following composition (g/L): 20, glucose (Panreac, Barcelona, Spain); 10, soy peptone (Lab M Ltd., Lancashire, UK); 5, yeast extract (Merck, Darmstadt, Germany). The culture was incubated on a rotating shaker at 200 rpm, 30 °C to a final OD600 value of approximately 2. Then, yeast cells were collected by centrifugation (3000 × g, 10 min), washed and resuspended in a sterile saline solution (9 g/L NaCl) (Merck) to reach a concentration of 1 × 109 colony forming units cfu/mL.

2.3. Solid state fermentation
Experiments were conducted in 250 mL Erlenmeyer flasks containing 55 g of milled samples of OP (wet weight basis) corresponding to loading of 60% of the flask working volume. The material was enriched with the following nutrients (g/kg substrate): 0.4, yeast extract; 1.0, (NH4)2SO4; 1.0, KH2PO4; 5.0, MgSO4. All salts were from Merck. The substrate was sterilized by autoclaving at 120 °C for 15 min unless otherwise stated. After cooling, the substrate (pH 6.0) was inoculated with 1.0 × 107 cfu/g and incubated at 25 °C for 5 days. The volume of the liquid phase (nutrient solution) and inoculum added to the substrate was chosen to reach final water content of 75% (w/w) from initial water content of 72.3% (w/w). This value is within the range of values reported in literature for ethanol production by SSF of other solid wastes using S. cerevisiae [24] and [25]. At specific time intervals (0, 12, 24, 48, 72, 96 and 120 h), the whole content of a flask was removed and subjected to further analysis. Also, the enriched OP was allowed to undergo spontaneous (uninoculated) fermentation by indigenous microflora for 72 h. All fermentation experiments were carried out in triplicate.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการส้ม Navel วอชิงตันสดซื้อมาจากตลาดท้องถิ่น เปลือก (mesocarp สีขาวและสีส้ม – เหลือง exocarp), ยังคงอยู่หลังจากการสกัดน้ำผลไม้ ถูกหั่นเป็นชิ้นเล็ก ๆ และต่อสายดินกับตัวโรงไฟฟ้า (วอนเบราน์ 4240 เยอรมนี)2.1. การอัพเปลือกส้มชื้นถูกกำหนด โดยวิเคราะห์แบบกราวิเมตริกหลังการอบแห้งที่อุณหภูมิ 105 ° C น้ำหนักคง สารอาหารที่สำคัญในส่วนอื่นของ OP ที่วัดตามที่อธิบายไว้ โดย Mantzouridou และ Paraskevopoulou [8]2.2. ยีสต์สายพันธุ์และ inoculum เตรียมสายพันธุ์ยีสต์ไวน์พาณิชย์ MT Vitilevure (S .cerevisiae) ที่แสดง และเพิ่มกลิ่นพันธุ์ดีถูกใช้ในการศึกษานี้ ยีสต์ที่เลือกมาแบบแห้งอุตสาหกรรมไวน์ภาษากรีก (Tsantalis S.A. ตาราง กรีซ) เซลล์ที่ถูกใช้งาน โดยการเพิ่มปริมาณที่เหมาะสมของน้ำกลั่น (1:10, w/v), ตาม ด้วยเปิดกวนภายในอ่างน้ำ (35-37 ° C) สำหรับ 15-20 นาที สำหรับการเตรียม inoculum 2 มล.ระงับเซลล์ถูกโอนใน 100 มิลลิลิตรของอาหารสังเคราะห์ด้วยองค์ประกอบต่อไปนี้ (บัญชี): น้ำตาลกลูโคส 20 (Panreac บาร์เซโลนา สเปน); 10 ถั่วเหลือง peptone (จำกัดห้องปฏิบัติการ M, Lancashire, UK); 5 ยีสต์สกัด (Merck ดาร์มสตัดท์ เยอรมนี) วัฒนธรรมได้รับการกกบนปั่นหมุนที่ 200 rpm, 30 ° C สุดท้าย OD600 ค่าเป็น 2 แล้ว ยีสต์เซลล์ถูกรวบรวม โดยการหมุนเหวี่ยง (3000 × g, 10 นาที), ล้าง และ resuspended ในการฆ่าเชื้อเกลือ (9 g/L NaCl) (Merck) ถึงความเข้มข้น 1 × 109 อาณานิคมสร้างหน่วย อาหรับ/mL2.3. ทึบสถานะหมักดำเนินการทดลองในขวด Erlenmeyer ขนาด 250 มล.ประกอบด้วย 55 กรัมของสารตัวอย่างของ OP (พื้นฐานน้ำหนักเปียก) ที่สอดคล้องกับโหลดของ 60% ของกระติกทำเสียง วัสดุถูกอุดม ด้วยสารอาหารต่อไปนี้ (ผิวกรัมกิโลกรัม): สารสกัดจากยีสต์ 0.4 1.0, (NH4) 2SO4 1.0, KH2PO4 5.0, MgSO4 เกลือทั้งหมดได้จากเมอร์ค พื้นผิวถูกฆ่าเชื้อ ด้วย autoclaving ที่ 120 ° C 15 นาทีเว้นแต่ระบุไว้เป็นอย่างอื่น หลังจากเย็น พื้นผิว (ค่า pH 6.0) inoculated กับ 1.0 × 107 อาหรับ/g และได้รับการกกที่ 25 ° C 5 วัน เลือกปริมาณของเฟสของเหลว (สารอาหารแก้ปัญหา) และเพิ่มพื้นผิว inoculum ถึงน้ำสุดท้ายเนื้อหาของ 75% (w/w) จากต้นน้ำ 72.3% (w/w) ค่านี้จะอยู่ในช่วงของค่าที่รายงานในเอกสารสำหรับการผลิตเอทานอล โดย SSF ของเสียอื่น ๆ ไม้ใช้ S. cerevisiae [24] [25] ในช่วงเวลาเฉพาะ (0, 12, 24, 48, 72, 96 และ 120 ชั่วโมง), เนื้อหาทั้งหมดของขวดถูกเอาออก และการวิเคราะห์เพิ่มเติม ยัง OP อุดมได้อนุญาตให้ทำการหมัก (uninoculated) ที่เกิดขึ้นเอง โดยจุลินทรีย์ท้องถิ่นสำหรับ 72 ชั่วโมง ทดลองหมักทั้งหมดดำเนินการลข้อ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธี
ส้มสดวอชิงตันสะดือที่ซื้อมาจากตลาดในประเทศ เปลือก (mesocarp สีขาวและสีส้มสีเหลือง exocarp) ยังคงอยู่หลังจากการสกัดน้ำผลไม้ที่ถูกหั่นเป็นชิ้นเล็ก ๆ และสายดินกับโรงงานไฟฟ้า (Braun 4240, เยอรมนี). 2.1 วิเคราะห์ compositional ส้มความชื้นเปลือกถูกกำหนดโดยการวิเคราะห์ gravimetric หลังจากการอบแห้งที่อุณหภูมิ 105 องศาเซลเซียสให้น้ำหนักคงที่ สารอาหารสำคัญในการเศษส่วนที่แตกต่างกันของ OP ถูกวัดตามที่อธิบาย Mantzouridou และ Paraskevopoulou [8]. 2.2 ยีสต์และการเตรียมหัวเชื้อพาณิชย์ยีสต์ไวน์ Vitilevure มอนแทนา (S .cerevisiae) ที่แสดงออกและช่วยเพิ่มกลิ่นหอมพันธุ์ดีมากเป็นลูกจ้างในการศึกษานี้ ยีสต์ที่เลือกถูกจัดให้อยู่ในรูปแบบแห้งโดยอุตสาหกรรมไวน์กรีก (Tsantalis SA, ชาลคิ, กรีซ) เซลล์ที่ถูกเปิดใช้งานโดยการเพิ่มปริมาณที่เหมาะสมของน้ำกลั่น (1:10 w / v) ตามด้วยกวนวารสารภายในอ่างน้ำ (35-37 ° C) ประมาณ 15-20 นาที สำหรับการเตรียมหัวเชื้อ 2 มิลลิลิตรเซลล์แขวนลอยถูกย้ายใน 100 มลของกลางสังเคราะห์ที่มีองค์ประกอบดังต่อไปนี้ (กรัม / ลิตร): 20, กลูโคส (Panreac, บาร์เซโลนา, สเปน); 10 เปปโตนถั่วเหลือง (แล็บ M จำกัด Lancashire, UK); 5 สารสกัดจากยีสต์ (เมอร์ค, ดาร์มสตัด, เยอรมนี) วัฒนธรรมถูกบ่มในเครื่องปั่นหมุนที่ 200 รอบต่อนาทีอุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นค่า OD600 สุดท้ายประมาณ 2. จากนั้นเซลล์ยีสต์ถูกเก็บรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยง (3000 × G, 10 นาที), ล้างและ resuspended ในสารละลายน้ำเกลือปราศจากเชื้อ ( 9 กรัม / ลิตรโซเดียมคลอไรด์) (เมอร์ค) ถึงความเข้มข้นของ 1 × 109 อดีตอาณานิคมหน่วย CFU / ml. 2.3 การหมักของรัฐที่มั่นคงทดลองดำเนินการใน 250 มิลลิลิตรขวด Erlenmeyer มี 55 กรัมของตัวอย่างข้าวสารของ OP (โดยน้ำหนักเปียก) ที่สอดคล้องกับการโหลดของ 60% ของปริมาณการทำงานขวด วัสดุที่ถูกอุดมไปด้วยสารอาหารดังต่อไปนี้ (กรัม / กิโลกรัมสารตั้งต้น): 0.4, สารสกัดจากยีสต์ 1.0 (NH4) 2SO4; 1.0 KH2PO4; 5.0 MgSO4 เกลือทุกคนจากเมอร์ สารตั้งต้นที่ได้รับการฆ่าเชื้อโดยการนึ่งฆ่าเชื้อที่ 120 องศาเซลเซียสนาน 15 นาทียกเว้นที่ระบุไว้เป็นอย่างอื่น หลังจากเย็น, พื้นผิว (pH 6.0) คือเชื้อด้วย 1.0 × 107 CFU / g และบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 วัน ปริมาณของของเหลว (สารละลายธาตุอาหาร) และหัวเชื้อเพิ่มให้กับพื้นผิวได้รับการแต่งตั้งไปถึงปริมาณน้ำสุดท้ายของ 75% (w / w) จากปริมาณน้ำเริ่มต้นของ 72.3% (w / w) ค่านี้อยู่ในช่วงของค่าที่รายงานในวรรณคดีสำหรับการผลิตเอทานอลโดย SSF ของเสียที่เป็นของแข็งอื่น ๆ ที่ใช้ S. cerevisiae [24] และ [25] ช่วงเวลาเฉพาะเวลา (0, 12, 24, 48, 72, 96 และ 120 ชั่วโมง) เนื้อหาทั้งหมดของขวดจะถูกลบออกและอยู่ภายใต้การวิเคราะห์ต่อไป นอกจากนี้ OP อุดมได้รับอนุญาตให้รับที่เกิดขึ้นเอง (uninoculated) หมักโดยจุลินทรีย์พื้นเมือง 72 ชั่วโมง การทดลองหมักทั้งหมดถูกดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่า

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการใหม่วอชิงตันสะดือส้มซื้อมาจากตลาดในประเทศ เปลือก ( เปลือกสีขาวและสีเหลืองและสีส้มโซคาร์ป ) ยังคงอยู่หลังจากการสกัดน้ำผลไม้ที่ถูกหั่นเป็นชิ้นเล็ก ๆและให้กำลังใจกับโรงงานผลิตไฟฟ้า ( บร 4240 , เยอรมัน )2.1 . การวิเคราะห์ส่วนประกอบความชื้นของเปลือกส้มถูกกำหนดโดยการวิเคราะห์ด้วยหลังจากการอบแห้งที่ 105 ° C น้ำหนักคงที่ สารอาหารที่สำคัญในส่วนต่าง ๆของ OP มี quantified ตามที่อธิบายไว้โดย mantzouridou และ paraskevopoulou [ 8 ]2.2 . สายพันธุ์ของยีสต์และเชื้อการเตรียมไวน์ยีสต์ทางการค้า ความเครียด vitilevure MT ( S . cerevisiae ) ที่แสดงและมอบพันธุ์กลิ่นหอมมากใช้ในการศึกษานี้ ยีสต์ที่ถูกเลือกไว้ในรูปแบบแห้ง โดยอุตสาหกรรมไวน์กรีก ( tsantalis SA , ชาลคิดีคี , กรีซ ) เซลล์ถูกกระตุ้นโดยการเพิ่มปริมาณที่เหมาะสมของน้ำกลั่น ( 1 : 10 w / v ) ตามด้วยการปลุกเร้าภายในอาบน้ำ ( 35 - 37 ° C ) 15 – 20 นาที โดยการเตรียม 2 ml ของเซลล์แขวนลอยที่ถูกย้าย ใน 100 มิลลิลิตรของอาหารสังเคราะห์ที่มีองค์ประกอบดังต่อไปนี้ ( g / ลิตร ) : 20 , กลูโคส ( panreac , บาร์เซโลนา , สเปน ) ; 10 , ถั่วเหลืองเปปโตน ( lab ม. จำกัด แลนคาเชียร์ , อังกฤษ ) 5 , สารสกัดจากยีสต์ ( เมอร์คดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี ) วัฒนธรรมถูกบ่มในการหมุนปั่นที่ความเร็วรอบ 200 รอบต่อนาที , 30 ° C ค่า od600 สุดท้ายประมาณ 2 แล้วเซลล์ยีสต์ถูกเก็บโดยการเหวี่ยงแยก ( 3000 ×กรัม , 10 นาที ) , ล้างและ resuspended ในน้ำเกลือปลอดเชื้อ ( 9 g / L NaCl ) ( Merck ) ถึงระดับความเข้มข้น 1 × 109 CFU / ml อาณานิคมสร้างหน่วย2.3 การหมักของแข็งการทดลองหมักในฟลาสก์ขนาด 250 มิลลิลิตร ขวดบรรจุข้าวสารตัวอย่าง OP 55 กรัม ( น้ำหนักเปียก ) สอดคล้องกับโหลดของ 60% ของขวดงานปริมาณ วัสดุที่อุดมไปด้วยสารอาหารดังต่อไปนี้ ( กรัม / กิโลกรัม ( ) : 0.4 ยีสต์สกัด ; 1.0 ( NH4 ) 2so4 ; 1.0 , kh2po4 ; 5.0 MgSO4 ใ . ทั้งหมดเกลือจากบริษัทเมอร์ค พื้นผิวถูกฆ่าเชื้อโดยอัตราส่วนโฟกัสที่ 120 ° C เป็นเวลา 15 นาที เว้นแต่ที่ระบุไว้เป็นอย่างอื่น หลังจากเย็นผิว ( pH 6.0 ) เป็นเชื้อ 1.0 × 107 CFU / g และบ่มที่อุณหภูมิ 25 ° C เป็นเวลา 5 วัน ปริมาณของเฟสเหลว ( สารละลาย ) และเชื้อเพิ่มพื้นผิวได้รับเลือกถึงปริมาณน้ำสุดท้ายของ 75 % ( w / w ) จากปริมาณน้ำที่สามารถเริ่มต้นของ % ( w / w ) ค่า อยู่ในช่วงของค่าที่รายงานในวรรณคดีสำหรับการผลิตเอทานอลโดย SSF ของขยะอื่น ๆที่ใช้ S . cerevisiae [ 24 ] และ [ 25 ] ในช่วงเวลาที่เฉพาะเจาะจง ( 0 , 12 , 24 , 48 , 72 , 96 และ 120 ชั่วโมง ) , เนื้อหาทั้งหมดของขวดจะถูกลบออก และต้องวิเคราะห์เพิ่มเติม ยัง อุดม OP ได้รับอนุญาตให้ผ่านเอง ( ใส่ ) การหมักโดยจุลินทรีย์พื้นบ้านสำหรับ 72 ชั่วโมง การทดลองหมักทั้งหมด พบว่าทั้งสามใบ