Agrobacterium-mediated transformati

Agrobacterium-mediated transformation of rice
Japonica rice varieties Nipponbare and
Taichung 65 were used for transformation of
pPI01_B2S. Mature rice seeds were used for
callus induction for 4 weeks (Toki, 1997). The
scutellum-derived embryogenic calli from mature
rice seeds were subcultured using fresh induction
medium for 3–5 days. The subcultured calli were
infected with A. tumefaciens strain AGL1 harboring
pPI01_B2S and then co-cultivated for 3 days.
After 3-day co-cultivation, the calli were washed to
remove excess bacteria and then cultured on
selection medium supplemented with 15 mg/l
hygromycin and 150 mg/l timentin for 2 weeks.
Following the 1st selection, the calli were
transferred to the 2nd selection medium
supplemented with 30 mg/l hygromycin and 150
mg/l timentin and cultured for 2 weeks.
After 2 cycles of selection, the surviving calli
were transferred to regeneration medium
supplemented with 30 mg/l hygromycin and 150 mg/l
timentin and cultured at 28  2 oC with a 16 h
photoperiod and later subcultured every two weeks
until the calli were regenerated to plantlets. Then,
the plantlets were transferred to half-strength MS
medium for root formation (Sakulsingharoj et al.,
2014).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

อโกรแบคทีเรียม mediated แปลงข้าวพันธุ์ข้าว japonica Nipponbare และใช้สำหรับการเปลี่ยนแปลงของไท 65pPI01_B2S เมล็ดข้าวสุกใช้สำหรับเหนี่ยวนำให้ 4 สัปดาห์ (โท 1997) ที่มา scutellum calli เยื่อจากผู้ใหญ่เมล็ดข้าวที่ subcultured ใช้เหนี่ยวนำสดปานกลาง 3-5 วัน มี subcultured calliติดเชื้อ A. tumefaciens harboring ต้องใช้ AGL1pPI01_B2S แล้ว ร่วม cultivated 3 วันหลังจาก 3 วันร่วมปลูก calli ถูกล้างไปลบส่วนเกินของแบคทีเรีย และอ่างจากนั้น บนเลือกสื่อเสริม ด้วย 15 mg/lhygromycin และ 150 mg/l timentin 2 สัปดาห์ต่อไปนี้เลือก 1, calli ถูกโอนย้ายไปยังสื่อที่เลือก 2เสริม ด้วย hygromycin 30 mg/l และ 150timentin mg/l และอ่าง 2 สัปดาห์หลังจากรอบ 2 เลือก calli รอดตายมีการถ่ายโอนการฟื้นฟูปานกลางเสริม ด้วย hygromycin 30 mg/l และ 150 mg/ltimentin และอ่างที่ 28  2 องศาเซลเซียสกับ 16 hชั่วโมง และ subcultured ทุกสองสัปดาห์ต่อมาจน calli ถูกสร้างเพื่อ plantlets แล้วplantlets ถูกโอนย้ายไป MS แรงครึ่งขนาดกลางสำหรับก่อราก (Sakulsingharoj et al.,2014)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เชื้อ Agrobacterium ข้าว
Japonica พันธุ์ข้าวและ Nipponbare
Taichung 65 ถูกนำมาใช้สำหรับการเปลี่ยนแปลงของ
pPI01_B2S เมล็ดข้าวผู้ใหญ่ถูกนำมาใช้สำหรับการเหนี่ยวนำแคลลัสเป็นเวลา 4 สัปดาห์ (โทกิ, 1997) แคลลัส embryogenic scutellum ที่ได้มาจากผู้ใหญ่เมล็ดข้าวที่ถูกเลี้ยงโดยใช้การเหนี่ยวนำสดสื่อกลางใน3-5 วัน เลี้ยงแคลลัสได้รับการติดเชื้อเอ AGL1 tumefaciens สายพันธุ์เก็บงำ pPI01_B2S แล้วร่วมการเพาะปลูกเป็นเวลา 3 วัน. หลังจาก 3 วันร่วมการเพาะปลูกที่แคลลัสถูกล้างเพื่อกำจัดเชื้อแบคทีเรียส่วนเกินแล้วเลี้ยงบนกลางเลือกเสริมด้วย15 mg / l ไฮโกรและ 150 mg / l timentin เป็นเวลา 2 สัปดาห์. ต่อไปนี้การเลือกที่ 1 ที่แคลลัสได้รับการถ่ายโอนไปยังสื่อที่เลือก2 เสริมด้วย 30 mg / l ไฮโกรและ 150 mg / l timentin และเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 2 สัปดาห์. หลังจาก 2 รอบของการเลือก แคลลัสที่รอดตายถูกย้ายไปกลางฟื้นฟูเสริมด้วย30 mg / l ไฮโกรและ 150 mg / l timentin และเพาะเลี้ยงวันที่ 28  2 องศากับ 16 ชั่วโมงต่อช่วงแสงและต่อมาเลี้ยงทุกสองสัปดาห์จนกระทั่งแคลลัสที่ถูกสร้างใหม่ที่จะต้น จากนั้นต้นกล้าที่ถูกย้ายไปครึ่งแรง MS สื่อกลางในการก่อราก (Sakulsingharoj et al., 2014)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

อโกรแบคทีเรียม ( แปลงข้าว

nipponbare ข้าวพันธุ์ Taichung 65 และใช้สำหรับการเปลี่ยนแปลงของ
ppi01_b2s ซึ่งเมล็ดพันธุ์ข้าวที่ใช้สำหรับ
ชักนำ 4 สัปดาห์ ( Toki , 1997 )
scutellum ได้มาเลี้ยงแคลลัสจากผู้ใหญ่
ข้าวเมล็ด subcultured ใช้สื่อเหนี่ยว
สด 3 – 5 วัน การ subcultured แคลลัส
ติดเชื้อ .ซีเครียด agl1 harboring
ppi01_b2s แล้วร่วมปลูกเป็นเวลา 3 วัน หลังจาก 3 วัน
Co การเพาะปลูก , แคลลัสล้าง

ลบส่วนเกินแบคทีเรีย จากนั้นนำไปเลี้ยงบนอาหารสูตร MS ที่เสริมด้วย
เลือก 15 mg / l
ยีนต้านยา hygromycin และ 150 มก. / ล. timentin เป็นเวลา 2 สัปดาห์ ต่อ 1

เลือก , แคลลัสโอนไป 2 การเลือกสื่อ
เสริม 30 มก. / ล. และ 150
ยีนต้านยา hygromycinมิลลิกรัม / ลิตร timentin และเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 2 สัปดาห์ หลังจาก 2 รอบ

การรอดชีวิต แคลลัสมีการโอน
กลางฟื้นฟูเสริม 30 มก. / ล. และยีนต้านยา hygromycin 150 mg / l
timentin และเพาะเลี้ยงที่ 28  2 OC กับแสง 16 H

และต่อมา subcultured ทุก 2 สัปดาห์จนแคลลัส อยู่ได้ จะได้ดีที่สุด แล้วยอดโอนครึ่งนึง

แรง MSสื่อเพื่อการพัฒนาราก ( sakulsingharoj et al . ,
2014 )