A549 cell survival testTo ensure th

A549 cell survival test
To ensure the safety of phage therapy, we investigated the
toxicity of crude isolated phages to A549 human lung epithelial
cells. A549 cells (105 cell well21) were plated in a 24-well ELISA
plate and incubated for 12 h (37uC, 5% CO2) in 100 ml per well of
Dulbecco’s modified Eagle medium (DMEM) (Sigma, D5523,
USA) supplemented with 5% fetal calf serum. Then, 106 CFU A.
baumannii KM18 were added to the cells, followed by the
immediate addition of phage at different titers (MOI =0, 1000,
1, 0.1, 0.01). The cells were cultured for 24 h at 37uC in a 5%
CO2 incubator. As a control, A549 cells were treated with
109 PFU phages without A. baumannii KM18. After incubation, the
wells were washed twice with PBS and incubated with trypsin-
EDTA solution (0.05% trypsin, 0.5 mM EDTA-tetra sodium) to
allow surviving cells to separate from the well. The cell counts of
Table 1. The antibiotic sensitivity results of reference strains and the spot test of eight phages against the reference strains of A.
baumannii used in this study.
Strain Phages
Antibiotics
sensitivity{ Source{
wkm18p wTZ1 w2449N wAb21 wKM5 w314 w134 w2449p
Ab016 +++* 2 + 2 2 2 2 2 CS TVG
Ab019 +++ 2 2 2 2 2 2 +++ CS TVG
Ab14 2* 2 + 2 2 2 +++ + CS TVG
Ab15 2 2 +++ 2 2 +++ 2 +++ CS TVG
Ab16 2 2 + 2 2 +++ 2 +++ CS TVG
AB19 2 +++ 2 2 2 2 2 2 CS TVG
Ab23 +++ 2 2 2 2 2 +++ 2 CS TVG
Ab26 2 2 + 2 2 +++ 2 +++ CS TVG
Ab29 +++ 2 2 2 2 2 +++ +++ CS TVG
Ab35 +++ 2 2 2 2 2 +++ +++ CS TVG
Ab39 2 2 2 2 2 +++ 2 + CS TVG
Ab40 +++ 2 2 2 2 2 +++ + CS TVG
Ab54 2 2 2 2 2 2 2 +++ CS TVG
TVG55 2 2 +++ 2 2 +++ 2 2 CRAB TVG
NTU2449 2 2 +++ 2 2 + 2 2 CRAB NTU
KM5 2 2 2 2 +++ 2 2 2 MDRAB KM
Ab21 +++ 2 2 +++ 2 2 2 2 MDRAB TVG
TVG68 +++ 2 2 2 2 2 +++ 2 MDRAB TVG
Ab002 +++ 2 + 2 2 2 +++ 2 XDR-AB TVG
Ab010 +++ 2 2 2 2 2 +++ + XDR-AB TVG
Ab011 +++ 2 2 2 2 2 +++ 2 XDR-AB TVG
Ab015 +++ 2 2 2 2 2 +++ + XDR-AB TVG
Ab021 +++ 2 2 2 2 2 +++ + XDR-AB TVG
KM16 2 +++ 2 2 2 2 2 2 XDR-AB KM
KM18 +++ 2 2 2 2 2 +++ + XDR-AB KM
TSG2 2 2 + 2 2 +++ 2 2 XDR-AB TSG
TSG4 2 2 +++ 2 2 +++ 2 2 XDR-AB TSG
TSG5 2 +++ 2 2 2 2 2 2 XDR-AB TSG
TSG6 2 +++ 2 2 2 2 2 2 XDR-AB TSG
TVG46 +++ 2 2 2 2 2 +++ 2 XDR-AB TVG
TVG52 2 +++ 2 2 +++ 2 2 XDR-AB TVG
TVG57 2 +++ 2 2 2 2 2 2 XDR-AB TVG
TVG58 2 +++ 2 2 2 2 2 2 XDR-AB TVG
TZ1 2 +++ 2 2 2 2 2 2 XDR-AB TZ
*‘‘2’’: no effect; ‘‘+’’: turbid zone; ‘‘+++’’: clear zone.
{CS: carbapenem sensitive A. baumannii; CRAB: carbapenem resistant A. baumannii (including imipenem and meropenem resistant); MDRAB: multi-drug resistant
(resistance to 3 or more of the following classes of antipseudomonal cephalosporin, antipseudomonal carbapenem, ampicillin-sulbactam, fluoroquinolone,
aminoglycoside); XDR-AB: extensively drug resistant Acinetobacter baumannii (resistant to all antibiotics except colistin or tigecycline).
{TVG: Taichung Veterans General Hospital, Medical Center; NTU: National Taiwan University Hospital, Medical Center; KM: Kaohsiung Medical University, Chung-Ho
Memorial Hospital; TZ: Hualien Tzu Chi Medical Center.; TSG: Tri-Service General Hospital, Medical Center.
doi:10.1371/journal.pone.0046537.t001
Phage Therapy for XDRAB
PLOS ONE | www.plosone.org 3 October 2012 | Volume 7 | Issue 10 | e46537
surviving A549 cells suspended in trypsin solution were determined
by microscopic observation (Nikon, E2000, Japan).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทดสอบความอยู่รอดของเซลล์ A549
ความปลอดภัยของ phage บำบัด เราสอบสวน
ความเป็นพิษของ phages แยกน้ำมันกับ epithelial ปอดมนุษย์ A549
เซลล์ เซลล์ A549 (105 เซลล์ well21) ถูกชุบใน ELISA 24 ดี
แผ่น และ incubated สำหรับ 12 h (37uC, 5% CO2) ใน 100 ml ต่อดีของ
ดุลเบกโกของปรับเปลี่ยนสื่ออีเกิล (DMEM) (ซิก D5523,
USA) เสริม ด้วยเซรั่มลูกครรภ์ 5% แล้ว 106 CFU A.
baumannii KM18 ถูกเพิ่มไปยังเซลล์ ตาม
แห่ง phage ที่ titers อื่นทันที (อย = 0, 1000,
1, 0.1, 0.01) เซลล์มีอ่างสำหรับ 24 ชมที่ 37uC 5%
CO2 incubator เป็นตัวควบคุม เซลล์ A549 ถูกรักษาด้วย
phages PFU 109 โดย A. baumannii KM18 หลังจากบ่ม การ
บ่อล้าง ด้วย PBS สอง และ incubated กับทริปซิน-
EDTA โซลูชัน (0.05% ทริปซิน 05 mM EDTA tetra โซเดียม) การ
ให้รอดเซลล์แยกจากดี เซลล์นับของ
1 ตาราง ผลความไวต่อยาปฏิชีวนะของสายพันธุ์อ้างอิงและทดสอบจุดของ phages แปดกับสายพันธุ์อ้างอิงของ A.
baumannii ที่ใช้ในการศึกษานี้
Phages ต้องใช้
ยา
ไว {แหล่ง {
wkm18p wTZ1 w2449N wAb21 wKM5 w314 w134 w2449p
Ab016 * 2 2 2 2 2 2 CS TVG
Ab019 2 2 2 2 2 2 CS TVG
Ab14 2 * 2 2 2 2 CS TVG
Ab15 2 2 2 2 2 CS TVG
Ab16 2 2 2 2 2 CS TVG
AB19 2 2 2 2 2 2 2 CS TVG
Ab23 2 2 2 2 2 2 CS TVG
Ab26 2 2 2 2 2 CS TVG
Ab29 2 2 2 2 2 CS TVG
Ab35 2 2 2 2 2 CS TVG
Ab39 2 2 2 2 2 2 CS TVG
Ab40 2 2 2 2 2 CS TVG
Ab54 2 2 2 2 2 2 2 CS TVG
TVG55 2 2 2 2 2 2 ปู TVG
NTU2449 2 2 2 2 2 2 ปู NTU
KM5 2 2 2 2 2 2 2 MDRAB KM
Ab21 2 2 2 2 2 2 MDRAB TVG
TVG68 2 2 2 2 2 2 MDRAB TVG
Ab002 2 2 2 2 2 TVG XDR AB
Ab010 2 2 2 2 2 TVG XDR-AB
Ab011 2 2 2 2 2 2 TVG XDR AB
Ab015 2 2 2 2 2 TVG XDR-AB
Ab021 2 2 2 2 2 TVG XDR AB
KM16 2 2 2 2 2 2 2 KM XDR AB
KM18 2 2 2 2 2 KM XDR AB
TSG2 2 2 2 2 2 2 TSG XDR-AB
TSG4 2 2 2 2 2 2 TSG XDR AB
TSG5 2 2 2 2 2 2 2 TSG XDR AB
TSG6 2 2 2 2 2 2 2 TSG XDR AB
TVG46 2 2 2 2 2 2 TVG XDR AB
TVG52 2 2 2 2 2 TVG XDR-AB
TVG57 2 2 2 2 2 2 2 TVG XDR-AB
TVG58 2 2 2 2 2 2 2 TVG XDR AB
TZ1 2 2 2 2 2 2 2 XDR AB TZ
*'' 2'': ไม่มีผล '' '': โซน turbid '' '': ยกเลิกโซน
{ CS: carbapenem สำคัญ A. baumannii ปู: ทน carbapenem A. baumannii (รวม imipenem และ meropenem ทน); MDRAB: ทนทานต่อยาหลาย
(ความต้านทานน้อย 3 ชั้นต่อไปนี้ของ antipseudomonal cephalosporin, antipseudomonal carbapenem แอมพิซิลลินซัลแบคแตม fluoroquinolone,
aminoglycoside); XDR-AB: อย่างกว้างขวางยาทน Acinetobacter baumannii (ทนต่อยาปฏิชีวนะทั้งหมดยกเว้น colistin หรือ tigecycline) .
{ TVG: ไททหารผ่านศึกโรงพยาบาล ศูนย์การแพทย์ NTU: พยาบาลมหาวิทยาลัยแห่งชาติไต้หวัน ศูนย์การแพทย์ KM: มหาวิทยาลัยแพทย์เกาสง ชุโฮจิมินห์
โรงพยาบาล TZ: ศูนย์แพทย์สำนักงานใหญ่ซู่ของฮัวเหลียนชี.; TSG: Tri-บริการโรงพยาบาล ศูนย์การแพทย์.
doi:101371/journal.pone.0046537.t001
Phage บำบัดสำหรับ XDRAB
PLOS หนึ่ง | www.plosone.org 3 2555 ตุลาคม | เล่ม 7 | ปัญหา 10 | e46537
รอด A549 เซลล์ที่ถูกระงับในโซลูชันทริปซินได้กำหนด
โดยสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์ (Nikon, E2000 ญี่ปุ่น)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เซลล์ A549 ทดสอบความอยู่รอด
เพื่อให้มั่นใจในความปลอดภัยของการรักษาด้วยการทำลายจุลินทรีย์ที่เราตรวจสอบ
ความเป็นพิษของ phages แยกน้ำมันดิบ A549 เยื่อบุผิวปอดของมนุษย์
เซลล์ เซลล์ A549 (105 well21 มือถือ) มีชุบใน 24 ดี ELISA
แผ่นและบ่มเป็นเวลา 12 ชั่วโมง (37uC, 5% CO2) ใน 100 มิลลิลิตรต่อดี
Dulbecco ของการปรับเปลี่ยน Eagle กลาง (DMEM) (Sigma, D5523,
USA) เสริมด้วย 5% ซีรั่มลูกวัวของทารกในครรภ์ จากนั้น 106 CFU A.
baumannii KM18 ถูกเพิ่มเข้าไปในเซลล์ตามด้วย
นอกจากนี้ทันทีทำลายจุลินทรีย์ที่ titers ที่แตกต่างกัน (MOI = 0, 1000
1, 0.1, 0.01) เซลล์ที่ได้รับการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่ 37uC ใน 5%
CO2 ศูนย์บ่มเพาะ เป็นตัวควบคุมเซลล์ A549 ได้รับการรักษาด้วย
109 phages PFU โดยไม่ต้อง A. baumannii KM18 หลังจากการบ่มที่
หลุมถูกล้างสองครั้งด้วยพีบีเอสและบ่มด้วย trypsin-
โซลูชั่น EDTA (0.05% trypsin โซเดียม 0.5 มิลลิ EDTA-Tetra) เพื่อ
ให้มีชีวิตรอดเซลล์จะแยกออกจากกัน จำนวนเซลล์ของ
ตารางที่ 1. ผลความไวต่อยาปฏิชีวนะของเชื้ออ้างอิงและทดสอบจุดแปด phages กับสายพันธุ์อ้างอิง A.
baumannii ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้
สายพันธุ์ Phages
ยาปฏิชีวนะ
ไว {{มา
wkm18p wTZ1 w2449N wAb21 wKM5 w314 w134 w2449p
Ab016 + + + * 2 + 2 2 2 2 2 CS TVG
Ab019 + + + 2 2 2 2 2 2 + + + CS TVG
Ab14 2 * 2 + 2 2 2 + + + + CS TVG
AB15 2 2 + + + 2 2 + + + 2 + + + CS TVG
Ab16 2 2 2 2 + + + + + 2 + + + CS TVG
AB19 2 + + + 2 2 2 2 2 2 CS TVG
Ab23 + + + 2 2 2 2 2 + + + 2 CS TVG
Ab26 2 2 2 2 + + + + + 2 + + + CS TVG
Ab29 + + + 2 2 2 2 2 + + + + + + + + CS TVG
AB35 + + + 2 2 2 2 2 + + + + + + + + CS TVG
Ab39 2 2 2 2 2 + + + 2 + CS TVG
Ab40 + + + 2 2 2 2 2 + + + + CS TVG
AB54 2 2 2 2 2 2 2 + + + CS TVG
TVG55 2 2 + + + 2 2 + + + 2 2 ปู TVG
NTU2449 2 2 + + + + + 2 2 2 2 ปู NTU
KM5 2 2 2 2 + + + 2 2 2 MDRAB KM
AB21 + + + 2 2 + + + 2 2 2 2 MDRAB TVG
TVG68 + + + 2 2 2 2 2 + + + 2 MDRAB TVG
Ab002 + + + 2 + 2 2 2 + + + 2 XDR-AB TVG
Ab010 + + + 2 2 2 2 2 + + + + XDR-AB TVG
Ab011 + + + + 2 2 2 2 2 + + + 2 XDR-AB TVG
Ab015 + + + 2 2 2 2 2 + + + + XDR-AB TVG
Ab021 + + + 2 2 2 2 2 + + + + XDR-AB TVG
Km16 2 + + + 2 2 2 2 2 2 XDR-AB KM
KM18 + + + 2 2 2 2 2 + + + + XDR-AB KM
TSG2 2 2 2 2 + + + + + 2 2 XDR-AB TSG
TSG4 2 2 + + + + 2 2 + + + 2 2 XDR-AB TSG
TSG5 2 + + + 2 2 2 2 2 2 XDR-AB TSG
TSG6 2 + + + 2 2 2 2 2 2 XDR-AB TSG
TVG46 + + + 2 2 2 2 2 + + + 2 XDR-AB TVG
TVG52 2 + + + 2 2 + + + 2 2 XDR-AB TVG
TVG57 2 + + + 2 2 2 2 2 2 XDR-AB TVG
TVG58 2 + + + 2 2 2 2 2 2 XDR-AB TVG
TZ1 2 + + + 2 2 2 2 2 2 XDR-AB TZ
*'' 2'': ไม่มีผล; '' +'': โซนขุ่น; '' + + +'': โซนที่ชัดเจน
{CS: carbapenem A. baumannii ไว ปู: A. baumannii carbapenem ทน (รวม imipenem และ Meropenem ทน); MDRAB: หลายยาเสพติดทน
(ความต้านทานต่อ 3 หรือมากกว่าของชั้นเรียนต่อไปของ cephalosporin antipseudomonal, carbapenem antipseudomonal, ampicillin-ซัลแบคแท, fluoroquinolone,
aminoglycoside); XDR-AB: ยาเสพติดอย่างกว้างขวาง Acinetobacter baumannii ทน (ทนต่อยาปฏิชีวนะทั้งหมดยกเว้นโคลิสตินหรือ tigecycline)
{TVG: ไตทหารผ่านศึกโรงพยาบาลศูนย์การแพทย์; NTU: มหาวิทยาลัยแห่งชาติไต้หวันโรงพยาบาลศูนย์การแพทย์; KM: เกาสงแพทย์มหาวิทยาลัย Chung-Ho
โรงพยาบาล; TZ. ฮัวเหลียน Tzu Chi ศูนย์การแพทย์; TSG: ไตรบริการโรงพยาบาลศูนย์การแพทย์
ดอย: 10.1371/journal.pone.0046537.t001
Phage บำบัด XDRAB
PLOS ONE | www.plosone.org 3 ตุลาคม 2012 | ฉบับที่ 7 | ฉบับที่ 10 | e46537
ชีวิตเซลล์ A549 ที่ลอยอยู่ใน การแก้ปัญหา trypsin ได้รับการพิจารณา
โดยการสังเกตกล้องจุลทรรศน์ (Nikon, E2000, ญี่ปุ่น)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

a549 เซลล์การอยู่รอดทดสอบ
เพื่อให้มั่นใจในความปลอดภัยของฟาจบำบัด เราศึกษาความเป็นพิษของดิบแยกฟาจต่อ

a549 มนุษย์ปอดเยื่อบุเซลล์ a549 เซลล์ ( 105 เซลล์ well21 ) ชุบ 24 ด้วย ELISA
จานและบ่มเป็นเวลา 12 ชั่วโมง ( 37uc , 5% CO2 ) 100 มิลลิลิตร ต่อด้วยของ
ดัลเบโค่การนกอินทรีขนาดกลาง ( dmem ) ( Sigma , d5523
, USA ) เสริมด้วยเซรั่ม 5 % ของลูกวัว แล้ว 106 cfu .
= km18 ถูกเพิ่มไปยังเซลล์ ตามด้วย
2 ทันที โดยว่าที่แตกต่างกัน ( ฉัน = 0 , 1000 ,
1 , 0.1 , 0.01 ) เซลล์เพาะเลี้ยงเป็นเวลา 24 ชั่วโมงในตู้อบที่ 37uc CO2 5 %

เป็น a549 เซลล์จะถูกควบคุมด้วย
109 พีเอฟยูจโดยไม่ต้อง ก. = km18 . หลังจากบ่ม , บ่อได้ซักสองครั้งด้วย
-
PBS บ่มด้วยเอนไซม์ ( เอนไซม์สารละลาย EDTA 0.05% , 05 mM EDTA เตตราโซเดียม )

ให้รอดตายเซลล์ที่จะแยกจากดี เซลล์นับ
โต๊ะ 1 ยาปฏิชีวนะผลความไวของสายพันธุ์อ้างอิง และจุดทดสอบของแปดฟาจต่อสายพันธุ์อ้างอิงของ a
=
สายพันธุ์ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ พบว่าฟา

{ { แหล่งยาปฏิชีวนะไว
wkm18p wtz1 w2449n wab21 wkm5 w314 w134 w2449p
ab016 * 2 2 2 2 2 2 tvg
ซีเอสab019 2 2 2 2 2 2 CS tvg
ab14 2 * 2 2 2 2 2 2 2 ab15 CS tvg
2 2 CS tvg
ab16 2 2 2 2 2 2 2 ab19 CS tvg
2 2 2 2 2 2 2 ab23 CS tvg
2 2 2 2 2 2 2 ab26 CS tvg
2 2 CS tvg
ab29 2 2 2 2 2 2 2 2 ab35 CS tvg
2 2 CS tvg
ab39 2 2 2 2 2 2 2 2 2 ab40 CS tvg
2 2 CS tvg
ab54 2 2 2 2 2 2 2 tvg
ซีเอสtvg55 2 2 2 2 2 2 2 2 ntu2449 ปู tvg
2 2 2 2 2 2 km5 ปู NTU
2 2 2 2 2 2 2 2 mdrab km
ab21 2 2 2 mdrab tvg
tvg68 2 2 2 2 2 2 mdrab tvg
ab002 2 2 2 2 2 2 2 2 xdr-ab tvg
ab010 2 2 xdr-ab tvg
ab011 2 2 2 2 2 2 xdr-ab tvg
ab015 2 2 2 2 2 xdr-ab tvg
ab021 2 2 2 2 2 xdr-ab tvg
km16 2 2 2 2 2 2 2 xdr-ab km
km18 2 2 2 2 2 2 2 2 xdr-ab km
tsg2 2 2 2 xdr-ab TSG
tsg4 2 2 2 2 2 2 xdr-ab TSG
tsg5 2 2 2 2 2 2 2 xdr-ab TSG
tsg6 2 2 2 2 2 2 2 xdr-ab TSG
tvg46 2 2 2 2 2 2 2 2 xdr-ab tvg
tvg52 2 2 2 xdr-ab tvg
tvg57 2 2 2 2 2 2 2 xdr-ab tvg
tvg58 2 2 2 2 2 2 2 xdr-ab tvg
tz1 2 2 2 2 2 2 2 xdr-ab TZ
* ' ' 2 ' ' : ไม่มีผล ; ' ' ' ' : ขุ่นโซน ;' ' ' ' : ชัดเจนเขต .
{ CS : carbapenem อ่อนไหว . . = . = ; ปู : carbapenem ป้องกัน ( รวมทั้งยาต้านและอิมิพีเนม ) mdrab : Multi ดื้อยา
( ความต้านทาน 3 หรือมากกว่าต่อไปนี้ประเภทของ antipseudomonal เซฟา antipseudomonal carbapenem , แอมพิพระเกี้ยวฟลูออโรควิโนโลน , ,
xdr-ab , 2538 ) :อย่างกว้างขวาง Acinetobacter baumannii ดื้อยา ( ทนต่อยาปฏิชีวนะทั้งหมด ยกเว้นน้ำมันดีเซลหมุนเร็วหรือไทกีไซไคลน์ )
{ tvg : Taichung โรงพยาบาลทหารผ่านศึกศูนย์การแพทย์ทั่วไป ; NTU มหาวิทยาลัยแห่งชาติไต้หวัน โรงพยาบาล ศูนย์การแพทย์ ; km : มหาวิทยาลัยการแพทย์เกาสง , ชองโฮ
โรงพยาบาลเมโมเรียล ; TZ : หลินสุจิศูนย์การแพทย์ ; TSG : Tri บริการทั่วไป โรงพยาบาล ศูนย์การแพทย์ .
ดอย : 10 .32 / วารสาร โผน . 0046537 . t001
ฟาบำบัดสำหรับ xdrab
PLoS One | www.plosone.org 3 ตุลาคม 2555 | เล่ม 7 | ฉบับที่ 10 | e46537
รอดตาย a549 เซลล์แขวนลอยในสารละลายเอนไซม์ถูก
โดยการสังเกตกล้องจุลทรรศน์ ( Nikon , e2000 , ญี่ปุ่น )