Fluorescence Microscopy. V. cholera

Fluorescence Microscopy. V. cholerae strains V52/pBSW208lacP::GFP and V52ΔvasK/pBSW208lacP::GFP were grown overnight on LB agar containing 100 μg·mL−1 ampicillin and 1.2 mM isopropyl-β-D-1-thio-galactopyranoside (IPTG). MG1655/pTV-mCherry was grown overnight on LB agar containing 100 μg·mL−1 ampicillin. Predator and prey were mixed as described in the killing assay at an MOI of 0.1. Twenty-five microliters of the bacterial mixture was spotted onto prewarmed LB agar containing 100 μg·mL−1 ampicillin and 1.2mMIPTG and incubated at 37 °C for 4 h. Bacterial spots were washed in 1× PBS once and fixed in 4% paraformaldehyde for 1 h at room temperature. For
microscopic examination, 1.5 μL of liquid culture was spotted onto a glass slide. Samples were examined using a Zeiss Axioskop2 plus fluorescent microscope and imaged with an AxioCam MRc camera, using Zeiss AxioVision software (AxioVs40 V 4.6.1.0).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แสงกล้องจุลทรรศน์ โวล cholerae สายพันธุ์ v52/pbsw208lacp :: GFP และv52Δvask/pbsw208lacp :: GFP มีปลูกค้างคืนบนอาหารเลี้ยงเชื้อที่มี 100 ปอนด์·ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร-1 ampicillin และ 1.2 มม. isopropyl-β-D-1-thio-galactopyranoside (iptg) mg1655/ptv-mcherry เติบโตเป็นผู้ใหญ่ค้างคืนบนอาหารเลี้ยงเชื้อที่มี 100 ปอนด์·ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร-1 ampicillin นักล่าและเหยื่อถูกผสมที่อธิบายไว้ในวิธีการฆ่าที่ Moi 0.1microliters ยี่สิบห้าส่วนผสมของแบคทีเรียถูกพบบนอาหารเลี้ยงเชื้อปอนด์ prewarmed ที่มี 100 ไมโครกรัม· ml-1 a​​mpicillin และ 1.2mmiptg และบ่มที่อุณหภูมิ 37 ° C เวลา 4 ชั่วโมง จุดแบคทีเรียถูกล้างใน 1 ×พีบีเอสเพียงครั้งเดียวและการแก้ไขใน paraformaldehyde 4% เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง สำหรับการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์
, 1.5 ไมโครลิตรของวัฒนธรรมของเหลวที่ถูกพบบนสไลด์แก้วกลุ่มตัวอย่างได้รับการตรวจสอบการใช้ Zeiss axioskop2 บวกกล้องจุลทรรศน์เรืองแสงและการถ่ายภาพด้วยกล้อง axiocam mrc ใช้ Zeiss axiovision ซอฟแวร์ (axiovs40 V 4.6.1.0)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Fluorescence Microscopy การ V. cholerae V52/pBSW208lacP::GFP และ V52ΔvasK/pBSW208lacP::GFP สายพันธุ์ที่ปลูกข้ามคืนใน agar ปอนด์ 100 μg·mL−1 แอมพิซิลลินและ 1.2 มม. isopropyl-β-D-1-thio-galactopyranoside พรม (IPTG) MG1655 pTV-mCherry ถูกปลูกค้างคืนใน agar ปอนด์ประกอบด้วย 100 μg·mL−1 แอมพิซิลลิน นักล่าและเหยื่อที่ถูกผสมในทดสอบฆ่าที่มีอยของ 0.1 ยี่สิบห้า microliters ของแบคทีเรียผสมด่างบน prewarmed ปอนด์ agar ที่ประกอบด้วย 100 μg·mL−1 แอมพิซิลลินและ 1.2mMIPTG และ incubated ที่ 37 ° C จุดแบคทีเรีย 4 h. ถูกล้างใน 1 × PBS ครั้งเดียว และคงใน paraformaldehyde 4% สำหรับ h 1 ที่อุณหภูมิห้อง สำหรับ
ตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ μL 1.5 ของเหลวถูกพบบนสไลด์แก้ว ตัวอย่างตรวจสอบใช้ Zeiss Axioskop2 บวกกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรส และ imaged กับกล้อง AxioCam MRc ใช้ซอฟต์แวร์ Zeiss AxioVision (AxioVs40 V 4.6.1.0)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การตรวจวิเคราะห์สารเคมีคุณสมบัติฟลูเรซ - เซ็นซ. V . cholerae พันธุ์ V 52 / 208 A pbsw คิย์ LACP :: gfp และ V 52 δvask / pbsw 208 A คิย์ LACP :: gfp โตขึ้นพักค้างคืนบนปอนด์สาหร่ายทะเลที่มี 100 ไมโครกรัมลมล. - 1 ampicillin และ 1.2 มม.ไอโซโพรพิลแอล - เฉพาะ - D - 1 - ทิวสน - galactopyranoside ( iptg ) มก . 1655 / ptv - mcherry เติบโตขึ้นพักค้างคืนบนสาหร่ายทะเลปอนด์มี ampicillin 100 ไมโครกรัมแดกดัน 1 มล. เหยื่อและ Predator มาเช่นที่อธิบายไว้ในพยายามฆ่าที่เจริญเติบโตที่ 0.1ยี่สิบห้า microliters ด้วยการผสมเชื้อแบคทีเรียที่เป็นด่างลงบนสาหร่ายทะเลปอนด์ prewarmed ประกอบด้วย ampicillin 100 ไมโครกรัมลมล. - 1 และ 1.2 mmiptg และ incubated ที่ C 37 °สำหรับ 4 ชั่วโมง จุดฆ่าเชื้อแบคทีเรียได้ล้างใน PBS 1 ×หนึ่งครั้งและคงที่ใน paraformaldehyde 4% สำหรับ 1 ชั่วโมงที่ อุณหภูมิ ห้อง
ซึ่งจะช่วยให้การตรวจสอบขนาดเล็กซึ่ง 1.5 μl ของวัฒนธรรมผสมน้ำยาทำความสะอาดก็พบกับเลื่อนกระจกตัวอย่างก็ตรวจสอบโดยใช้ Zeiss axioskop 2 รวมถึงกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์และสร้างอิมเมจด้วยซอฟท์แวร์สร้างอิมเมจของบริษัท axiocam mrc กล้องที่ใช้ Zeiss axiovision ซอฟต์แวร์( axiovs 40 V 4.6.1.0 )