The amino acid analysis was perform

The amino acid analysis was performed by the method described by López et al. (2012) with some modifications. Free amino acids were analysed by reverse-phase HPLC using an Agilent 1100 Series (Palo Alto, USA) equipped with an ALS automatic liquid sampler, a fluorometric detector and a DAD detector. Each sample (5 ml, previously centrifuged at 4000 rpm for 10 min) was mixed with 100 lL of norvaline (internal standard to quantify all amino acids except proline) and 100 lL of sarcosine (internal standard to quantify proline). The mixture was filtered through a 0.45-lm OlimPeak pore filter (Teknokroma, Barcelona, Spain) and submitted to an automatic precolumn derivatisation with o-phthaldialdehyde (OPA Reagent, Agilent) for primary amino acids and with 9fluorenylmethylchloroformate (FMOC Reagent, Agilent) for the secondary amino acid. The injected amount from the derived sample was 10 ll, and a constant temperature of 40 C was maintained. All separations were performed on a Hypersil ODS (250 4.0 mm, I.D. 5 lm) column (Agilent). Solvents and gradient conditions for amino acids analysis are described below.
Two eluents were used as mobile phases: eluent A: 75 mM sodium acetate, 0.018% triethylamine (pH 6.9) + 0.3% tetrahydrofuran; eluent B: water, methanol, and acetonitrile (10:45:45, v/v/v). All reagents were first filtered with Millipore filters (0.45 lm). The gradient profile was as follows: 0–15 min, 0–47.5% B,
1.63 ml/min; 15–15.01 min, 47.5% B, 0.80 ml/min; 15.01–25 min,
47.5–60% B, 0.80 ml/min; 25–25.01 min, 60% B, 1.63 ml/min; 25.01–26.01 min, 60–100% B, 1.63 ml/min; 26.01–26.51 min, 100% B, 2.50 ml/min; 26.51–34.01 min, 100% B, 1.63 ml/min; 34.01–36.01 min, 100–0% B, 1.63 ml/min. Detection was performed with a fluorescence detector (k excitation = 340 nm, k emission = 450 nm for primary amino acids, and k excitation = 266 nm, k emission = 305 nm for secondary amino acids) and a DAD detector (k = 338 nm for primary amino acids and k = 262 nm for secondary amino acids). Identification of compounds was performed by comparison of their retention times with those of pure reference standards. The pure reference compounds and internal standards were from Sigma–Aldrich. Water was obtained from a Milli-Q purification System (Millipore, USA). Quantification of amino acids was performed with an internal standard method. The treatments were performed in triplicate, so the results for the free amino acids correspond to the average of 3 analyses (n = 3). The free amino acid content of the commercial product with amino acids (Cpaas) was also determined by this method.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การวิเคราะห์กรดอะมิโนถูกดำเนินการ โดยวิธีการที่อธิบายโดย López et al. (2012) ด้วยการปรับเปลี่ยนบาง กรดอะมิโนอิสระถูกวิเคราะห์ ด้วย HPLC กลับเฟสที่ใช้เป็นชุด Agilent 1100 (พาโลอัลโต ประเทศสหรัฐอเมริกาพร้อมกับการลิ้มลองของเหลว ALS อัตโนมัติ เครื่องตรวจจับ fluorometric และเครื่องตรวจจับพ่อ (5 มิลลิลิตร เหวี่ยงที่ 4000 rpm 10 นาทีก่อนหน้านี้) แต่ละอย่างถูกผสมกับ 100 lL norvaline (ภายในมาตรฐานการวัดปริมาณกรดอะมิโนทั้งหมดยกเว้นเป็น) และ 100 lL ของ sarcosine (ภายในมาตรฐานความเป็น) ส่วนผสมกรองผ่าน 0.45-lm OlimPeak กรองรูขุมขน (Teknokroma บาร์เซโลนา สเปน) และส่งไป derivatisation precolumn อัตโนมัติ กับ o-phthaldialdehyde (สาร OPA, Agilent) สำหรับกรดอะมิโนหลัก และ 9fluorenylmethylchloroformate (น้ำยา FMOC, Agilent) สำหรับกรดอะมิโนรอง ยอดฉีดจากตัวอย่างที่ได้รับมาเป็น 10 จะ และอุณหภูมิคง 40 C กรุง แยกทั้งหมดดำเนินการบนคอลัมน์ Hypersil ODS (250 4.0 มม. lm 5 ประชาชน) (Agilent) เงื่อนไขไล่ระดับสำหรับการวิเคราะห์กรดอะมิโนและสารละลายได้อธิบายไว้ด้านล่างนี้Eluents ที่สองถูกใช้เป็นเฟสเคลื่อนที่: eluent ตอบ: 75 mM โซเดียมอะซิเตท 0.018% triethylamine (ค่า pH 6.9) + 0.3% tetrahydrofuran eluent b:น้ำ เมทานอล และ acetonitrile (10: 45:45, v/v/v) สารทั้งหมดได้ก่อนกรองกับตัวกรองมิลลิพอร์ (0.45 lm) โพรไฟล์การไล่ระดับสีเป็น: 0 – 15 นาที 0 – 47.5% B1.63 ml/นาที 15 – 15.01 นาที 47.5% B, 0.80 ml/นาที 15.01 – 25 นาที47.5 – 60% B, 0.80 ml/นาที 25 – 25.01 นาที 60% B, 1.63 ml/นาที 25.01 – 26.01 นาที 60-100% B, 1.63 ml/นาที 26.01-26.51 นาที 100% B, 2.50 มิลลิลิตร/นาที 26.51 – 34.01 นาที 100% B, 1.63 ml/นาที 34.01-36.01 นาที 100 – 0% B มล. 1.63 และนาทีดำเนินการตรวจสอบ ด้วยเครื่องตรวจจับสารเรืองแสง (รุ่น k = 340 nm ปล่อย k = 450 nm สำหรับกรดอะมิโนหลัก และกระตุ้น k = 266 nm ปล่อย k = 305 nm สำหรับกรดอะมิโนรอง) และเครื่องตรวจจับพ่อ (k = 338 nm สำหรับกรดอะมิโนหลักและ k = 262 nm สำหรับกรดอะมิโนรอง) รหัสของสารที่ดำเนินการ โดยเปรียบเทียบของการเก็บข้อมูลกับมาตรฐานอ้างอิงที่บริสุทธิ์ สารอ้างอิงที่บริสุทธิ์และมาตรฐานภายในได้จากซิกม่า – Aldrich น้ำได้รับจากบริสุทธิ์หนึ่ง Q ระบบ (มิลลิพอร์ สหรัฐอเมริกา) ดำเนินการนับจำนวนกรดอะมิโน โดยใช้วิธีมาตรฐานภายใน การรักษาดำเนินลข้อ เพื่อให้ผลการที่กรดอะมิโนอิสระที่สอดคล้องกับค่าเฉลี่ยของวิเคราะห์ 3 (n = 3) กรดอะมิโนฟรีเนื้อหาของผลิตภัณฑ์ในเชิงพาณิชย์ด้วยกรดอะมิโน (Cpaas) ถูกกำหนด โดยวิธีนี้นั้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวิเคราะห์กรดอะมิโนได้ดำเนินการโดยวิธีการอธิบายโดย (2012) กรดอะมิโนฟรีวิเคราะห์ย้อนกลับ- เฟส แต่ละตัวอย่าง ส่วนผสมที่ถูกกรองผ่าน - LM OlimPeak - phthaldialdehyde (OPA Reagent, Agilent) จำนวนเงินที่ฉีดจากตัวอย่างที่ได้มาเป็น แยกทั้งหมดถูกดำเนินการบน ตัวทำละลายและเงื่อนไขการไล่ระดับสีสำหรับการวิเคราะห์กรดอะมิโนที่มีการอธิบายไว้ด้านล่าง
สองตัวชะถูกนำมาใช้เป็นขั้นตอนที่มือถือ ชะ น้ำยาทั้งหมดถูกกรองครั้งแรกกับฟิลเตอร์อร์ค รายละเอียดของการไล่ระดับสีได้ดังนี้- เวลา - 47.5% B,
1.63 15 - 15.01 15.01 - 25
47.5 - 60% B, 0.80 25 - 25.01 25.01 - 26.01 - 100% B, 1.63 26.01 - 26.51 26.51 - 34.01 34.01 - 36,01 - 0% B, 1.63 การตรวจสอบได้ดำเนินการกับเครื่องตรวจจับการเรืองแสง บัตรประจำตัวของสารประกอบที่ได้ดำเนินการโดยการเปรียบเทียบเวลาการเก็บรักษาของพวกเขากับบรรดามาตรฐานอ้างอิงบริสุทธิ์ สารประกอบอ้างอิงบริสุทธิ์และมาตรฐานภายในมาจากซิก- ดิช น้ำที่ได้รับจากพัน- ระบบฟอก ปริมาณของกรดอะมิโนที่ได้ดำเนินการด้วยวิธีมาตรฐานภายใน การรักษาที่ได้ดำเนินการในการเพิ่มขึ้นสามเท่าดังนั้นผลของกรดอะมิโนอิสระสอดคล้องกับค่าเฉลี่ยของ ปริมาณกรดอะมิโนอิสระของผลิตภัณฑ์เชิงพาณิชย์ที่มีกรดอะมิโน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวิเคราะห์กรดอะมิโนโดยใช้วิธีการที่อธิบายโดยโลเปซ et al . ( 2012 ) ที่มีการปรับเปลี่ยน กรดอะมิโนอิสระวิเคราะห์โดย HPLC เฟสกลับใช้ชุด Agilent 1100 ( Palo Alto , USA ) พร้อมกับ ALS ของเหลวอัตโนมัติตัวอย่างเครื่องตรวจจับ fluorometric พ่อและเครื่องตรวจจับ แต่ละตัวอย่าง 5 มิลลิลิตร ก่อนหน้านี้ที่ระดับที่ 4000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 10 นาที ) ผสมกับ 100 จะ norvaline ( มาตรฐานภายในปริมาณกรดอะมิโนทั้งหมด ยกเว้นปริมาณโพรลีน ) และ 100 จะของซาร์โคซีน ( มาตรฐานภายในปริมาณโพรลีน ) ส่วนผสมจะถูกกรองผ่าน 0.45-lm olimpeak รูขุมขนกรอง ( teknokroma , บาร์เซโลนา , สเปน ) และส่งโดยอัตโนมัติ precolumn derivatisation กับ o-phthaldialdehyde ( OPA รีเอเจนต์ เลนต์ ) สำหรับกรดอะมิโนหลัก และ 9fluorenylmethylchloroformate ( fmoc รีเอเจนต์ เลนต์ ) สำหรับกรดอะมิโนทุติยภูมิ ฉีดเงินจากที่ได้จำนวน 10 จะและอุณหภูมิคงที่ 40 C ถูกเก็บรักษาไว้ ทั้งหมดแยกได้บนขน ODS ( 250 4.0 มิลลิเมตร บัตรประชาชน 5 กล. ) คอลัมน์ ( ด้าน ) สารละลายและสภาวะการในการวิเคราะห์กรดอะมิโนจะถูกอธิบายไว้ด้านล่างสองตัวชะถูกใช้เป็นเฟสเคลื่อนที่เป็นสารละลายโซเดียมอะซีเตท 75 มม. 0.018 % ไตรเอตทิลามีน ( pH 6.9 ) + 0.3% เตตระไฮโดรฟแรน ; สารละลาย B : น้ำเมทานอลและไน ( 10:45:45 , V / V / V ) ทั้งหมดถูกกรองด้วยตัวกรองสารเคมี MILLIPORE ( 0.45 ไมโครเมตร ) การไล่ระดับสีโปรไฟล์ดังนี้ 0 – 0 – 15 นาที 47.5 % B1.63 มิลลิลิตรต่อนาที ; 15 – 15.01 มิน 47.5 % B , 80 มิลลิลิตรต่อนาที ; 15.01 – 25 นาที47.5 – 60 % B , 80 มิลลิลิตรต่อนาที ; 25 – 25.01 นาที 60 % B , 1.63 มิลลิลิตรต่อนาที ; 25.01 – 26.01 นาที 60 – 100 % B , 1.63 มิลลิลิตรต่อนาที ; 26.01 – 26.51 มิน 100 % B , 2.50 ml / min ; 26.51 – 34.01 มิน 100% B 1.63 มิลลิลิตรต่อนาที ; 34.01 – 36.01 มิน , 100 – 0 % B , 1.63 มิลลิลิตร / นาที สามารถดำเนินการกับการตรวจจับ ( K i = 340 nm , K = 450 nm สำหรับการปล่อยกรดอมิหลักและ K และ K = 266 นาโนเมตรปล่อย = 305 nm สำหรับระดับกรดอะมิโน ) และพ่อ เครื่องตรวจจับ ( K = 338 nm สำหรับกรดอะมิโนหลักและ k = 262 nm สำหรับระดับกรดอะมิโน ) การจำแนกสารโดยใช้การเปรียบเทียบความคงทนของครั้งนั้นมาตรฐานอ้างอิงที่บริสุทธิ์ สารประกอบบริสุทธิ์อ้างอิงและมาตรฐานภายในจากซิกม่า – อัลดริช น้ำที่ได้จากระบบการฟอก milli-q ( มิลลิ , USA ) ปริมาณของกรดอะมิโนที่ถูกดำเนินการด้วยวิธีมาตรฐานภายใน การรักษาผู้ป่วยทั้งสามใบ ดังนั้นผลลัพธ์สำหรับกรดอะมิโนฟรีสอดคล้องกับค่าเฉลี่ยของ 3 วิเคราะห์ ( n = 3 ) ฟรีของกรดอะมิโนของผลิตภัณฑ์เชิงพาณิชย์ที่มีกรดอะมิโน ( cpaas ) ถูกกำหนดโดยวิธีนี้