The Gibson Assembly Method describe

The Gibson Assembly Method described by Gibson et al. [1] is
a rapid assembly method that provides directional cloning of
multiple DNA fragments in a single reaction, without the need
for specific restriction sequences. It relies on use of an enzyme
mixture consisting of a mesophilic exonuclease, a ther
mophilic
ligase, and a high-fidelity polymerase.
For the assembly reaction, the gBlocks Gene Fragments and the
vector insertion site are designed with overlapping sequences
at the locations that are to be joined. At 50 ̊C, the exonuclease
digests dsDNA from the 5’ ends, but is rapidly degraded leaving
complementary, 3’ ssDNA ends. The resulting single-stranded,
complementary ends are then availible to hybridize to each
other, at which point the polymerase fills in missing nucleotides
and the ligase covalently joins the fragments together.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีประกอบกิบสันอธิบายโดยกิบสันและ al. [1] วิธีการประกอบอย่างรวดเร็วที่โคลนของทิศทาง ชิ้นส่วนดีเอ็นเอหลายในปฏิกิริยาที่เดียว โดยไม่ต้อง สำหรับข้อจำกัดเฉพาะลำดับ มันอาศัยการใช้เอนไซม์ ส่วนผสมประกอบด้วย exonuclease เป็น mesophilic เธอยังmophilic ligase และพอลิเมอเรสแบบคุณภาพสูง สำหรับปฏิกิริยาการประกอบ ชิ้นส่วนของยีน gBlocks และ ออกแบบเวกเตอร์ไซต์แทรก ด้วยลำดับการซ้อนทับกัน ในสถานที่จะถูกรวม ที่ 50 ̊C, exonuclease dsDNA digests จาก 5' จบ แต่จะรวดเร็วเสื่อมโทรมออก เสริม 3 ssDNA จบ การผลลัพธ์เดียวควั่น ปลายเสริมอยู่แล้ว availible คือแต่ละ อื่น ๆ ซึ่งในขณะพอลิเมอเรสกรอกข้อมูลในนิวคลีโอไทด์ขาดหายไป และ ligase covalently รวมชิ้นส่วนเข้าด้วยกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สมัชชากิบสันวิธีการอธิบายโดยกิบสันและอัล [1] เป็นวิธีการชุมนุมอย่างรวดเร็วที่มีโคลนทิศทางของดีเอ็นเอในหลายปฏิกิริยาเดียวโดยไม่จำเป็นต้องสำหรับลำดับข้อจำกัด ที่เฉพาะเจาะจง มันขึ้นอยู่กับการใช้งานของเอนไซม์ผสมประกอบด้วย exonuclease mesophilic เป็นบิดา mophilic ลิกาเซและโพลิเมอร์มีความเที่ยงตรงสูง. สำหรับปฏิกิริยาการชุมนุมที่ gBlocks ยีนเศษและเว็บไซต์แทรกเวกเตอร์ได้รับการออกแบบที่มีการทับซ้อนกันวนเวียนอยู่ในสถานที่ที่มีที่จะเข้าร่วม ที่ 50 C, exonuclease ย่อยสลาย dsDNA จาก 5 'ปลาย แต่เสื่อมโทรมอย่างรวดเร็วออกเสริม3' ssDNA ปลาย ส่งผลให้สายเดี่ยวสายปลายเสริมเป็น availible แล้วผสมพันธุ์กับแต่ละอื่นๆ จุดที่โพลิเมอร์เติมในนิวคลีโอที่ขาดหายไปและลิกาเซcovalently ร่วมชิ้นส่วนเข้าด้วยกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ประกอบวิธีการบรรยายโดย Gibson Gibson et al . [ 1 ]
วิธีการอย่างรวดเร็วมีทิศทางของการประกอบชิ้นส่วนดีเอ็นเอในปฏิกิริยาหลาย

เดียวโดยไม่ต้องยีนจำกัดเฉพาะ มันขึ้นอยู่กับการใช้เอนไซม์ผสมที่ประกอบด้วยเอกโซนิวคลีเอส


มี , มี mophilic ไลเกส และการมีความจงรักภักดีสูง
สำหรับประกอบปฏิกิริยาการ gblocks ยีนกระจายตัวและ
เว็บไซต์เวกเตอร์ได้รับการออกแบบด้วยการแทรกซ้อนลำดับ
ที่สถานที่ที่จะเข้าร่วม 50 ̊ซี เอกโซนิวคลีเอส
digests dsdna จาก 5 ' จบลง แต่อย่างรวดเร็วสลายตัวออกจาก
เสริม , 3 ' ssdna สิ้นสุด ผลเดี่ยวติดแหง็ก สิ้นสุดประกอบแล้ว
availible ที่จะผสมกับแต่ละ
อื่น ๆที่ใช้เติมในจุดที่ขาดคู่
และไลเกส covalently รวมชิ้นส่วนเข้าด้วยกัน