3. Results3.1. Sperm plasma membran

3. Results
3.1. Sperm plasma membrane integrity (PMI,
SYBR-14/propidium iodide assay)
A characteristic dot plot on SCC vs FSC which
classified as sperm are indicated is shown in Fig. 1a,
whereas region of analysis between SYBR-14 versus PI
is depicted in Fig. 1b. The percentage of spermatozoa
with intact plasma membrane (alive, SYBR-14+/PI)
was significantly (P < 0.001) higher in winter (54.6%)
than in the rainy season (43.5%) or summer (46.7%)
(Table 3). The average percentage of moribund
spermatozoa (SYBR-14+/PI+) differed significantly
(P < 0.01) only between winter and summer. Consequently,
the average of dead spermatozoa (SYBR-14/
PI+) was significantly (P < 0.01) lower in winter
(37.5%) than in the rainy season (47.6%) or summer
(43.6%). The average percentage of PMI (SYBR-14+/
PI) and dead spermatozoa (SYBR-14/PI+) was
affected by the year of semen collection/processing
(P < 0.01).
3.2. Sperm plasma membrane stability (PMS,
Annexin-V/propidium iodide assay)
A typical two-dimensional dot plot from a flow
cytometric profile of frozen-thawed sperm labeled with
Annexin V and PI is shown in Fig. 2. The average
percentage of viable spermatozoa (AN/PI) with an
intact plasma membrane was also higher in winter
(55.7%) than in the rainy season (40.1%) and summer
(53.0%), but differed significantly (P < 0.001) only
between winter and the rainy season (Table 3). The
percentage of spermatozoa with an impaired yet intact
plasma membrane (AN+/PI) was apparently higher in
winter than during the rainy season and summer (ns),
with the average percentage of dead spermatozoa
(AN+/PI+) being significantly (P < 0.001) higher in the
rainy season (52.8%) than in winter (36.8%) or summer
(40.5%). The average percentages of both viable
spermatozoa (AN/PI) and dead spermatozoa
1428 S. Koonjaenak et al. / Theriogenology 67 (2007) 1424–1435
Table 2
Variables defining the seasons which the comparisons in the present study are based on (mean  standard deviation (S.D.) of the years included in the
study, 1980–1989, and 2003, 2004 and 2005)
Season Temperature (mean maximum, 8C) Rainfall (mean maximum, mm) Humidity (mean maximum, %)
Rainy season 32.4  1.0 a 47.8  29.1 a 93.0  4.3 a
Winter 31.4  1.8 a 5.5  12.8 b 89.7  4.4 a
Summer 34.7  1.7 b 48.7  34.9 a 84.5  7.5 b
a–bDifferent superscripts indicate significant differences within variables (P < 0.05).
Fig. 1. (a) Dot-plot of FSC vs. SCC from flow cytometry where events
classified as spermatozoa are indicated. (b) Dot-plot of SYBR-14
(FL1) vs. PI (FL3) fluorescence. Region of analysis indicated in the
plot.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3. ผลลัพธ์3.1. อสุจิสมบูรณ์พลาสมาเมมเบรน (PMISYBR-14/propidium วิเคราะห์ไอโอไดด์)พล็อตจุดลักษณะใน SCC vs FSC ซึ่งลับเป็นสเปิร์มจะแสดงจะแสดงใน Fig. 1aในขณะที่ขอบเขตของการวิเคราะห์ระหว่าง SYBR-14 กับพี่เป็นภาพใน Fig. 1b เปอร์เซ็นต์ของ spermatozoaด้วยการเชื่อมพลาสมาเมมเบรน (ชีวิต SYBR 14 + /mts PI)ได้อย่างมีนัยสำคัญ (P < 0.001) สูงในฤดูหนาว (54.6%)กว่าในฤดูฝน (43.5%) หรือร้อน (46.7%)(ตาราง 3) เปอร์เซ็นต์ค่าเฉลี่ยของ moribundspermatozoa (SYBR 14 + /mts PI +) แตกต่างอย่างมีนัยสำคัญ(P < 0.01) ระหว่างฤดูหนาวและฤดูร้อนเท่านั้น ดังนั้นค่าเฉลี่ยของ spermatozoa ตาย (SYBR-14 /PI+) ได้อย่างมีนัยสำคัญ (P < 0.01) ต่ำในฤดูหนาว(37.5%) มากกว่าในฤดูร้อนหรือฤดูฝน (47.6%)(43.6%) เปอร์เซ็นต์เฉลี่ยของ PMI (SYBR 14 + /mtsPI) และ spermatozoa ตาย (SYBR-14 /PI+)รับผลกระทบจากปีของการเก็บน้ำเชื้อ/ประมวลผล(P < 0.01)3.2. สเปิร์มพลาสมาเมมเบรนเสถียรภาพ (PMSAnnexin-V/propidium วิเคราะห์ไอโอไดด์)พล็อตจุดสองมิติทั่วไปจากขั้นตอนการcytometric ประวัติของสเปิร์มแช่แข็ง-thawed ป้ายด้วยAnnexin V และ PI จะแสดงใน Fig. 2 ค่าเฉลี่ยเปอร์เซ็นต์ของ spermatozoa (เป็น /PI) ทำงานได้ด้วยการนอกจากนี้ยังมีระดับพลาสมาเมมเบรนสูงในฤดูหนาว(55.7%) มากกว่าในฤดูฝน (40.1%) และฤดูร้อน(53.0%), แต่แตกต่างอย่างมีนัยสำคัญ (P < 0.001) เท่านั้นระหว่างฤดูหนาวและฤดูฝน (ตาราง 3) ที่เปอร์เซ็นต์ของ spermatozoa กับผู้พิการทางการ ได้เหมือนเดิมพลาสมาเมมเบรน (AN + /mts PI) สูงขึ้นเห็นได้ชัดในหนาวกว่าในช่วงฤดูฝนและฤดูร้อน (ns),มีเปอร์เซ็นต์เฉลี่ยของ spermatozoa ตาย(การ + /mts PI +) ถูกอย่างมีนัยสำคัญ (P < 0.001) สูงในการฝน (52.8%) มากกว่าในฤดูร้อนหรือฤดูหนาว (36.8%)(40.5%) เปอร์เซ็นต์ค่าเฉลี่ยของทั้งสองทำงานได้spermatozoa (เป็น /PI) และ spermatozoa ตาย1428 s ได้ Koonjaenak et al. / Theriogenology 67 (2007) 1424-1435ตารางที่ 2ซีซั่นซึ่งเปรียบเทียบในการศึกษาปัจจุบันขึ้นอยู่กับ การกำหนดตัวแปร (หมายถึง ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (S.D.) ในปีศึกษา 1980-1989 และ 2003, 2004 และ 2005)ฤดูกาลอุณหภูมิ (เฉลี่ย สูงสุด 8C) ปริมาณน้ำฝนเฉลี่ย สูงสุด) ความชื้น (หมายถึงสูงสุด %)ฝน 32.4 1.0 47.8 29.1 93.0 4.3 เป็นฤดูหนาว 31.4 1.8 b 5.5 12.8 89.7 4.4 การบีร้อน 34.7 1.7 48.7 34.9 b 84.5 7.5a – bDifferent ตัวยกแสดงความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญภายในตัวแปร (P < 0.05)Fig. 1 (ก) ลงจุดของ FSC กับ SCC จากเซลล์กระแสที่เหตุการณ์จัดเป็น spermatozoa จะแสดง (ข) พล็อตจุดของ SYBR-14(FL1) เทียบกับ fluorescence PI (FL3) ระบุขอบเขตของการวิเคราะห์ในการแผนการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3. ผล
3.1 ความสมบูรณ์ของเยื่อหุ้มสเปิร์ม (PMI,
SYBR-14 / propidium ทดสอบไอโอไดด์)
พล็อตจุดในลักษณะ SCC เทียบกับ FSC
ซึ่งจัดเป็นสเปิร์มจะแสดงก็แสดงให้เห็นในรูป 1a,
ในขณะที่พื้นที่ของการวิเคราะห์ระหว่าง SYBR-14 เมื่อเทียบกับ PI
เป็นที่ปรากฎในรูป 1b อัตราร้อยละของสเปิร์มที่มีเยื่อหุ้มเหมือนเดิม (มีชีวิตอยู่ SYBR-14 + / PI?) อย่างมีนัยสำคัญ (P <0.001) ที่สูงขึ้นในช่วงฤดูหนาว (54.6%) กว่าในฤดูฝน (43.5%) หรือในช่วงฤดูร้อน (46.7%) (ตารางที่ 3) ร้อยละเฉลี่ยของย่ำแย่ตัวอสุจิ (SYBR-14 + / PI +) ความหมายแตกต่าง (P <0.01) ระหว่างฤดูหนาวและฤดูร้อน ดังนั้นค่าเฉลี่ยของตัวอสุจิที่ตายแล้ว (SYBR-14 /? PI +) อย่างมีนัยสำคัญ (P <0.01) ที่ลดลงในช่วงฤดูหนาว(37.5%) มากกว่าในฤดูฝน (47.6%) หรือในช่วงฤดูร้อน(43.6%) ร้อยละค่าเฉลี่ยของดัชนี PMI (SYBR-14 + / PI) และตัวอสุจิที่ตายแล้ว (SYBR-14 /? PI +) ได้รับผลกระทบจากการปีของการเก็บน้ำอสุจิ/ การประมวลผล(P <0.01). 3.2 ความมั่นคงเยื่อหุ้มสเปิร์ม (PMS, Annexin-V / propidium ทดสอบไอโอไดด์) พล็อตจุดสองมิติโดยทั่วไปจากการไหลรายละเอียด cytometric ของตัวอสุจิแช่แข็งละลายกำกับด้วย V Annexin และ PI แสดงในรูป 2. ค่าเฉลี่ยร้อยละของสเปิร์มที่ทำงานได้(แล้ว? / PI?) ที่มีเยื่อหุ้มเหมือนเดิมก็ยังสูงขึ้นในช่วงฤดูหนาว(55.7%) มากกว่าในฤดูฝน (40.1%) และในช่วงฤดูร้อน(53.0%) แต่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญ (P <0.001) เท่านั้นระหว่างฤดูหนาวและฤดูฝน(ตารางที่ 3) ร้อยละของสเปิร์มที่มียังมีความบกพร่องเหมือนเดิมเมมเบรนพลาสม่า (เป็น + / PI?) เห็นได้ชัดที่สูงขึ้นในฤดูหนาวกว่าในช่วงฤดูฝนและฤดูร้อน(NS) ที่มีเปอร์เซ็นต์เฉลี่ยของตัวอสุจิที่ตายแล้ว(เป็น + / PI +) เป็นอย่างมีนัยสำคัญ (P < 0.001) ที่สูงขึ้นในช่วงฤดูฝน(52.8%) มากกว่าในช่วงฤดูหนาว (36.8%) หรือในช่วงฤดูร้อน(40.5%) เปอร์เซ็นต์เฉลี่ยของทั้งสองที่ทำงานได้ตัวอสุจิ (แล้ว? / PI) และตัวอสุจิที่ตายแล้ว 1428 เอส Koonjaenak et al, / วิทยาการสืบพันธุ์ 67 (2007) 1424-1435 ตารางที่ 2 ตัวแปรกำหนดฤดูกาลที่เปรียบเทียบในการศึกษาครั้งนี้จะขึ้นอยู่กับ (หมายความว่าอย่างไรส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD) ของปีที่ผ่านมารวมอยู่ในการศึกษา1980-1989 และปี 2003 ปี 2004 และ 2005) อุณหภูมิในซีซั่น (หมายถึงสูงสุด 8C) ฝน (ค่าเฉลี่ยสูงสุดมิลลิเมตร) ความชื้น (ค่าเฉลี่ยสูงสุด%) ฤดูฝน 32.4? 1.0 47.8? 29.1 93.0? 4.3 ในช่วงฤดูหนาว 31.4? 1.8 5.5? 12.8 89.7 ข? 4.4 34.7 ฤดูร้อน? 1.7 ข 48.7? 34.9 84.5? 7.5 ขA-bDifferent ยกบ่งบอกถึงความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญภายในตัวแปร (p <0.05). รูป 1. (ก) ดอทพล็อตของ FSC กับ SCC จากกระแสภูมิคุ้มกันเหตุการณ์ที่จัดเป็นสเปิร์มจะมีการแสดง (ข) ดอทพล็อตของ SYBR-14 (FL1) กับ PI (FL3) เรืองแสง ภาคของการวิเคราะห์ที่ระบุไว้ในพล็อต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3 . ผลลัพธ์
3.1 . เยื่อหุ้มเซลล์อสุจิสมบูรณ์ ( PMI
sybr-14 / propidium ไอโอไดด์ assay )
พล็อตจุดลักษณะใน SCC vs FSC ซึ่ง
จัดเป็นอสุจิจะแสดงจะแสดงในรูปที่ 1A ,
ส่วนเขตของการวิเคราะห์ระหว่าง sybr-14 กับ pi
เป็นภาพในรูปที่ 1 บี เปอร์เซ็นต์อสุจิ
กับเยื่อหุ้มเซลล์ ( ยังคงมีชีวิตอยู่ sybr-14 / pi
 ) อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ( P < 0.001 ) สูงกว่าในฤดูหนาว ( 54.6 % )
มากกว่าในฤดูฝน ( ร้อยละ 43.5 ) หรือฤดูร้อน ( ร้อยละ 46.7 )
( ตารางที่ 3 ) ค่าเฉลี่ยร้อยละของอสุจิ ( sybr-14 ร่อแร่
/
pi ) แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ( p < 0.01 ) ระหว่างฤดูหนาวและฤดูร้อน โดยเฉลี่ยแล้ว 5
( sybr-14  /
pi ) อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ( P < 0.01 ) ลดลงในฤดูหนาว
( 37.5 % ) มากกว่าในฤดูฝน ( 50% ) หรือฤดูร้อน
( 43.6 % ) ค่าเฉลี่ยร้อยละของ PMI ( sybr-14 /
ปี่  ) และตาย ( sybr-14 สุจิ  / PI ) คือ
ผลกระทบจากปีของการรีดเก็บน้ำเชื้อ / ประมวลผล
( P < 0.01 )
2 . พลาสมาเมมเบรนเสถียรภาพอสุจิ ( PMS ,
annexin-v / propidium ไอโอไดด์ assay )
2 มิติทั่วไปจุดพล็อตจากการไหลลักษณะโปรไฟล์ของอสุจิแช่แข็งละลาย

V และป้ายชื่อของเซลล์ดแสดงไว้ในรูปที่ 2 ค่าเฉลี่ยร้อยละของอสุจิได้
(  / PI ด้วย
 )พลาสมาเมมเบรนเหมือนเดิมยังสูงกว่าในฤดูหนาว
( 55.7 เปอร์เซ็นต์ ) มากกว่าในฤดูฝน ( 40.1 % ) และฤดูร้อน
( 53.0 % ) แต่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ( p < 0.001 ) เท่านั้น
ระหว่างฤดูหนาวและฤดูฝน ( ตารางที่ 3 )
เปอร์เซ็นต์อสุจิที่มีความบกพร่องอีกเหมือนเดิม
เยื่อหุ้มเซลล์ ( / ปี่  ) ปรากฏว่าสูงกว่า
ฤดูหนาวกว่าในช่วงฤดูฝนและฤดูร้อน ( NS )
โดยเฉลี่ยร้อยละ 5
( ตาย / PI ) อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ( p < 0.001 ) สูงกว่าใน
ฤดูฝน ( 52.8% ) มากกว่าในฤดูหนาว ( 36.8 ) หรือฤดูร้อน
( เพิ่ม % ) ร้อยละเฉลี่ยของทั้ง 5 ได้
(  / ปี่  ) และตาย 5
1428 S . koonjaenak et al . วิทยาการสืบพันธุ์สัตว์ / 67 ( 2550 ) –ผู้ประจำโต๊ะ 2

ตัวแปรกำหนดฤดูกาลซึ่งเปรียบเทียบในการศึกษาจะขึ้นอยู่กับ ( หมายถึง  ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน ( S.D . ) ของปีรวมอยู่ใน
ศึกษา , 1980 – 1989 และปี 2003 , 2004 และ 2005 ) อุณหภูมิ
ฤดูกาล ( หมายถึงสูงสุด 8C ) ปริมาณน้ำฝน ( มิลลิเมตรสูงสุด ) ความชื้น ( ค่าเฉลี่ยสูงสุด , % )
ฤดูฝน 32.4  1.0 เป็น 47.8  29.1 เป็น 93.0  4.3
ฤดูหนาว 31.4  1.8 5.5  12.8 B สูงที่สุด  4.4
ฤดูร้อน 34 .7  1.7 B ค  34.9 เป็น 84.5  7.5 B
เป็น bdifferent superscripts –ระบุความแตกต่างในตัวแปร ( p < 0.05 ) .
รูปที่ 1 ( ก ) จุดพล็อตของ FSC และ SCC จากเครื่องนับเซลล์ที่เหตุการณ์
จัดเป็นอสุจิจะระบุ ( ข ) จุดพล็อตของ sybr-14
( fl1 ) และปี่ ( fl3 ) เรืองแสงด้วย ภูมิภาคของการวิเคราะห์ พบใน
พล็อต