Because of its fermentative ability

Because of its fermentative ability, E. coli did not require ubiquinone for growth on glucose, making the isolation of ubiquinone mutants difficult. To overcome this problem, non-fermentable substrates such as succinate or malate were substituted for glucose and under these conditions cells unable to make ubiquinone failed to grow (32). Using nitrosoguanidine as a mutagen and a system of delayed enrichment on solid agar, ∼100 mutants were isolated that could grow on glucose but not on malate. After purification each one of these was grown in 2-L batches, the cells were extracted and the extracts run on chromatograms to detect the presence or absence of ubiquinone. Of the 100 mutants tested, two were found to be unable to synthesise ubiquinone (40, 44). The accompanying genetic analysis proved to be important when the first mutant strain to be isolated was shown to possess four separate mutations, each of which affected growth on malate and two of which involved lesions in the ubiquinone pathway. Genetic techniques were used to establish mutants with a single mutation affecting ubiquinone synthesis and these were then subjected to a detailed analysis. Genetic crosses with Hfr strains followed by transductions were used to locate the mutated genes on the E. coli chromosome and large-scale cultivation of the mutants produced sufficient quantities of the intermediate before the blocked reac­tion to allow a detailed spectral analysis with NMR, mass spectrometry and infrared spectroscopy. At this stage Cox and Gibson transferred their major interest to oxidative phosphorylation and ATP synthase and Ian Young took a major responsibility for the isolation and characterization of mutants blocked in the remaining five reactions and for the identification of the intermediates formed by these mutants.The overall results of these studies are summarized in Frank Gibson’s special lecture to a joint meeting of the Biochemical Society and the Chemi­cal Society in London in 1972 (82), and in a paper by Young, Stroobant, McDonald and Gibson in 1973

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เนื่องจากสามารถ fermentative, E. coli ไม่ไม่ต้อง ubiquinone เติบโตในกลูโคส ทำให้แยกของสายพันธุ์ ubiquinone ยากกัน เพื่อเอาชนะปัญหานี้ พื้นผิวไม่ใช่ fermentable เช่น succinate หรือมาลาถูกแทนน้ำตาลกลูโคส และภาย ใต้เงื่อนไขเหล่านี้เซลล์สามารถสร้าง ubiquinone ไม่สามารถเจริญเติบโต (32) ใช้ nitrosoguanidine เป็น mutagen และระบบขอล่าช้าบนแข็ง agar, ∼100 สายพันธุ์แยกต่างหากที่สามารถเติบโต บนน้ำตาลกลูโคส แต่ไม่ ในมาลาเต หลังจากฟอกแต่ละรายการเหล่านี้ถูกปลูกในชุด 2 L เซลล์ถูกสกัด และสารสกัดที่รันบน chromatograms เพื่อตรวจสอบสถานะการขาดงานของ ubiquinone ของสายพันธุ์ 100 ที่ทดสอบ สองพบไม่ synthesise ubiquinone (40, 44) การวิเคราะห์ทางพันธุกรรมมาพิสูจน์จะสำคัญเมื่อเต่าพันธุ์แรกจะแยกต่างหากที่แสดงให้มีสี่แยกกลายพันธุ์ ซึ่งได้รับผลกระทบเติบโตมาลาและสองได้ที่เกี่ยวข้องในทางเดิน ubiquinone ใช้เทคนิคทางพันธุกรรมในการสร้างสายพันธุ์ มีการกลายพันธุ์ที่เดียวที่มีผลต่อการสังเคราะห์ ubiquinone และเหล่านี้ถูกต้องแล้วการวิเคราะห์โดยละเอียด ใช้ตัดพันธุกรรมกับสายพันธุ์ Hfr ตาม ด้วย transductions หากลายยีนบนโครโมโซม E. coli และเพาะปลูกขนาดใหญ่ของสายพันธุ์ผลิตปริมาณที่เพียงพอของกลางก่อนปฏิกิริยาให้การวิเคราะห์รายละเอียดสเปกตรัม NMR รเมท และกอินฟราเรดถูกบล็อก ในขั้นตอนนี้ ค็อกซ์และกิบสันโอนดอกเบี้ยหลักของปฏิกิริยาออกซิเด phosphorylation และ ATP synthase และเอียนหนุ่มสาวเอาความรับผิดชอบหลัก สำหรับการแยกและคุณสมบัติของสายพันธุ์ที่ถูกบล็อคในปฏิกิริยาห้าที่เหลือ และรหัสของตัวกลางที่เกิดขึ้นจากสายพันธุ์เหล่านี้ผลลัพธ์โดยรวมของการศึกษาเหล่านี้ได้สรุปไว้ใน Frank กิบสันบรรยายพิเศษร่วมประชุมสมาคมชีวเคมีและสังคมเคมีในลอนดอน ในปี 1972 (82), และเอกสาร โดยหนุ่ม Stroobant แมคโดนัลด์ และกิบสันใน 1973

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพราะความสามารถในการหมักของเชื้อ E. coli ไม่จำเป็นต้อง ubiquinone สำหรับการเจริญเติบโตในกลูโคสทำให้แยกกลายพันธุ์ ubiquinone ยาก ที่จะเอาชนะปัญหานี้พื้นผิวที่ไ​​ม่ย่อยเช่น succinate หรือ malate ถูกแทนกลูโคสและภายใต้เงื่อนไขที่เซลล์เหล่านี้สามารถที่จะทำให้ ubiquinone ล้มเหลวในการเจริญเติบโต (32) ใช้ nitrosoguanidine เป็นสารก่อกลายพันธุ์และระบบการทำงานของการตกแต่งล่าช้าในอาหารเลี้ยงเชื้อที่เป็นของแข็ง ~100 กลายพันธุ์ที่แยกได้ที่อาจเติบโตในกลูโคส แต่ไม่ได้อยู่ใน malate หลังจากที่บริสุทธิ์แต่ละคนเหล่านี้ได้รับการเติบโตใน batches 2-L เซลล์ถูกสกัดและสารสกัดจากทำงานบนโครมาโตที่จะตรวจสอบสถานะหรือไม่มี ubiquinone 100 สายพันธุ์ที่ผ่านการทดสอบทั้งสองพบว่าไม่สามารถที่จะสังเคราะห์ ubiquinone (40, 44) การวิเคราะห์ทางพันธุกรรมประกอบพิสูจน์แล้วว่าเป็นสิ่งที่สำคัญเมื่อสายพันธุ์แรกที่จะถูกแยกออกได้รับการแสดงให้เห็นว่ามีการกลายพันธุ์ที่สี่แยกแต่ละแห่งซึ่งได้รับผลกระทบการเจริญเติบโตใน malate และสองของที่เกี่ยวข้องกับการเกิดแผลในทางเดิน ubiquinone เทคนิคทางพันธุกรรมถูกนำมาใช้เพื่อสร้างการกลายพันธุ์ที่มีการกลายพันธุ์เดียวที่มีผลต่อการสังเคราะห์เอนไซม์และสิ่งเหล่านี้แล้วจึงวิเคราะห์รายละเอียด ข้ามทางพันธุกรรมที่มีสายพันธุ์ Hfr ตามด้วย transductions ถูกนำมาใช้ในการค้นหายีนกลายพันธุ์บนโครโมโซมเชื้อ E. coli และการเพาะปลูกขนาดใหญ่ของการกลายพันธุ์ที่ผลิตได้ปริมาณที่เพียงพอของกลางก่อนที่จะเกิดปฏิกิริยาที่ถูกปิดกั้นเพื่อให้การวิเคราะห์สเปกตรัมรายละเอียดด้วย NMR มวลสาร และอินฟราเรด ในขั้นตอนนี้ค็อกซ์และกิบสันที่รับโอนดอกเบี้ยที่สำคัญของพวกเขาเพื่อ phosphorylation oxidative และเทสเอทีพีและเอียนยังเอาความรับผิดชอบที่สำคัญสำหรับการแยกและลักษณะของการกลายพันธุ์ที่ถูกบล็อกในปฏิกิริยาห้าที่เหลืออยู่และเพื่อระบุตัวตนของตัวกลางที่เกิดขึ้นจาก mutants.The เหล่านี้โดยรวม ผลของการศึกษาเหล่านี้มีรายละเอียดในการบรรยายพิเศษของแฟรงก์กิบสันที่จะประชุมร่วมกันของสังคมทางชีวเคมีและสมาคมเคมีในกรุงลอนดอนในปี 1972 (82) และในกระดาษโดยหนุ่ม, Stroobant, โดนัลด์และกิบสันในปี 1973

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพราะความสามารถของวิศวกรรมเคมี , E . coli ไม่ต้องบิควิโนนสำหรับการเจริญเติบโตในการแยกของบิควิโนนพันธ์ยาก เพื่อเอาชนะปัญหานี้ ไม่ใช่ กรัม พื้นผิว เช่น ซัคซิเนต หรือมาเลทถูกแทนที่กลูโคสและภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้เซลล์ไม่สามารถที่จะทำให้บิควิโนนล้มเหลวที่จะเติบโต ( 32 )การใช้ไนโตรโซกัวนิดีนเป็นสารก่อกลายพันธุ์และก่อระบบของการล่าช้าในเส้นวุ้น ∼ 100 สายพันธุ์แยกได้ว่าสามารถเติบโตในกลูโคสแต่ใน Malate . หลังจากฟอกแต่ละหนึ่งของเหล่านี้ถูกปลูกใน 2-l batches , เซลล์และสารสกัดที่ใช้กลิ่นเพื่อตรวจสอบสถานะหรือขาดของบิควิโนน . ของ 100 สายพันธุ์ทดสอบสอง พบว่าไม่สามารถสังเคราะห์บิควิโนน ( 40 , 44 ) การวิเคราะห์ทางพันธุกรรมซึ่งพิสูจน์แล้วว่าเป็นสำคัญเมื่อสายพันธุ์กลายก่อนจะแยกเป็นสี่แยก มีการกลายพันธุ์ ซึ่งมีผลต่อการเจริญเติบโตใน Malate และสองซึ่งเกี่ยวข้องกับรอยโรคในบิควิโนนเส้นทางเทคนิคทางพันธุกรรมถูกใช้เพื่อสร้างสายพันธุ์เดียวกับการกลายพันธุ์ที่มีผลต่อการสังเคราะห์บิควิโนนและเหล่านี้จึงต้องมีการวิเคราะห์รายละเอียด ลูกผสมทางพันธุกรรมกับ hfr สายพันธุ์ตาม transductions ถูกใช้เพื่อค้นหายีนกลายพันธุ์ใน Eยีนโครโมโซมและการเพาะปลูกขนาดใหญ่ของสายพันธุ์ที่ผลิตในปริมาณที่เพียงพอของกลางก่อนที่จะถูกอนุญาตให้อง tion reac รายละเอียดการวิเคราะห์สเปกตรัม NMR spectrometry มวลและอินฟราเรดสเปกโทรสโกปีในขั้นตอนนี้ Cox และกิ๊บสันย้ายความสนใจหลักของกรุงเทพมหานคร และ เอทีพี และ เอียน หนุ่มออกซิเดชันและเอาความรับผิดชอบที่สำคัญสำหรับการแยกและการศึกษาคุณสมบัติของสายพันธุ์ที่ถูกบล็อกในอีกห้า ปฏิกิริยา และการระบุของตัวกลางที่เกิดจากสายพันธุ์เหล่านี้ผลของการศึกษาเหล่านี้จะสรุปใน แฟรงก์ กิ๊บสัน บรรยายพิเศษในการประชุมร่วมของสังคมทางชีวเคมีและเคมีองแคลสังคมในลอนดอนในปี 1972 ( 82 ) , และในกระดาษ โดยหนุ่ม stroobant , McDonald และ Gibson ในปี 1973