HIV-1-Env-Mediated Cell-to-Cell Fus

HIV-1-Env-Mediated Cell-to-Cell Fusion Assay. A β-galactosidase
cell fusion assay was performed as previously described.19,20
Briefly, HeLa ADA cells were mixed with HeLa-P5 cells, in 96-well
plates, in a 1:1 ratio (20 000 total cells), in the absence or presence of
5 μM of the different molecules assayed. These cocultures were kept at
fusion for 16 h at 37 °C. The fused cells were washed with Hanks’
balanced salt solution and lysed, and the enzymatic activity was
evaluated by chemiluminescence (β-galactosidase reporter gene assay;
Roche Diagnostics, Germany). Anti-CD4 neutralizing mAb (5 μg/mL
was preincubated in HeLa-P5 cells for 30 min at 37 °C before
coculture with Env+ HeLa cells) was used as a control for the blockage
of cell fusion.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เอชไอวี-1-Env-Mediated ฟิวชั่นเซลล์เซลล์วิเคราะห์ Β-galactosidaseทำการทดสอบอาหารเซลล์เป็น described.19,20 ก่อนหน้านี้สั้น ๆ เซลล์ HeLa ADA ได้ผสมกับเซลล์ HeLa P5 ใน 96-ดีแผ่น อัตราส่วน 1:1 (เซลล์รวม 20 000) การขาดงานหรือของΜM 5 ของโมเลกุลต่าง ๆ assayed Cocultures เหล่านี้ถูกเก็บไว้ที่อาหารสำหรับ h 16 ที่ 37 องศาเซลเซียส เซลล์หลอมถูกล้าง ด้วยแฮงส์สมดุลน้ำเกลือ และ lysed และกิจกรรมเอนไซม์ในระบบประเมิน โดย chemiluminescence (β-galactosidase โปรแกรมรายงานวิเคราะห์ยีนโรชวินิจฉัย เยอรมนี) ป้องกัน CD4 neutralizing มาบ (5 μg/mLมี preincubated ในเซลล์ HeLa P5 30 นาทีที่ 37 ° C ก่อนcoculture เซลล์ HeLa Env +) ถูกใช้เป็นตัวควบคุมการอุดตันของเซลล์หลอม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เอชไอวี-1-Env-ไกล่เกลี่ยเซลล์ต่อเซลล์ Assay ฟิวชั่น β-galactosidase
เซลล์ทดสอบฟิวชั่นที่ได้ดำเนินการไว้ก่อนหน้านี้ described.19,20
สั้น ๆ , เซลล์ HeLa ADA ถูกผสมกับเซลล์ HeLa-P5 ใน 96
หลุมจานในอัตราส่วน1: 1 (20 000 เซลล์ทั้งหมด) ใน หรือกรณีที่ไม่มีการปรากฏตัวของ
5 ไมครอนของโมเลกุลที่แตกต่างกัน assayed cocultures
เหล่านี้ถูกเก็บไว้ที่ฟิวชั่นเป็นเวลา16 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เซลล์ผสมถูกล้างด้วยแฮงค์สสารละลายเกลือที่สมดุลและ lysed และเอนไซม์ได้รับการประเมินโดยchemiluminescence (β-galactosidase นักข่าวทดสอบยีนวินิจฉัยโรชเยอรมนี) ป้องกัน CD4 neutralizing mAb (5 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรถูกpreincubated ในเซลล์ HeLa-P5 เป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสก่อนที่จะcoculture กับ Env + เซลล์ HeLa) ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมสำหรับการอุดตันเป็นของฟิวชั่นมือถือ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

hiv-1-env-mediated เซลล์ต่อเซลล์ . บีตา - galactosidase ในเซลล์
ถูกดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ 19,20
สั้นถึงระดับเซลล์ผสม hela-p5 เซลล์ ใน 96 ดี
แผ่น ในอัตรา 1 : 1 ( 20 , 000 เซลล์ทั้งหมด ) , ในการขาดหรือการปรากฏตัวของμ
5 M ของโมเลกุลของเอนไซม์ที่แตกต่างกัน . These cocultures were kept at
fusion for 16 h at 37 °C.ฟิวส์เซลล์ถูกล้างด้วยสารละลายเกลือที่สมดุลและแฮงค์ '
lysed และเอนไซม์ถูก
ประเมินนโยบายแรงงาน ( บีตา - galactosidase นักข่าวจีน ( ;
โรชวินิจฉัย , เยอรมัน ) anti-cd4 neutralizing แอนติบอดี ( 5 μ g / ml
คือ preincubated ใน hela-p5 เซลล์สำหรับ 30 นาทีที่ 37 ° C ก่อน
คู่ชนิดชอบร้อนกับ ENV ล่าเซลล์ ) เป็นเครื่องมือสำหรับการควบคุมการอุดตัน
เซลล์ฟิวชั่น