agents in the actual product. There

agents in the actual product. Therefore, the objectives of the pre- sentstudywere: (a)toevaluate theinvitroantimicrobialactivityof vanillin and geraniol against typical food pathogens; and (b) to apply the selected natural compounds in vivo in strawberry juice inoculated with E. coli O157:H7.
2. Material and methods
2.1. Determination of MIC in vitro of natural compounds
The minimum inhibitory concentration (MIC) is the minimum concentration that produces a 90% reduction in the growth of mi- crobialcolonies.Itisalsodefinedasthelowestconcentrationof the corresponding compound that is able to inhibit visible growth of the microorganism (Hammer, Carson, & Riley, 1996). MIC of the selected natural compounds was determined using the Broth Microdilution Method. Vanillin and geraniol antimicrobial activity was evaluated against two Gram positive bacteria: Listeria monocytogenes pro- vided by CERELA (Centro de Referencia de Lactobacilos, Tucuman, Argentina) and Staphylococcus aureus ATCC 25923; and two Gram negative bacteria: E. coli O157H:7 ATCC 43895 and Pseudomona aeruginosa ATCC 27853. The selected strains were maintained on tryptic soy broth (Britania, Argentina) at 4
C. Before used, they were cultured in Brain Heart Infusion (BHI) (Britania, Argentina) for 24 h at 37
C. Assays were performed by triplicate in sterile 96-well micro- plates using Muller Hilton broth (MH) (Britania, Argentina) with the addition of the selected natural compounds. Vanillin (Sigma Aldrich) was previously dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) and was used in a concentration range from 0.2 to 4.0 mg/mL. On the other hand, geraniol (Sigma Aldrich) was previously dissolved in tween 80 (Cicarelli, Argentina), and was used in concentrations from 0.2 to 2.4 mL mL 1 Wells were filled with 200 mL of MH plus the corresponding natural compound and inoculated with each bacterial strain at a final bacterial density of 5.105 CFU mL1 (which was achieved by adding 5 mL in each well of a 107 CFU mL1 suspension of the in- dicator strain in MH). The microplates were incubated at 37
C for 24 h. Different controls were used in this study: awell filled with MH with no biopreservative and inoculated with each bacterial strain, inordertoassessthegrowthofthepathogens;andwells filledwith MH plus DMSO and MH plus tween 80, respectively, inoculated with each bacterial strain, in order to prove that neither of the solvents had antimicrobial effects by themselves.
2.2. Juice preparation
Strawberries(Fragaria x ananassa) weregrownandharvestedin
Sierra de los Padres, Mar del Plata, Argentine. The strawberries were destemmed and the juices were prepared with a commercial juice extractor. Once juices were inoculated and the treatments were applied, the strawberry juices were stored in sterile poly- propylene flasks at 5
C for 14 days to assess the evolution of E. coli O157:H7.
2.3. Inoculation with E. coli O157:H7
2.3.1. Culture maintenance and inoculum preparation E. coli O157:H7, ATCC 43895 was used. A stock culture was maintained in tryptic soy broth (Britania, Buenos Aires, Argentina) at 4
C. Before use, E. coli O157:H7 was cultured in brain heart infusion (BHI) broth (Britania) for 24 h at 37
C. A 0.1 mL aliquot of the culture was transferred to 9.9 mL of BHI broth at two consec- utive 24 h intervals followed by incubation at 37
C before each experiment. A bacterial suspension was prepared by adding 10 mL oftheE.colicultureto90mLofsterilepeptonatedwater(0.1%w/v).
2.3.2. Inoculation of the samples Samples were inoculated with E. coli O157:H7 before the application of the treatments, simulating an inadequate manipu- lationof thestrawberriesatpostharvest.Tocarrythisout,100 mLof the bacterial suspension previously prepared were added to 10 mL of fresh strawberry juice to reach a final pathogen concentration of ~5 log colony-forming units (CFU) mL1. Control samples were untreated strawberry juice inoculated with E. coli. After being treated, the strawberry juices were stored in refrigerated chambers at 5
C for 14 days.
2.4. Application of biopreservatives to inoculated strawberry juice
Once the MIC in vitro was determined, in order to evaluate the antimicrobial effects of vanillin and geraniol in vivo, the natural antimicrobial agents were applied directly to the strawberry juice attwodifferentconcentrationsforeachnaturalcompound:1and2 MIC (Van1MIC and Van2MIC for vanillin, and Ger1MIC and Ger2- MIC for geraniol, respectively). A juice with no treatment (untreated) was used as control sample.
2.5. Microbiological analysis
ViableE.colicountsweremonitoredasfollows:0.1mLaliquotof each sample were spread on the surface of eosin methylene blue (EMB)agarplatesandthecolonieswerecountedafterincubationat 37
C for 24e48 h. EMB is a selective medium that allows the characterization of typical E. coli colonies; those that were dark centered, flat and with a metallic sheen were taken into account. Randomly, selected E. coli colonies were confirmed using an E. coli chromogenic test kit (Chromobrit, Britania). All culture media used were purchased from Britania. Microbial counts were expressed as log CFU mL1.
2.6. Statistical analysis
A completely randomized design was used. Three independent runswereperformed.DataobtainedwasanalyzedusingRv.2.12.2. (R Development Core Team, 2011). Results reported in this article are mean values accompanied by their standard errors (Kuehl, 2001). Analysis of variance ANOVA was performed and TukeyeK- ramer comparison test was used to estimate significant differences between treatments (p < 0.05).
Fig. 1. Chemical structures of (a) vanillin and (b) geraniol.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตัวแทนในผลิตภัณฑ์จริง ดังนั้น วัตถุประสงค์ของ sentstudywere ก่อน: (ก) toevaluate theinvitroantimicrobialactivityof วานิลลินและ geraniol กับอาหารทั่วไปโรค และ (b) การใช้สารจากธรรมชาติเลือกในสัตว์ทดลองในน้ำสตรอเบอร์รี่ inoculated กับ O157:H7 E. coli2. วัสดุและวิธีการ2.1 การกำหนดของไมค์ในหลอดสารจากธรรมชาติความเข้มข้นลิปกลอสไขต่ำสุด (MIC) คือ ความเข้มข้นต่ำสุดที่ก่อให้เกิดการเติบโตของ mi crobialcolonies ลด 90% Itisalsodefinedasthelowestconcentrationof บริเวณที่สอดคล้องกันที่สามารถยับยั้งการเจริญเติบโตที่เห็นของจุลินทรีย์ (ค้อน คาร์สัน และ Riley, 1996) ไมค์ของสารประกอบธรรมชาติที่เลือกถูกกำหนดโดยใช้วิธี Microdilution ซุป วานิลลินและ geraniol กิจกรรมจุลินทรีย์ถูกประเมินกับแบคทีเรียบวกสองกรัม: ออลิ monocytogenes pro-vided โดย CERELA (เซ็นโทรเด Referencia เด Lactobacilos, Tucuman อาร์เจนตินา) และหมอเทศข้างลาย Staphylococcus ATCC 25923 และแบคทีเรียลบสองกรัม: E. coli ATCC O157H:7 43895 และ Pseudomona aeruginosa ATCC 27853 สายพันธุ์ที่เลือกมีอยู่ในซุปถั่วเหลือง tryptic (Britania อาร์เจนตินา) ที่ค. 4 ก่อนใช้ พวกอ่างในสมองหัวใจคอนกรีต (BHI) (Britania อาร์เจนตินา) สำหรับ 24 h ที่ 37 C. Assays ถูกดำเนินการ โดย triplicate ในกอซ 96 ดีไมโครแผ่นซุปฮิลตันมูลเลอร์ (MH) (Britania อาร์เจนตินา) ด้วยการเพิ่มสารประกอบธรรมชาติที่เลือก วานิลลิน (ซิก Aldrich) ก่อนหน้านี้ไม่ละลายใน dimethyl sulfoxide (DMSO) และถูกใช้ในช่วงความเข้มข้นตั้งแต่ 0.2 ถึง 4.0 mg/mL บนมืออื่น ๆ geraniol (ซิก Aldrich) ก่อนหน้านี้ไม่ละลายใน tween 80 (Cicarelli อาร์เจนตินา), และใช้ในความเข้มข้นจาก 0.2 ไป 2.4 มิลลิลิตร mL 1 บ่อมี filled พร้อม 200 mL ของ MH สารประกอบตามธรรมชาติที่สอดคล้องกัน และ inoculated ด้วยละต้องใช้แบคทีเรียที่มี final แบคทีเรียหนาแน่น 5.105 CFU mL 1 (ซึ่งสำเร็จ ด้วยการเพิ่ม 5 mL ในแต่ละดี 107 CFU mL 1 ระงับสายพันธุ์ใน dicator ใน MH) Microplates จะมี incubated ที่ 37 C สำหรับ 24 h. ควบคุมต่าง ๆ ที่ใช้ในการศึกษานี้: filled awell กับ MH กับ biopreservative ไม่ และ inoculated ด้วยละต้องใช้แบคทีเรีย inordertoassessthegrowthofthepathogens; andwells filledwith MH บวก DMSO และ MH บวก tween 80 ตามลำดับ inoculated ด้วยละต้องใช้แบคทีเรีย การพิสูจน์นั้นไม่หรือสารทำละลายที่มีผลยับยั้งจุลินทรีย์ โดยตัวเอง2.2 เตรียมน้ำสตรอเบอร์รี่ (Fragaria x ananassa) weregrownandharvestedinเซียร่าเดอลอส Padres ดอส อาร์เจนตินา สตรอเบอร์รี่ถูก destemmed และน้ำผลไม้ถูกเตรียมระบายน้ำเชิงพาณิชย์ เมื่อน้ำได้ inoculated และใช้การรักษา น้ำสตรอเบอร์รี่ถูกเก็บไว้ใน flasks ใส่โพลีโพรพิลีนที่ 5 C สำหรับ 14 วันเพื่อประเมินวิวัฒนาการของ O157:H7 E. coli2.3. inoculation กับ E. coli O157:H72.3.1. วัฒนธรรมเตรียม inoculum และบำรุงรักษา O157:H7 E. coli, ATCC 43895 ถูกใช้ วัฒนธรรมที่หุ้นถูกเก็บรักษาไว้ในซุปถั่วเหลือง tryptic (Britania บัวโนสไอเรส อาร์เจนตินา) ที่ค. 4 ก่อนใช้ O157:H7 E. coli ถูกอ่างในสมองหัวใจคอนกรีต (BHI) ซุป (Britania) ใน 24 ชมที่ค. 37 ส่วนลงตัว 0.1 mL ของวัฒนธรรมถูกถ่ายโอนไป 9.9 mL ของ BHI ซุปสอง consec - utive 24 ชมในช่วงเวลาที่ตามหลังบ่มที่ 37 C ก่อนแต่ละการทดลอง ระงับเชื้อแบคทีเรียที่เตรียม โดยการเพิ่ม oftheE.colicultureto90mLofsterilepeptonatedwater(0.1%w/v) 10 mL2.3.2. inoculation อย่างตัวอย่างได้ inoculated กับ O157:H7 E. coli ก่อนใช้รักษา จำลองการ thestrawberriesatpostharvest lationof manipu ไม่เพียงพอ Tocarrythisout, 100 mLof ระงับเชื้อแบคทีเรียที่เตรียมไว้ก่อนหน้านี้ ถูกเพิ่มเข้าไป 10 mL ของน้ำผลไม้สตรอเบอร์รี่สดถึงความเข้มข้นการศึกษา final ~ 5 ล็อกเป็นโคโลนี (CFU) หน่วย mL 1 ตัวอย่างควบคุมไม่ถูกรักษาน้ำสต inoculated กับ E. coli ได้ หลังจากได้รับการรักษา น้ำสตรอเบอร์รี่ถูกเก็บไว้ในห้องควบคุมอุณหภูมิที่ 5 C สำหรับ 14 วัน2.4 การใช้ biopreservatives การ inoculated น้ำสตรอเบอร์รี่เมื่อกำหนดไมค์ใน การประเมินผลยับยั้งจุลินทรีย์ของวานิลลินและในสัตว์ทดลอง geraniol ตัวแทนจุลินทรีย์ธรรมชาติถูกประยุกต์ใช้โดยตรง attwodifferentconcentrationsforeachnaturalcompound:1and2 น้ำสตรอเบอร์รี่ MIC (Van1MIC และ Van2MIC วานิลลิ น และ Ger1MIC และ Ger2 - ไมค์สำหรับ geraniol ตามลำดับ) น้ำ (ไม่ถูกรักษา) การรักษาไม่ถูกใช้เป็นตัวอย่างควบคุม2.5 การทางจุลชีววิทยาวิเคราะห์ViableE.colicountsweremonitoredasfollows:0.1mLaliquotof แต่ละตัวอย่างได้กระจายบนพื้นผิวของ agarplatesandthecolonieswerecountedafterincubationat เมทิลีนไดบลู (EMB) eosin 37 C สำหรับ 24e48 h. EMB เป็นมาตรการที่ช่วยให้คุณสมบัติของอาณานิคมทั่วไป E. coli ผู้ที่มืด แปลก flat และ มีชีนโลหะถูกนำมาพิจารณา สุ่ม อาณานิคมเลือก E. coli ถูก confirmed โดยใช้ชุดการทดสอบ chromogenic E. coli (Chromobrit, Britania) สื่อวัฒนธรรมทั้งหมดที่ใช้อยู่ซื้อจาก Britania การตรวจนับจุลินทรีย์ถูกแสดงเป็นล็อก CFU mL 12.6. สถิติวิเคราะห์ใช้แบบ randomized สมบูรณ์ Runswereperformed อิสระ 3 DataobtainedwasanalyzedusingRv.2.12.2. (R พัฒนาหลักทีม 2011) ผลลัพธ์ที่รายงานในบทความนี้จะหมายถึงค่าที่มาพร้อมกับข้อผิดพลาดของมาตรฐาน (Kuehl, 2001) ทำการวิเคราะห์ผลต่างของการวิเคราะห์ความแปรปรวน และทดสอบเปรียบเทียบ TukeyeK ramer ใช้ประมาณ significant ความแตกต่างระหว่างการรักษา (p < 0.05)Fig. 1 โครงสร้างทางเคมีของ (ก) วานิลลินและ geraniol (b)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตัวแทนในผลิตภัณฑ์ที่เกิดขึ้นจริง ดังนั้นวัตถุประสงค์ของก่อน sentstudywere (ก) toevaluate theinvitroantimicrobialactivityof vanillin และ geraniol กับเชื้อโรคอาหารทั่วไป; และ (ข) ที่เลือกที่จะใช้สารธรรมชาติในร่างกายในน้ำผลไม้สตรอเบอร์รี่เชื้อด้วยเชื้อ E. coli O157:. H7
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 ความมุ่งมั่นของ MIC
ในหลอดทดลองของสารธรรมชาติความเข้มข้นต่ำสุดที่ยับยั้ง(MIC) เป็นความเข้มข้นต่ำสุดที่ก่อให้เกิดการลดลง 90% ในการเจริญเติบโตของสาย crobialcolonies.Itisalsode mi- nedasthelowestconcentrationof สารประกอบที่สอดคล้องกันที่สามารถยับยั้งการเจริญเติบโตที่มองเห็นได้ของจุลินทรีย์ (ค้อน คาร์สันและไรลีย์, 1996) MIC ของสารธรรมชาติที่เลือกถูกกำหนดโดยใช้น้ำซุป Microdilution วิธี วานิลและฤทธิ์ต้านจุลชีพ geraniol ถูกประเมินกับสองแบคทีเรียแกรมบวกเชื้อ Listeria monocytogenes โปร แต่แบ่งโดย CERELA (Centro de Referencia เด Lactobacilos, ทูคูมาน, อาร์เจนตินา) และ Staphylococcus aureus ATCC 25923; และสองแบคทีเรียแกรมลบ: อีโคไล O157H: 7 ATCC 43895 และ Pseudomona aeruginosa ATCC 27853. สายพันธุ์ที่เลือกไว้ในน้ำซุปถั่วเหลือง tryptic (Britania, อาร์เจนตินา) วันที่ 4 องศาเซลเซียส ก่อนที่จะใช้พวกเขาถูกเลี้ยงในสมองหัวใจ Infusion (BHI) (Britania, อาร์เจนตินา) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส การตรวจดำเนินการโดยเพิ่มขึ้นสามเท่าในแผ่น 96 หลุมโดยใช้ไมโครหมันมุลเลอร์ฮิลตันน้ำซุป (MH) (Britania, อาร์เจนตินา) ด้วยนอกเหนือจากสารธรรมชาติที่เลือก วานิลลิน (ซิกม่าดิช) ก็เลือนหายไปก่อนหน้านี้ใน dimethyl sulfoxide (DMSO) และถูกนำมาใช้ในช่วงความเข้มข้น 0.2-4.0 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ในทางตรงกันข้าม, geraniol (ซิกม่าดิช) ก็เลือนหายไปก่อนหน้านี้ในทวี 80 (Cicarelli อาร์เจนตินา) และถูกนำมาใช้ในความเข้มข้น 0.2-2.4 มิลลิลิตรมิลลิลิตร 1 เวลส์ถูกไฟ lled กับ 200 มิลลิลิตร MH plus สารประกอบธรรมชาติที่สอดคล้องกันและเชื้อ กับสายพันธุ์ของเชื้อแบคทีเรียแต่ละสายมีความหนาแน่นของแบคทีเรีย NAL 5.105 CFU มิลลิลิตรหรือไม่ 1 (ซึ่งก็ประสบความสำเร็จโดยการเพิ่ม 5 มิลลิลิตรในดี 107 CFU มิลลิลิตรแต่ละ 1 การหยุดชะงักของสายพันธุ์ในตัวบ่งชี้ in-MH) microplates ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง การควบคุมที่แตกต่างกันถูกนำมาใช้ในการศึกษานี้: ไฟ awell lled กับ MH กับ biopreservative และไม่มีเชื้อด้วยสายพันธุ์แบคทีเรียแต่ละ inordertoassessthegrowthofthepathogens; ไฟ andwells lledwith MH plus DMSO และ MH plus ทวี 80 ตามลำดับเชื้อด้วยสายพันธุ์แบคทีเรียแต่ละเพื่อที่จะพิสูจน์ให้เห็นว่าทั้ง ตัวทำละลายที่มีผลกระทบต่อยาต้านจุลชีพด้วยตัวเอง.
2.2 เตรียมน้ำผลไม้สตรอเบอร์รี่ (Fragaria ananassa x) weregrownandharvestedin เซียร์ราเดอลอเดรส Mar del Plata, อาร์เจนตินา สตรอเบอร์รี่ถูก destemmed และน้ำผลไม้ที่ถูกจัดทำขึ้นด้วยการระบายน้ำในเชิงพาณิชย์ เมื่อน้ำถูกเชื้อและการรักษาที่ถูกนำไปใช้ในน้ำผลไม้สตรอเบอร์รี่ที่ถูกเก็บไว้ในโพลีโพรพิลีนหมันชั้นถามที่ 5 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 14 วันในการประเมินวิวัฒนาการของเชื้อ E. coli O157 หรือไม่:. H7 2.3 การฉีดวัคซีนที่มีเชื้อ E. coli O157: H7 2.3.1 การบำรุงรักษาวัฒนธรรมและการเตรียมหัวเชื้อเชื้อ E. coli O157: H7, ATCC 43895 ถูกนำมาใช้ วัฒนธรรมหุ้นถูกเก็บรักษาไว้ในน้ำซุปถั่วเหลือง tryptic (Britania บัวโนสไอเรสอาร์เจนตินา) วันที่ 4 องศาเซลเซียส ก่อนที่จะใช้เชื้อ E. coli O157: H7 เป็นที่เลี้ยงในการแช่หัวใจสมอง (BHI) น้ำซุป (Britania) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส aliquot 0.1 มิลลิลิตรของวัฒนธรรมที่ถูกย้ายไป 9.9 มิลลิลิตรของน้ำซุป BHI สอง consec- utive ช่วง 24 ชั่วโมงตามด้วยการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสก่อนการทดลองแต่ละ ระงับแบคทีเรียถูกจัดทำขึ้นโดยการเพิ่ม 10 มิลลิลิตร oftheE.colicultureto90mLofsterilepeptonatedwater (0.1% w / v). 2.3.2 การฉีดวัคซีนของตัวอย่างตัวอย่างเชื้อด้วยเชื้อ E. coli O157: H7 ก่อนที่จะประยุกต์ของการรักษาที่จำลอง manipu- ไม่เพียงพอ lationof thestrawberriesatpostharvest.Tocarrythisout 100 mLof ระงับเชื้อแบคทีเรียที่เตรียมไว้ก่อนหน้านี้มีการเพิ่มถึง 10 มิลลิลิตรของน้ำสตรอเบอร์รี่สดที่จะไปถึง สายความเข้มข้นของเชื้อเอ็น ~ 5 ล็อกหน่วยอาณานิคมขึ้นรูป (CFU) มิลลิลิตร 1 ตัวอย่างการควบคุมถูกน้ำสตรอเบอร์รี่ได้รับการรักษาเชื้อด้วยเชื้อ E. coli หลังจากได้รับการรักษาน้ำผลไม้สตรอเบอร์รี่ที่ถูกเก็บไว้ในห้องเย็นที่อุณหภูมิ 5 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 14 วัน. 2.4 การประยุกต์ใช้ biopreservatives น้ำผลไม้สตรอเบอร์รี่เชื้อเมื่อMIC ในหลอดทดลองได้รับการพิจารณาเพื่อประเมินผลกระทบต่อยาต้านจุลชีพของวานิลและ geraniol ในร่างกายของยาต้านจุลชีพธรรมชาติถูกนำไปใช้โดยตรงกับน้ำสตรอเบอร์รี่ attwodifferentconcentrationsforeachnaturalcompound นี้: 1and2 MIC (Van1MIC และ Van2MIC สำหรับวานิล และ Ger1MIC และ Ger2- MIC สำหรับ geraniol ตามลำดับ) น้ำผลไม้ที่ไม่มีการรักษา (ได้รับการรักษา) ถูกใช้เป็นตัวอย่างการควบคุม. 2.5 การวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาViableE.colicountsweremonitoredasfollows: 0.1mLaliquotof แต่ละตัวอย่างกระจายอยู่บนพื้นผิวของ Eosin เมทิลีนสีฟ้า (EMB) agarplatesandthecolonieswerecountedafterincubationat 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24e48 ชั่วโมง? EMB เป็นสื่อเลือกที่ช่วยให้ตัวละครของอีทั่วไปอาณานิคม coli; ผู้ที่ถูกศูนย์กลางมืด fl ที่และมีความเงาโลหะที่ถูกนำเข้าบัญชี สุ่มเลือกอีโคไลเป็นอาณานิคมนักโทษสาย rmed ใช้ชุดทดสอบเชื้อ E. coli chromogenic (Chromobrit, Britania) สื่อวัฒนธรรมทั้งหมดที่ใช้ซื้อมาจาก Britania นับจุลินทรีย์ถูกแสดงเป็น log CFU มิลลิลิตร 1. 2.6 การวิเคราะห์ทางสถิติการออกแบบแบบสุ่มสมบูรณ์ถูกนำมาใช้ สาม runswereperformed.DataobtainedwasanalyzedusingRv.2.12.2 อิสระ (R ทีมพัฒนาหลัก 2011) ผลการรายงานในบทความนี้เป็นค่าเฉลี่ยมาพร้อมกับข้อผิดพลาดมาตรฐาน (Kuehl, 2001) การวิเคราะห์ความแปรปรวนได้ดำเนินการวิเคราะห์และการทดสอบการเปรียบเทียบ TukeyeK- Ramer ถูกใช้ในการประเมินนัยสำคัญสายความแตกต่างระหว่างการรักษาลาดเท (p <0.05). รูป 1. โครงสร้างทางเคมีของ (ก) วานิลและ (ข) geraniol

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตัวแทนในผลิตภัณฑ์จริง ดังนั้นวัตถุประสงค์ของ pre - sentstudywere ( ) และการทดสอบ theinvitroantimicrobialactivityof วานิลลินเจอรานิออลต่อต้านเชื้อโรค อาหารทั่วไป และ ( ข ) การเลือกธรรมชาติ สารในสิ่งมีชีวิตในน้ำสตรอเบอรี่ที่ปลูกด้วยเชื้อ E . coli เป็นสมาชิก : H7 .
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 . การหาปริมาณของสารประกอบธรรมชาติ
ไมค์ในหลอดทดลองความเข้มข้นต่ำสุดที่ยับยั้ง ( MIC ) คือความเข้มข้นต่ำสุดที่ก่อให้เกิดการลดลง 90% ในการเจริญเติบโตของมิ - crobialcolonies . itisalsode จึง nedasthelowestconcentrationof สารประกอบที่สอดคล้องกันที่สามารถยับยั้งการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ ( มองค้อน คาร์สัน &ไรลีย์ , 1996 ) ไมค์ของเลือกธรรมชาติ สาร ตัดสินใจใช้น้ำซุป microdilution วิธีและประเมินฤทธิ์ต้านจุลชีพ วานิลเจอรานิออลต่อสองกรัมบวกแบคทีเรีย : วงแหวนแวนอัลเลน Pro - vided โดย cerela ( Centro de referencia de lactobacilos Tucuman , อาร์เจนตินา , Staphylococcus aureus ATCC 25923 และแบคทีเรียแกรมลบ และสอง : E . coli ATCC 43895 o157h : 7 และเมื่อนำน้ำมันระเหย pseudomona ? .การคัดเลือกสายพันธุ์ถั่วเหลืองอาหารรักษา broth ( บริทตาเนีย , อาร์เจนตินา ) ที่ 4
C ก่อนที่จะใช้พวกเขาในการเพาะเลี้ยงหัวใจสมองแช่ ( BHI ) ( บริทตาเนีย , อาร์เจนตินา ) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส หรือ
ได้ทำสำเนาสามฉบับในจาน 96 ดีไมโคร - หมันใช้ Muller Hilton broth ( MH ) ( บริทตาเนียอาร์เจนตินา ) ด้วยการเพิ่มการเลือกธรรมชาติสารวานิลลิน ( ซิกม่า Aldrich ) ก่อนหน้านี้ละลายเต๊ะ ( DMSO ) และถูกใช้ในความเข้มข้นตั้งแต่ 0.2 ถึง 4.0 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ในมืออื่น ๆ , เจอรานิออล ( ซิกม่า Aldrich ) ซึ่งละลายในสารทวีน 80 ( Cicarelli , อาร์เจนตินา ) และใช้ในความเข้มข้นเดียวกัน 2 .4 มล มล  1 บ่อได้จึงฆ่า กับ 200 ml ของ MH Plus ที่สอดคล้องกันและสารธรรมชาติเชื้อแต่ละสายพันธุ์ที่ถ่ายทอดจากแบคทีเรีย นาล ความหนาแน่นของ 5.105 CFU ml  1 ( ซึ่งทำได้โดยการเพิ่ม 5 กรัมในแต่ละอย่างดีของ 107 CFU ml  1 ระงับใน - dicator เมื่อยใน MH ) การ microplates ถูกบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง
แตกต่างกันการควบคุมที่ใช้ในการศึกษานี้คือการใช้งานจึงฆ่ากับ MH ที่ไม่มี biopreservative และหัวเชื้อแบคทีเรียแต่ละสายพันธุ์ inordertoassessthegrowthofthepathogens ; andwells จึง lledwith MH MH บวกและบวก DMSO Tween 80 ตามลำดับ แบคทีเรียเชื้อแต่ละสายพันธุ์ เพื่อพิสูจน์ว่าไม่มีของตัวทำละลายต่อสารต้านจุลชีพโดยตัวเอง
2.2 .
เตรียมน้ำผลไม้สตรอเบอร์รี่ ( fragaria x ananassa ) weregrownandharvestedin
Sierra de los ผู้ปกครอง , Mar del Plata อาร์เจนตินา สตรอเบอรี่ destemmed และน้ำผลไม้ที่เตรียมด้วยน้ำผลไม้พาณิชย์ระบาย เมื่อผลไม้ที่ปลูกเชื้อและวิธีประยุกต์ สตรอเบอร์รี่ผลไม้ที่ถูกเก็บไว้ในโพลีโพรพิลีนflขอให้เป็นหมัน 5
เป็นเวลา 14 วัน เพื่อศึกษาวิวัฒนาการของ E . coli เป็นสมาชิก : H7 .
2.3การเป็นสมาชิก H7
: E . coli 2.3.1 . รักษาวัฒนธรรม และการเตรียมเชื้อ E . coli ATCC 43895 เป็นสมาชิก ) ใช้ วัฒนธรรมต็อกไว้ในซุปถั่วเหลืองอาหาร ( บริทตาเนีย , Buenos Aires , อาร์เจนตินา ) ที่ 4 ก่อนที่จะใช้
C , E . coli เป็นสมาชิก : ) เลี้ยงในแช่หัวใจสมอง ( BHI broth ( บริทตาเนีย ) ) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37
C 0.1 ml ส่วนลงตัวของวัฒนธรรมถูกย้ายไป 99 มิลลิลิตรของน้ำซุป BHI สอง consec - utive 24 ชั่วโมง ช่วงเวลาตามบ่มที่ 37
C ก่อนในแต่ละการทดลอง ระงับเชื้อแบคทีเรียถูกเตรียมโดยการเพิ่ม 10 มล. ofthee . colicultureto90mlofsterilepeptonatedwater ( 0.1 % w / v )
2.3.2 . เชื้อตัวอย่างที่ปลูกเชื้อ E . coli เป็นสมาชิกด้วย ) ก่อนการรับการรักษาจำลองการ manipu - ไม่เพียงพอ lationof thestrawberriesatpostharvest . tocarrythisout 100 mlof ใน bacterial suspension ที่เตรียมไว้ก่อนหน้านี้ เพิ่ม 10 มล. ของน้ำสตรอเบอรี่สดถึงจึงนาล เชื้อโรคความเข้มข้นของอาณานิคมเข้าสู่ระบบ ~ 5 สร้างหน่วย ( CFU ) มล.  1 ตัวอย่างควบคุมน้ำสตรอเบอรี่ดิบใส่ E . coli หลังการรักษาสตรอเบอร์รี่ผลไม้ที่ถูกเก็บไว้ในห้องเย็นที่ 5
เป็นเวลา 14 วัน
2.4 . การใช้หัวเชื้อน้ำผลไม้สตรอเบอร์รี่ให้ biopreservatives
เมื่อไมค์ในการ ตัดสินใจ เพื่อศึกษาผลของยาต้านจุลชีพของยาสีฟันในหลอดทดลอง และเจอรานิออล , ยาต้านจุลชีพตามธรรมชาติมาประยุกต์โดยตรงกับน้ำสตรอเบอร์รี่ attwodifferentconcentrationsforeachnaturalcompound :1and2 MIC ( van1mic van2mic วานิลลินและสำหรับและและ ger1mic ger2 - Mic สำหรับเจอรานิออลตามลำดับ ) น้ำที่ไม่มีการรักษา ( ดิบ ) คือใช้ตัวอย่างควบคุม
2.5 viablee การวิเคราะห์
จุลชีววิทยา colicountsweremonitoredasfollows : 0.1mlaliquotof แต่ละตัวอย่างถูกแพร่กระจายบนพื้นผิวของ eosin เมทธิลีนบลู ( EMB ) agarplatesandthecolonieswerecountedafterincubationat 37
C 24e48 hemb เป็นเลือกขนาดกลางที่ให้คุณสมบัติของปกติ E . coli อาณานิคม ; ผู้ที่มืดflกึ่งกลาง และมีเงาโลหะถูกถ่ายลงในบัญชี สุ่มเลือก E . coli อาณานิคมถูกหลอกจึง rmed ใช้ E . coli การสนทนาผ่านข้อความโต้ตอบแบบทันทีชุดทดสอบ chromobrit บริทตาเนีย , ) วัฒนธรรมการใช้สื่อทั้งหมดซื้อมาจากบริทตาเนีย . จุลินทรีย์นับถูกแสดงเป็น log CFU ml  1 .
2.6การวิเคราะห์ทางสถิติ
CRD ใช้ สามอิสระ runswereperformed . dataobtainedwasanalyzedusingrv . 2.12.2 . ( ทีมพัฒนาหลัก r 2011 ) ผลรายงานในบทความนี้จะหมายถึงค่าพร้อมด้วยข้อผิดพลาดมาตรฐาน ( kuehl , 2001 )การวิเคราะห์ความแปรปรวน ANOVA และทดสอบการ tukeyek เปรียบเทียบ ramer ใช้ signi จึงไม่สามารถประเมินความแตกต่างระหว่างการรักษา ( p < 0.05 ) .
รูปที่ 1 โครงสร้างทางเคมีของ ( ก ) และ ( ข ) เจอรานิออลวานิลลิน
.