2. Experimental2.1. Plant materialL

2. Experimental
2.1. Plant material
L. neesiana Kurz fruit was collected from Eastern Nepal during August–September 2005, from altitudes ranging from 1800 to 2000 m asl. The plant was identified by one of the authors (K. G.) and a voucher specimen was deposited at Herbs Production and Processing Co Ltd., Kathmandu (HPPCL), Nepal, as no. LN0805.

2.2. Isolation of essential oil
Fruit was air-dried and the essential oil was obtained by hydrodistillation with a Clevenger-type apparatus in the laboratories of HPPCL. The oil was stored at 4 °C in a sealed brown vial until analysis.

2.3. GC-MS analysis
The essential oil was analyzed by gas chromatography coupled with mass spectrometry (GC-MS) (Hewlett-Packard GC-MS, series 6890-5973, with a fused-silica-capillary column, DB-5, 30 m × 0.25 mm × 0.25 μm film thickness, from J&W Scientific, Folsom, CA, USA). GC-MS analysis carried out in the following conditions: carrier gas He; flow rate 0.8 mL/min; split ratio 1:10; injection volume 1 μL; injection temperature 250 °C; oven temperature 45 °C for 5 min and progressively from 45 °C to 220 °C at 3 °C/min, from 220 °C to 250 °C at 10 °C/min, and holding at 250 °C for 5 min. Ionization mode was electronic impact at 70 eV. Mass range was set from 40 to 450 Da. Identification of components involved comparison of their mass spectral fragmentation patterns with those stored in the data bank (Wiley library) and their retention indices.

GC-FID analysis was carried out on an Agilent 6840N gas chromatograph equipped with a FID detector. The analytical conditions were the same as those described for GC-MS; FID temperature at 220 °C. The percentage composition of the oil was computed by the normalization method from the GC peak areas, without correction factors.

2.4. NMR analysis
1H, 13C, COSY, TOCSY, HMQC and HMBC spectra were recorded on a Bruker AMX 300 spectrometer operating at 300.13 MHz at a temperature of 25 °C. Essential oil or reference compounds were dissolved in deuterated chloroform at a final concentration of 50 mg/mL in a 5-mm NMR tube, and the solvent signal 1H at 7.26 ppm was used for spectral calibration. 1H spectra were run with a standard pulse sequence with acquisition time 3.64 s, 16 scans, 6 s D1, spectral width 4500 Hz and FID resolution 0.14 Hz. 13C-NMR spectra were recorded at 75 MHz at a temperature of 25 °C. The essential oil (50 mg/mL) was dissolved in deuterated chloroform. The same spectral calibration as that used for 1H-NMR experiments was used. The time domain size was 64 K, spectral width 21,700 Hz, and FID resolution 0.33 Hz.

Quantitative 1H-NMR measurements were performed with caffeine as internal standard, because its 1H-NMR signals (methoxy groups and aromatic proton) are clearly distinguishable from those of essential oil components. A stock solution of caffeine in deuterated chloroform was prepared and 500 μL of this solution (3.1 × 10− 5 mol) were added to an NMR tube with 50 mg of the essential oil. Each measurement was performed in triplicate and the spectra were recorded as previously described.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. ทดลอง
2.1 พืชวัสดุ
L. neesiana ชั่งผลไม้รวบรวมจากเนปาลตะวันออกในช่วงเดือนสิงหาคม – 2005 กันยายน จากระดับความสูงตั้งแต่ 1800 ถึง 2000 m asl พืชที่ระบุ โดยผู้เขียน (คุณกรัม) และเป็นตัวอย่างสำคัญที่ฝากที่ผลิตสมุนไพรและกระบวน Co Ltd. กาฐมาณฑุ (HPPCL), เนปาล ไม่เป็น LN0805.

2.2 แยกน้ำมัน
ผลไม้ air-dried และน้ำมันหอมระเหยได้รับ โดย hydrodistillation กับ Clevenger ชนิดเครื่องมือในห้องปฏิบัติการของ HPPCL น้ำมันถูกเก็บไว้ที่ 4 ° C ในการคอนแทคสีน้ำตาลปิดผนึกจนวิเคราะห์

2.3 วิเคราะห์ GC MS
น้ำมันถูกวิเคราะห์ โดย chromatography ก๊าซควบคู่กับโตรเมทรี (GC-MS) (Hewlett-Packard GC-MS ชุด 6890-5973 คอลัมน์ fused นส่วนแรง DB-5, m × 0.25 × 0.25 μm ฟิล์มความหนา 30 มม. จาก J&W ทางวิทยาศาสตร์ โฟลซัม CA, USA) GC MS วิเคราะห์ดำเนินในเงื่อนไขต่อไปนี้: ผู้ขนส่งก๊าซเขา กระแสอัตรา 0.8 mL/min แบ่งอัตราส่วน 1:10 ฉีดปริมาณ 1 μL ฉีดอุณหภูมิ 250 ° C เตาอบอุณหภูมิ 45 ° C และความก้าวหน้า จาก 45 ° C ถึง 220 ° C ที่ 3 ° C/min, 220 ° c ถึง 250 ° C ที่ 10 ° C/นาที, 5 นาที และกดค้างไว้ที่ 250 ° C สำหรับ 5 นาทีโหมด Ionization ถูกผลกระทบอิเล็กทรอนิกส์ที่ 70 eV ช่วงโดยรวมถูกตั้งค่า 40 ถึง 450 รหัส Da. เปรียบเทียบเกี่ยวข้องกับส่วนประกอบของรูปแบบการกระจายตัวของมวลสเปกตรัมกับเก็บไว้ในธนาคารข้อมูล (Wiley ไลบรารี) และดัชนีเก็บข้อมูลของพวกเขา

วิเคราะห์ GC-FID ได้ดำเนินบน chromatograph การแก๊ส Agilent 6840N พร้อมจับสลัก เงื่อนไขวิเคราะห์ได้เหมือนกับที่อธิบายไว้ใน GC MS สลักอุณหภูมิที่ 220 องศาเซลเซียส มีคำนวณเปอร์เซ็นต์ส่วนประกอบของน้ำมัน โดยวิธีฟื้นฟูจาก GC สูงพื้นที่ โดยการแก้ไขปัจจัย

2.4 วิเคราะห์ NMR
1H, 13C โคซี่ TOCSY, HMQC และ HMBC แรมสเป็คตราถูกบันทึกไว้ในสเปกโตรมิเตอร์ Bruker AMX 300 ที่ปฏิบัติที่ MHz 300.13 อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส น้ำมันหอมระเหยหรือสารอ้างอิงที่ละลายในคลอโรฟอร์ม deuterated ที่ความเข้มข้นสุดท้ายของ 50 mg/mL ในหลอด NMR 5 มม. และสัญญาณตัวทำละลายที่ใช้สำหรับเทียบสเปกตรัม 1H ที่ 7.26 ppm แรมสเป็คตรา 1H ถูกเรียกใช้กับลำดับมาตรฐานชีพจรกับ s ซื้อเวลา 3.64 สแกน 16, 6 s ง 1 สเปกตรัมกว้าง 4500 Hz และสลักละเอียด 0.14 Hz บันทึกแรมสเป็คตรา 13C-NMR ที่ 75 MHz ที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส น้ำมันหอมระเหย (50 mg/mL) ที่ละลายในคลอโรฟอร์ม deuterated ใช้การปรับเทียบสเปกตรัมเดียวกันกับที่ใช้สำหรับการทดลอง NMR 1H ขนาดโดเมนเวลาเป็น 64 K ความกว้างของสเปกตรัม 21,700 Hz และความละเอียดสลัก 0.33 Hz

1H NMR เชิงปริมาณวัดได้ดำเนินการกับคาเฟอีนเป็นมาตรฐานภายใน เนื่องจากสัญญาณของ NMR 1H (กลุ่ม methoxy และโปรตอนหอม) จะแตกต่างอย่างชัดเจนจากส่วนประกอบของน้ำมันหอมระเหย ปัญหาหุ้นของคาเฟอีนในคลอโรฟอร์ม deuterated ถูกเตรียม และ 500 μL ของโซลูชันนี้ (3.1 × 10− 5 โมล) จะมีหลอด NMR กับ 50 มิลลิกรัมของน้ำมันหอมระเหย แต่ละวัดมีดำเนินการใน triplicate และแรมสเป็คตราถูกบันทึกก่อนหน้านี้เป็น อธิบาย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2 การทดลอง
2.1 วัสดุปลูก
ลิตร ผลไม้ neesiana สั้นถูกเก็บรวบรวมจากภาคตะวันออกเนปาลในช่วงเดือนสิงหาคมถึงเดือนกันยายนปี 2005 จากระดับความสูงตั้งแต่ 1800 ถึง 2000 เมตร ASL พืชที่ถูกระบุอย่างใดอย่างหนึ่งของผู้เขียน (KG) และตัวอย่างบัตรกำนัลถูกวางสมุนไพรที่ผลิตและการประมวลผล จำกัด , ฐมา ณ ฑุ (HPPCL), เนปาล, ที่ไม่มี LN0805 2.2 การแยกน้ำมันหอมระเหยผลไม้ถูกอากาศแห้งและน้ำมันหอมระเหยที่ได้รับโดยวิธีการกลั่นด้วยเครื่อง Clevenger ชนิดในห้องปฏิบัติการของ HPPCL น้ำมันที่ได้รับการจัดเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสในขวดสีน้ำตาลปิดผนึกจนการวิเคราะห์2.3 GC-MS การวิเคราะห์น้ำมันหอมระเหยที่ได้รับการวิเคราะห์โดยแก๊สโครมาคู่กับมวลสาร (GC-MS) (Hewlett-Packard GC-MS, ซีรีส์ 6890-5973 กับคอลัมน์ผสมซิลิกา-ฝอย DB-5, 30 เมตร× 0.25 มม× 0.25 ไมโครเมตรความหนาของฟิล์มจาก J & W วิทยาศาสตร์ Folsom, CA, USA) การวิเคราะห์ GC-MS ดำเนินการในเงื่อนไขต่อไปนี้ก๊าซพาพระองค์ อัตราการไหล 0.8 มิลลิลิตร / นาที; แยกสัดส่วน 01:10; ปริมาณการฉีด 1 ไมโครลิตร; อุณหภูมิฉีด 250 ° C; เตาอบอุณหภูมิ 45 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีและก้าวหน้าจาก 45 ° C ถึง 220 ° C ที่ 3 ° C / นาทีจาก 220 ° C ถึง 250 ° C ที่ 10 ° C / นาที, และการถือครองที่ 250 ° C เป็นเวลา 5 นาที โหมดไอออนไนซ์เป็นผลกระทบอิเล็กทรอนิกส์ที่ 70 eV ช่วงมวลที่ตั้งอยู่ 40-450 ดา บัตรประจำตัวของชิ้นส่วนที่เกี่ยวข้องกับการเปรียบเทียบรูปแบบของพวกเขามวลสเปกตรัมการกระจายตัวกับผู้ที่เก็บไว้ในธนาคารข้อมูล (ห้องสมุดไวลีย์) และดัชนีการเก็บรักษาของพวกเขาวิเคราะห์ GC-FID ได้รับการดำเนินการในก๊าซ Chromatograph Agilent 6840N พร้อมกับเครื่องตรวจจับ FID เงื่อนไขในการวิเคราะห์ได้เช่นเดียวกับที่อธิบายไว้สำหรับ GC-MS; อุณหภูมิ FID ที่ 220 ° C องค์ประกอบร้อยละของน้ำมันได้รับการคำนวณโดยวิธีการฟื้นฟูจากพื้นที่สูงสุด GC โดยไม่ต้องแก้ไขปัจจัย2.4 NMR วิเคราะห์1H, 13C, COSY, TOCSY, นำสารทั้งหมดและ HMBC สเปกตรัมที่ถูกบันทึกไว้ใน Bruker AMX 300 สเปกโตรมิเตอร์ปฏิบัติงานที่ 300.13 MHz ที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส น้ำมันหอมระเหยหรือการอ้างอิงสารที่ละลายในคลอโรฟอร์มดิวทีเรียมที่มีความเข้มข้นสุดท้ายของ 50 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรใน 5 มมหลอด NMR และ 1H สัญญาณตัวทำละลายที่ 7.26 พีพีเอ็มที่ใช้สำหรับการสอบเทียบสเปกตรัม สเปกตรัม 1H ได้ทำงานกับลำดับมาตรฐานชีพจรกับเวลาการเข้าซื้อกิจการ 3.64 วินาที, 16 สแกน 6 S D1, สเปกตรัมกว้าง 4500 Hz และความละเอียด FID 0.14 เฮิร์ตซ์ สเปกตรัม 13C-NMR ถูกบันทึกไว้ที่ 75 MHz ที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส น้ำมันหอมระเหย (50 mg / มิลลิลิตร) ถูกละลายในคลอโรฟอร์มดิวทีเรียม การสอบเทียบสเปกตรัมเดียวกันกับที่ใช้สำหรับการทดลอง 1H-NMR ถูกนำมาใช้ ขนาดโดเมนเวลาเป็น 64 K, สเปกตรัมกว้าง 21,700 Hz, และความละเอียด FID 0.33 Hz วัด 1H-NMR เชิงปริมาณได้ดำเนินการที่มีคาเฟอีนเป็นมาตรฐานภายในเพราะสัญญาณ (กลุ่ม methoxy และโปรตอนหอม) 1H-NMR ที่เห็นได้ชัดว่าแตกต่างจากที่ ส่วนประกอบของน้ำมันหอมระเหย การแก้ปัญหาสต็อกของคาเฟอีนในคลอโรฟอร์มดิวทีเรียมได้รับการเตรียมความพร้อมและ 500 ไมโครลิตรของการแก้ปัญหานี้ (3.1 × 10 5 โมเลกุล) ถูกเพิ่มเข้าไปในหลอด NMR 50 มิลลิกรัมของน้ำมันหอมระเหย วัดแต่ละคนได้ดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่าและสเปกตรัมที่ถูกบันทึกไว้ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . ทดลอง
2.1 . วัสดุปลูก neesiana ( L .
ผลไม้รวบรวมจากเนปาลตะวันออกในช่วงเดือนสิงหาคม - กันยายน 2548 จากระดับความสูงตั้งแต่ 1 , 800 ถึง 2 , 000 เมตร asl . พืชที่ถูกระบุโดยหนึ่งของผู้เขียน ( K . G ) และคูปองตัวอย่างที่ถูกฝากไว้ที่ผลิตสมุนไพรและการประมวลผล Co Ltd . , Kathmandu ( hppcl ) , เนปาล , หมายเลข ln0805 .

. . การแยก
น้ำมันหอมระเหยผลไม้แห้งน้ำมันหอมระเหยได้โดยวิธีการต้มกลั่นกับเคลวินเจอร์ประเภทเครื่องมือในห้องปฏิบัติการของ hppcl . น้ำมันที่ถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 องศา C ในการปิดผนึกขวดสีน้ำตาลจนถึงการวิเคราะห์

2.3 การวิเคราะห์ GC-MS
น้ำมันหอมระเหยโดยใช้แก๊สโครมาโตกราฟีควบคู่กับ Mass Spectrometry ( GC-MS ) ( Hewlett Packard และชุด 6890-5973 กับซิลิกาแคพิลลารีคอลัมน์db-5 30 m × 0.25 มม. × 0.25 μเมตร ความหนาฟิล์มจาก J & W ทางวิทยาศาสตร์ ฟอลซัม , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา การวิเคราะห์ GC-MS ทำการในเงื่อนไขต่อไปนี้ : บริษัทขนส่งก๊าซเขา ; อัตราการไหล 0.8 มิลลิลิตรต่อนาที อัตราส่วน 1 : 10 ; แยก ; เล่ม 1 μผมฉีด ; ฉีดอุณหภูมิ 250 องศา C ; เตาอบที่อุณหภูมิ 45 ° C เป็นเวลา 5 นาทีและมีความก้าวหน้าจาก 45 ° C 220 องศา C ที่ 3 ° C / นาที จาก 220 เมตร C ถึง 250 องศา C ที่ 10 ° C / นาทีค้างที่ 250 องศา C เป็นเวลา 5 นาที ไอโหมดผลกระทบอิเล็กทรอนิกส์ที่ 70 ปีที่ . ช่วงมวลถูกกำหนดจาก 40 ถึง 450 ดา . รหัสขององค์ประกอบที่เกี่ยวข้องการเปรียบเทียบของมวลสเปกตรัมของรูปแบบกับข้อมูลที่เก็บไว้ในธนาคาร ( ห้องสมุดนิ่ง ) และดัชนีการเก็บรักษาของพวกเขา วิเคราะห์ gc-fid

ได้ดำเนินการในด้าน 6840n แก๊สโครมาโตกราฟพร้อมกับเครื่องฟิต .เงื่อนไขที่ใช้ในการวิเคราะห์คือ เหมือนที่อธิบายไว้สำหรับระยะเวลา ; สลัก อุณหภูมิ 220 องศา ค่าองค์ประกอบของน้ำมันที่ถูกคำนวณโดยวิธี GC สูงสุดจากการฟื้นฟูพื้นที่ โดยไม่มีปัจจัยการแก้ไข

2.4 . การวิเคราะห์
1 h 13C NMR , , สบาย ๆ , tocsy , HMQC HMBC และสเปกตรัมที่ได้ถูกบันทึกไว้ในกล้องผ่าตัด 300.13 BRUKER AMX 300 MHz ที่อุณหภูมิ 25 องศาสารประกอบน้ำมันหรือการอ้างอิงที่จำเป็น deuterated ถูกละลายในคลอโรฟอร์มที่ความเข้มข้นสุดท้าย 50 มก. / มล. ในหลอด 5-mm NMR และตัวทำละลายสัญญาณ 1 ที่ 7.26 ppm ใช้สำหรับการสอบเทียบ 1 วัดสเปคตรัมวิ่งกับลำดับชีพจรกับมาตรฐานการสแกนเวลา 3.64 , 16 , 6 S D1 สเปกตรัมกว้าง 4 , 500 Hz , และความละเอียด FID 0.14 เฮิร์ต13c-nmr สเปกตรัมได้ถูกบันทึกไว้ที่ 75 MHz ที่อุณหภูมิ 25 ° C น้ำมัน ( 50 mg / ml ) deuterated ละลายในคลอโรฟอร์ม เดียวกันที่ใช้สำหรับการสอบเทียบ 1h-nmr การทดลองใช้ ขนาดโดเมนเวลา 64 K สเปกตรัมกว้าง มีประตูเชื่อมระหว่าง Hz และความละเอียด FID 0.33 Hz .

1h-nmr การวัดเชิงปริมาณได้ด้วยคาเฟอีนเป็นมาตรฐานภายในเพราะมัน 1h-nmr สัญญาณ ( กลุ่มเมท็อกซี่และหอมโปรตอน ) จะสามารถบอกความแตกต่างได้ชัดเจนจากส่วนประกอบของน้ำมันหอมระเหย หุ้นโซลูชั่นของคาเฟอีนใน deuterated คลอโรฟอร์มได้เตรียมและ 500 μผมของโซลูชั่นนี้ ( 1 × 10 − 5 mol ) ถูกเพิ่มไปยังหลอด NMR 50 มิลลิกรัมของน้ำมันระเหยแต่ละวัดมีการปฏิบัติทั้งสามใบ และสเปกตรัมได้ถูกบันทึกไว้ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้