A total of 3×105 293T cells were tr

A total of 3×105 293T cells were transfected with 1.5 mg of the four protease-recombinant plasmids at 0, 0.6 and 2 mM tipranavir. Twentyfour hours post-transfection, GFP-positive cells were sorted, harvested and lysed. Protein quantification was performed using the bicinchoninic acid assay (Pierce). Protein samples were run using 4%–12% polyacrylamide
electrophoresis gels (Invitrogen) and blotted onto nitrocellulose membranes using the iBlotTM Dry Blotting System (Invitrogen). After blocking, membranes were incubated overnight with rabbit polyclonal antibodies against eIF4GI and PABP or monoclonal antibodies against GFP, HIV-1 protease, actin and REF-1. After washing, membranes were incubated with antirabbit or antimouse goat antibodies labelled with horseradish peroxidase for 50 min and then revealed with ECL-Plus
solution (Amersham Biosciences).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทั้งหมด 3 × 105 293T เซลล์ถูก transfected กับ 1.5 มิลลิกรัม plasmids recombinant โปรติเอสสี่ที่ทิปรานาเวียร์ 0, 0.6 และ 2 มม. Twentyfour ชั่วโมงหลัง transfection, GFP บวกเซลล์เรียงลำดับ การเก็บเกี่ยว และนาทีที่ 37uc โปรตีนนับได้ดำเนินการใช้ทดสอบกรด bicinchoninic (Pierce) ตัวอย่างโปรตีนที่ถูกเรียกใช้โดยใช้การตรวจสอบวิเคราะห์ 4% – 12%อิเจล (Invitrogen) และ blotted บนไนโตรเซลลูโลสเยื่อใช้ iBlotTM ระบบการ blotting วิธีแห้ง (Invitrogen) หลังบล็อก เยื่อได้รับการกกค้างคืนกับกระต่ายโพลีแอนติบอดี้ต่อ eIF4GI และ PABP หรือแอนติบอดี monoclonal GFP โปรติเอสเอชไอวี-1 แอกติน และ REF 1 หลังจากซัก เยื่อได้รับการกกกับแพะ antirabbit หรือ antimouse แอนติบอดีติดฉลากพร้อมฮอสเด็ด ๆ สำหรับ 50 นาที และจากนั้น เปิดเผยกับ ECL-พลัสโซลูชั่น (Amersham ออก)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

รวม 3 × 105 293T เซลล์ถูก transfected กับ 1.5 มิลลิกรัมในสี่ของพลาสมิดน้ำย่อย-recombinant ที่ 0, tipranavir 0.6 และ 2 mm Twentyfour ชั่วโมงหลัง transfection เซลล์ GFP บวกถูกจัดเรียงเก็บเกี่ยวและ lysed โปรตีนปริมาณที่ได้ดำเนินการโดยใช้การทดสอบกรด bicinchoninic (เพียร์ซ) ตัวอย่างโปรตีนทำงานโดยใช้ 4% -12% polyacrylamide
เจลอิเล็ก (Invitrogen) และเปื้อนบนเยื่อ nitrocellulose ใช้ iBlotTM ระบบซับแห้ง (Invitrogen) หลังจากที่ปิดกั้นเยื่อถูกบ่มค้างคืนกับแอนติบอดีกระต่ายโพลีกับ eIF4GI และ PABP หรือโคลนอลแอนติบอดีต่อต้าน GFP, HIV-1 น้ำย่อยโปรตีนและ REF-1 หลังการล้างหน้า