These 50-μL reactions were performe

These 50-μL reactions were performed
using Expand High Fidelity polymerase (Boehringer, Mannheim)
according to the manufacturer’s specifications using the following
thermo cycling program: 1U (1 min, 94°C), 25U (30 s, 92°C; 60 s, 57°C
and 45 s, +1 s/cycle, 68°C) and 1U (5 min, 68°C). PCR amplification from plasmid controls was performed by direct use of the CTO primers
using the conditions described above except that 5 ng of DNA was
used as template and reaction volumes were 25 μL. All reactions were
overlaid with an equal volume of mineral oil (Sigma, molecular biology
grade) and run on Thermal Cycler. Final PCR products were examined
by agarose gel electrophoresis (1.5% agarose, 0.5 UTBE) and stained
with ethidium bromide for visualization upon UV illumination.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ดำเนินปฏิกิริยาเหล่านี้ 50-μLใช้ขยายความชัดสูงพอลิเมอเรส (Boehringer มา)ตามข้อกำหนดของผู้ผลิตที่ใช้ต่อไปนี้โปรแกรมขี่จักรยานเทอร์โม: 1U (1 นาที 94° C), 25U (30 s, 92° C; s 60, 57° Cและ 45 s, s + 1/รอบ, 68 ° C) และ 1U (5 นาที 68 ° C) ทำ PCR ขยายจาก plasmid ควบคุม โดยการใช้ไพรเมอร์ CTO โดยตรงโดยใช้เงื่อนไขที่อธิบายไว้ข้างต้นยกเว้นที่ 5 ng ของดีเอ็นเอได้ใช้เป็นไดรฟ์ข้อมูลต้นแบบและปฏิกิริยา 25 μL ปฏิกิริยาทั้งหมดได้overlaid ด้วยปริมาณเท่ากันของน้ำมัน (ซิก อณูชีววิทยาเกรด) และเรียกใช้บน Cycler ความร้อน มีการตรวจสอบผลิตภัณฑ์ PCR ขั้นสุดท้ายโดย agarose เจ electrophoresis (1.5% agarose, 0.5 UTBE) และสีมีโบรไมด์ ethidium สำหรับแสดงภาพประกอบเพลงเมื่อรัศมีรังสียูวี

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ปฏิกิริยาเหล่านี้ 50
ไมโครลิตรได้ดำเนินการโดยใช้ขยายโพลิเมอร์ความจงรักภักดีสูง(Boehringer นน์ไฮม)
ตามข้อกำหนดของผู้ผลิตใช้ต่อไปนี้โปรแกรมการขี่จักรยานเทอร์โม: 1U (1 นาที, 94 ° C) 25U (30 วินาที, 92 ° C; 60 s 57 ° C และ 45 วินาที, 1 s / รอบ 68 ° C) และ 1U (5 นาที, 68 ° C) ขยาย PCR จากพลาสมิดควบคุมได้ดำเนินการโดยใช้โดยตรงของไพรเมอร์ CTO ใช้เงื่อนไขที่กล่าวไว้ข้างต้นยกเว้นว่า 5 งะดีเอ็นเอถูกนำมาใช้เป็นแม่แบบและปฏิกิริยาปริมาณ25 ไมโครลิตร ปฏิกิริยาทั้งหมดถูกบุด้วยปริมาณที่เท่ากันของน้ำมันแร่(ซิกอณูชีววิทยาชั้นประถมศึกษาปี) และทำงานบนความร้อน Cycler ผลิตภัณฑ์ PCR รอบชิงชนะเลิศมีการตรวจสอบโดยข่าวคราวagarose (1.5% agarose, 0.5 UTBE) และการย้อมสีด้วย ethidium bromide สำหรับการแสดงเมื่อส่องสว่างรังสียูวี

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เหล่านี้ 50 - μ L ) มีการขยายการใช้ปฏิกิริยา
High Fidelity ( Boehringer Mannheim )
ตามข้อกําหนดของผู้ผลิตใช้ต่อไปนี้
เทอร์โมจักรยานโปรแกรม : วิด ( 1 นาที 94 ° C ) , 25u ( 30 S 92 องศา C ; 60 57 องศา C
45 วินาที 1 s / รอบ 68 ° C ) และวิด ( 5 นาที 68 ° C ) เทคนิคการควบคุมแบบจากพลาสมิดโดย ใช้โดยตรงของไพรเมอร์
)การใช้เงื่อนไขที่อธิบายไว้ข้างต้นยกเว้นที่ 5 ของดีเอ็นเอถูกใช้เป็นแม่แบบ และปริมาณ
ปฏิกิริยาเท่ากับ 25 μล. ทุกปฏิกิริยา
หุ้มด้วยปริมาณเท่ากันของน้ำมันแร่ ( Sigma , อณูชีววิทยา
เกรด ) และใช้ความร้อนรอบ . ผลิตภัณฑ์ PCR สุดท้ายศึกษา
โดย ( gel electrophoresis ( ร้อยละ 1.5 , 0.5 utbe ) และเปื้อน
ทิเดียมโบรไมด์ สำหรับภาพบนด้วยแสงยูวี