Cell lines were cultured in iscove'

Cell lines were cultured in iscove's modified dulbecco's medium (IMDM) supplemented with 10 % fetal bovine serum (FBS) and 100 IU• mL–1 penicillin, and 100 mg• mL–1 streptomycin. When the cells reached 70 % to 80 % confluence, they were harvested and plated for consequent passages or for kaffir lime leaf fractional extract
treatments. Cells were trypsinised, resuspended in media and counted using a haemocytometer. The cell number was adjusted to 40 000 cells • mL–1 with media and added to 96-well. After 5 d incubation at 37 °C in 5 % CO2, 25 μL of MTT 2 mg• mL–1 was added. After an additional incubation time for 4 h at 37 °C in 5 % CO2, the cells were solubilised using 100 μL of a 20 % sodium dodecyl sulphate (SDS) solution in purified water and dimethylformamide (1 : 1) adjusted to pH 4.7. This step to lyse the cells and dissolve the precipitated formazan. The absorbance was read in a plate reader at 600 nm. The higher the absorbance value, the more converted formazan is present and so the higher the number of viable, proliferating cells. Note the outer edge of the plate is not used to test compounds to avoid edge effects.
MTT assay (Microculture Tetrazolium Salt) is a colorimetric test based on the reduction of yellow MTT to purple formazan by cellular dehydrogenases, which are only active in living, proliferating cells. This test is capable of measuring viability, proliferation, and cell activation. The more converted formazan present, the higher the number of viable and proliferating cells.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เซลล์เพาะเลี้ยงใน iscove ของการปรับเปลี่ยน Dulbecco ของกลาง (IMDM) เสริมด้วย 10% ของทารกในครรภ์วัวซีรั่ม (FBS) และ 100 IU • ML-1 penicillin และ 100 มิลลิกรัม• ML-1 streptomycin เมื่อเซลล์ถึง 70% ถึง 80% บรรจบกันพวกเขาเก็บเกี่ยวและชุบสำหรับทางเดินที่เกิดขึ้นหรือมะกรูดใบมะนาวสารสกัดจากเศษ
รักษา เซลล์ที่ถูก trypsinised, resuspended ในสื่อนับใช้สไลด์นับเม็ดเลือด จำนวนเซลล์ที่ได้รับการปรับให้ 40 000 เซลล์• ML-1 กับสื่อและเพิ่มไป 96 หลุม หลังจาก 5 D บ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสใน 5% CO2 25 ไมโครลิตรของ MTT 2 มิลลิกรัม• ML-1 ถูกเพิ่มเข้ามา หลังจากเวลาฟักตัวเพิ่มเติมสำหรับ 4 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสใน 5% CO2 เซลล์ที่ถูก solubilised ใช้ 100 ไมโครลิตรของ 20% โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต (SDS) สารละลายในน้ำบริสุทธิ์และ Dimethylformamide (1: 1) ปรับค่าพีเอช 4.7 ขั้นตอนนี้จะ lyse เซลล์และละลาย formazan ตกตะกอน ค่าการดูดกลืนได้อ่านในเครื่องอ่านแผ่นที่ 600 นาโนเมตร ค่าการดูดกลืนแสงที่สูงกว่าที่ formazan แปลงมากขึ้นในปัจจุบันและเพื่อให้สูงกว่าจำนวนของการทำงานเซลล์ชนิด หมายเหตุขอบด้านนอกของแผ่นไม่ได้ใช้สารประกอบทดสอบเพื่อหลีกเลี่ยงผลกระทบขอบ.
MTT ทดสอบ (microculture tetrazolium เกลือ) คือการทดสอบสีขึ้นอยู่กับการลดลงของ MTT สีเหลืองเพื่อ formazan สีม่วงโดย dehydrogenases โทรศัพท์มือถือซึ่งเป็นเพียงการใช้งานในที่อยู่อาศัย proliferating เซลล์ การทดสอบนี้มีความสามารถในการวัดศักยภาพในการขยายและการกระตุ้นเซลล์ แปลงมากขึ้นในปัจจุบัน formazan ที่สูงกว่าจำนวนของเซลล์ทำงานได้และ proliferating

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เซลล์เพาะเลี้ยงในการ iscove ดัลเบโค่ปานกลาง ( imdm ) เสริมด้วย 10% เซรั่มและทารกในครรภ์ ( FBS ) และ 100 IU - มล – 1 เพนนิซิลิน และ 100 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ( 1 - จัง . เมื่อเซลล์ถึง 70% ถึง 80% บรรจบ พวกเขาเก็บเกี่ยวและชุบสำหรับผลข้อความ หรือใบมะกรูด ส่วนสกัดการรักษา เซลล์มี trypsinised resuspended , สื่อและนับการใช้ haemocytometer . เซลล์จำนวนเซลล์ - ปรับ 40 000 มิลลิลิตร ( 1 กับสื่อและเพิ่ม 96 ด้วย หลังจาก 5 D บ่มที่ 37 ° C ในคาร์บอนไดออกไซด์ 5% , 25 μ L ของ MTT 2 มิลลิกรัม - 1 มล. ) เพิ่ม หลังจากเวลาในการบ่มเพิ่มเติมสำหรับ 4 ชั่วโมง 37 ° C ในคาร์บอนไดออกไซด์ 5 เปอร์เซ็นต์ เซลล์มี solubilised ใช้ 100 μ l 20% โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ( SDS ) โซลูชั่นในการล้างพิษบริสุทธิ์และน้ำ ( 1 : 1 ) ค่า pH 4.7 . ขั้นตอนนี้จะทำให้เซลล์และละลายตกตะกอนปฏิบัติการ . นได้อ่านอ่านป้ายที่ 600 นาโนเมตร สูงกว่าค่าการดูดกลืนแสง ยิ่งแปลงปฏิบัติการเป็นปัจจุบันและสูงกว่าตัวเลขของรัฐ proliferating เซลล์ หมายเหตุขอบนอกของจานไม่ใช้ทดสอบสารเพื่อหลีกเลี่ยงขอบผลกระทบMTT assay ( เกลือ tetrazolium microculture ) เป็นการทดสอบโดยการวัดสี ตามการลดลงของ MTT สีเหลืองกับสีม่วงโดยโทรศัพท์มือถือปฏิบัติการเอนไซม์ดีไฮโดรจีเนส ซึ่งเป็นเพียงการใช้งานในชีวิต proliferating เซลล์ การทดสอบนี้จะสามารถวัดความมีชีวิตและการกระตุ้นเซลล์ . ยิ่งแปลงปฏิบัติการปัจจุบัน สูงกว่าตัวเลขของการวางอนาคต และ proliferating เซลล์