Parasite burden was determined by q

Parasite burden was determined by quantitative real-time PCR
(qPCR). DNA was purified from cardiac biopsies with QIAamp DNA
Mini Kit following the manufacturer’s instructions. A standard
curve was generated using dog DNA spiked with serial dilutions
of T. cruzi DNA. PCR reactions contained 100 ng of dog DNA, 0.5 m
of primers TCZ-F 5-GCTCTTGCCCACAMGGGTGC-3 and TCZ-R 5-
CCAA- GCAGCGGATAGTTCAGG-3, and 10 L of EXPRESS SYBR
GreenERTM qPCR Supermix (Invitrogene) in a final volume of 20 L.
Reactions were run in triplicate on an EcoTM Real-Time PCR System
(Illumina, USA) as follows: 50 ◦C for 2 min and 40 cycles of 95 ◦C for
10 s, 55 ◦C for 15 s 72 ◦C for 5 s. High-resolution melting curves were
determined at the end of the amplification. The standard curve had
a slope of
−3.221, R2 = 0.9989 and an efficiency of 104.35%.

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ภาระถูกกำหนดโดยปริมาณปรสิตแบบ PCR
( qpcr ) ดีเอ็นเอบริสุทธิ์จากเนื้อเยื่อหัวใจกับ qiaamp ดีเอ็นเอ
มินิชุดตามคําแนะนําของผู้ผลิต เส้นโค้งมาตรฐาน
ถูกสร้างขึ้นโดยใช้ดีเอ็นเอสุนัขที่ได้ถูกแทงด้วยซีเรียลเจือจาง
ของ cruzi ดีเอ็นเอ ปฏิกิริยา PCR ที่มีอยู่ 100 นาโนดีเอ็นเอสุนัข , 0.5  M
5 ไพรเมอร์ tcz-f  - gctcttgcccacamgggtgc-3  tcz-r  -
5 และccaa - gcagcggatagttcagg-3  และ 10  l บริการ SYBR
greenertm qpcr supermix ( invitrogene ) ในเล่มสุดท้ายของ 20  L .
ปฏิกิริยาวิ่งทั้งสามใบในเวลาจริงระบบ ecotm )
( Illumina , USA ) ดังนี้ : 50 ◦ C 2 นาทีและ 40 รอบ 95 ◦ C
10 , 55 ◦ C 15 s 72 ◦ C เป็นเวลา 5 วินาที ความละเอียดสูงละลายเส้นโค้งถูก
ตัดสินในตอนท้ายของการขยาย .เส้นโค้งมาตรฐานมีความลาดชัน

− 3.221 , R2 = 0.9989 และประสิทธิภาพของ 104.35 %