Measurement of cell membrane integr

Measurement of cell membrane integrity has been widely used to assess chemical cytotoxity. Several assays are available for determining cell membrane integrity including differential labeling techniques using neutral red and trypan blue dyes or fluorescent compounds such as propidium iodide. Other common methods for assessing cytotoxicity are enzymatic “release” assays which measure the extracellular activities of lactate dehydrogenase (LDH), adenylate kinase (AK), or glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) in culture medium. However, all these assays suffer from several practical limitations, including multiple reagent additions, scalability, low sensitivity, poor linearity, or requisite washes and medium exchanges. We have developed a new cytotoxicity assay which measures the activity of released intracellular proteases as a result of cell membrane impairment. It allows for a homogenous, one-step addition assay with a luminescent readout. We have optimized and miniaturized this assay into a 1536-well format, and validated it by screening a library of known toxins from the National Toxicology Program (NTP) using HEK 293 and human renal mesangial cells by quantitative high-throughput screening (qHTS). Several known and novel membrane disrupters were identified from the library, which indicates that the assay is robust and suitable for large scale library screening. This cytotoxicity assay, combined with the qHTS platform, allowed us to quickly and efficiently evaluate compound toxicities related to cell membrane integrity.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ใช้วัดความสมบูรณ์ของเซลล์เมมเบรนเพื่อประเมิน cytotoxity เคมีอย่างกว้างขวาง Assays ต่าง ๆ มีการกำหนดความสมบูรณ์ของเซลล์เมมเบรนรวมถึงเทคนิคการติดฉลากส่วนที่ใช้สีแดงเป็นกลาง และสี trypan blue หรือสารเรืองแสงเช่นไอโอไดด์ propidium วิธีการอื่น ๆ ทั่วไปสำหรับประเมิน cytotoxicity มีเอนไซม์ในระบบ "ปล่อย" assays ซึ่งวัดกิจกรรม extracellular lactate dehydrogenase (LDH), adenylate kinase (AK), หรือ dehydrogenase glyceraldehyde-3-ฟอสเฟต (GAPDH) ในวัฒนธรรม อย่างไรก็ตาม assays เหล่านี้ประสบจากการจำกัดการปฏิบัติหลาย รวมทั้งหลายเพิ่มเติมรีเอเจนต์ ขนาด ความไวต่ำ แบบดอกไม้ไม่ดี หรือ washes จำเป็น และกลางแลกเปลี่ยน เราได้พัฒนาวิเคราะห์ cytotoxicity ใหม่ที่วัดการ proteases intracellular ออกจากเซลล์เมมเบรนผล จะช่วยให้การวิเคราะห์การเพิ่มขั้นตอนเดียวให้ มี luminescent readout เราได้ปรับ miniaturized วิเคราะห์นี้ในรูปแบบดี 1536 และถูกตรวจสอบ โดยการตรวจคัดกรองไลบรารีของพิษจากชาติพิษวิทยาโปรแกรม (NTP) ใช้ HEK 293 และเซลล์ไต mesangial มนุษย์ โดยคัดกรองสูงสามารถประมวลผลได้เชิงปริมาณ (qHTS) Disrupters เมมเบรนรู้จัก และนวนิยายหลายที่ระบุจากในไลบรารี ซึ่งบ่งชี้ว่า การวิเคราะห์มีประสิทธิภาพ และเหมาะสมสำหรับคัดกรองไลบรารีขนาดใหญ่ ทดสอบนี้ cytotoxicity รวมกับแพลตฟอร์ม qHTS ให้เราอย่างรวดเร็ว และมีประสิทธิภาพประเมิน toxicities ซับซ้อนที่เกี่ยวข้องกับความสมบูรณ์ของเซลล์เมมเบรน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวัดความสมบูรณ์ของเยื่อหุ้มเซลล์ได้รับการใช้กันอย่างแพร่หลายในการประเมินสารเคมี cytotoxity ตรวจหลายที่มีอยู่สำหรับการกำหนดความสมบูรณ์ของเยื่อหุ้มเซลล์รวมทั้งเทคนิคการติดฉลากที่แตกต่างกันโดยใช้สีแดงที่เป็นกลางและ Trypan สีฟ้าหรือสารเรืองแสงเช่นไอโอไดด์ propidium วิธีการทั่วไปอื่น ๆ สำหรับการประเมินความเป็นพิษเป็นเอนไซม์ "ปล่อย" การตรวจวัดกิจกรรมนอกของนม dehydrogenase (LDH) ไคเนสเลท (AK) หรือ dehydrogenase glyceraldehyde-3-ฟอสเฟต (GAPDH) ในอาหารเลี้ยงเชื้อ อย่างไรก็ตามการตรวจเหล่านี้ต้องทนทุกข์ทรมานจากข้อ จำกัด ในทางปฏิบัติหลายประการรวมถึงการเพิ่มสารหลาย scalability ความไวต่ำเชิงเส้นไม่ดีหรือล้างที่จำเป็นและการแลกเปลี่ยนกลาง เราได้มีการพัฒนาการทดสอบความเป็นพิษซึ่งมาตรการใหม่กิจกรรมของโปรตีเอสปล่อยออกมาภายในเซลล์เป็นผลมาจากการด้อยค่าของเซลล์เมมเบรน มันช่วยให้เป็นเนื้อเดียวกัน, การทดสอบนอกจากนี้ขั้นตอนเดียวด้วยการอ่านเรืองแสง เราได้เพิ่มประสิทธิภาพและขนาดเล็กของการทดสอบนี้เป็นรูปแบบ 1536 ดีและตรวจสอบได้โดยการตรวจคัดกรองห้องสมุดของสารพิษที่รู้จักจากโปรแกรมพิษวิทยาแห่งชาติ (NTP) โดยใช้ HEK 293 มนุษย์และเซลล์ mesangial ไตโดยการตรวจคัดกรองสูงผ่านเชิงปริมาณ (qHTS) หลายคนที่รู้จักและ disrupters เยื่อนวนิยายถูกระบุจากห้องสมุดซึ่งบ่งชี้ว่าการทดสอบเป็นที่แข็งแกร่งและเหมาะสำหรับการตรวจคัดกรองห้องสมุดขนาดใหญ่ นี้การทดสอบความเป็นพิษรวมกับแพลตฟอร์ม qHTS อนุญาตให้เราได้อย่างรวดเร็วและมีประสิทธิภาพประเมินความเป็นพิษของสารประกอบที่เกี่ยวข้องกับความสมบูรณ์ของเยื่อหุ้มเซลล์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวัดของเยื่อเซลล์สมบูรณ์ได้ถูกใช้อย่างกว้างขวางเพื่อประเมิน cytotoxity เคมี หลายวิธีที่ใช้ได้สำหรับการกำหนดความสมบูรณ์ของเยื่อหุ้มเซลล์รวมถึงการติดฉลากเทคนิคการใช้สีสีฟ้าสีแดงที่เป็นกลางและไตรแพนหรือสารเรืองแสงเช่น propidium ไอโอไดด์ดิฟเฟอเรนเชียลวิธีการทั่วไปอื่น ๆเพื่อประเมินความเป็นพิษต่อเซลล์มีเอนไซม์ " ปล่อย " ) ซึ่งสามารถวัดกิจกรรมของ lactate dehydrogenase ( LDH ) , ดินิ ไคเนส ( AK ) หรือ glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase ( gapdh ) ในอาหารเลี้ยงเชื้อ . อย่างไรก็ตาม วิธีการเหล่านี้ทั้งหมดประสบจากข้อปฏิบัติต่าง ๆ รวมทั้งหลายสารเคมีที่ใช้เพิ่ม ความยืดหยุ่น ความไวต่ำถึงยากจน หรือจำเป็นล้างและการแลกเปลี่ยน ) เราได้พัฒนาวิธีใหม่ต่อ ซึ่งวัดกิจกรรมของออกภายในเซลล์เพื่อผลของเยื่อเซลล์เสื่อม มันช่วยให้ขั้นตอนเดียว ( homogenous และกับการอ่านข้อมูลเรืองแสง . เรามีวิธีที่ดีที่สุดและขนาดเล็กนี้เป็นคู่ด้วยรูปแบบและตรวจสอบได้ โดยการคัดเลือกห้องสมุดของสารพิษที่รู้จักกันจากโปรแกรมพิษวิทยาแห่งชาติ ( NTP ) ใช้ hek แล้วมนุษย์มีโปรตีนในเซลล์ไตช่วยปริมาณการ qhts ) หลายที่รู้จักและ disrupters เยื่อนวนิยายถูกระบุจากห้องสมุด ซึ่งบ่งชี้ว่าแบคทีเรียที่แข็งแกร่ง และเหมาะสมสำหรับการคัดกรองห้องสมุดขนาดใหญ่ วิธีนี้เซลล์ ,รวมกับ qhts แพลตฟอร์ม ให้เราได้อย่างรวดเร็วและมีประสิทธิภาพการประเมินความเป็นพิษที่เกี่ยวข้องกับเยื่อหุ้มเซลล์ สารสมบูรณ์